蛋白質(zhì)遷移表.pdf

Jinsite Corporation Tel 025 84347333 Fax 025 84347334 email order ExpressTM PAGE Gels Technical No 0210 Version 04032007 I 產(chǎn)品描述 1 II 凝膠選購指導(dǎo) 1 III 蛋白質(zhì)遷移表 2 IV 適配電泳槽 2 V 相關(guān)產(chǎn)品 2 VI 儲存條件 3 VII 預(yù)制膠使用說明 3 VIII 預(yù)制膠使用實(shí)例 4 IX 常見問題及解決方法 4 I 產(chǎn)品描述 金思特 ExpressTM PAGE Gels 即預(yù)制聚丙烯酰胺蛋白電泳膠 是采用金思特專利技術(shù)制成 ExpressTM電泳 凝膠具有保質(zhì)期長 分辨率高 電泳速度快 轉(zhuǎn)膜效率高等特點(diǎn) ExpressTM PAGE Gels 具有以下主要特點(diǎn) 是您進(jìn)行蛋白質(zhì)分析的最佳選擇 易于使用 不需要拔梳子或撕膠帶 安裝簡便 保質(zhì)期長 二年 存放于4 分辨率高 使用獨(dú)特的電泳緩沖液可得到出色的分離效果和高分辨率的條帶 電泳速度快 30至45分鐘電泳時(shí)間 快速得到結(jié)果 轉(zhuǎn)膜效率高 利用半干技術(shù) 30分鐘完成全部蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移 II 凝膠選購指導(dǎo) 編號編號 丙烯酰丙烯酰 胺胺濃度濃度 孔數(shù)孔數(shù) 上樣上樣體積體積 電泳緩沖液電泳緩沖液 轉(zhuǎn)印緩沖液轉(zhuǎn)印緩沖液 分離范圍分離范圍 MG008W10 8 10 50 l Tris MOPS SDS Tris Bicine 205 45 kDa MG010W10 10 10 50 l Tris MOPS SDS Tris Bicine 205 24 kDa MG012W10 12 10 50 l Tris MOPS SDS Tris Bicine 205 14 kDa MG420W10 4 20 10 50 l Tris MOPS SDS Tris Bicine 205 6 5 kDa MG816W10 8 16 10 50 l Tris MOPS SDS Tris Bicine 205 14 kDa MG008W12 8 12 30 l Tris MOPS SDS Tris Bicine 205 45 kDa MG010W12 10 12 30 l Tris MOPS SDS Tris Bicine 205 24 kDa MG012W12 12 12 30 l Tris MOPS SDS Tris Bicine 205 14 kDa MG420W12 4 20 12 30 l Tris MOPS SDS Tris Bicine 205 6 5 kDa MG816W12 8 16 12 30 l Tris MOPS SDS Tris Bicine 205 14 kDa MG008W15 8 15 25 l Tris MOPS SDS Tris Bicine 205 45 kDa ExpressTM PAGE Gels 2 Jinsite Corporation Tel 025 84347333 Fax 025 84347334 email order MG010W15 10 15 25 l Tris MOPS SDS Tris Bicine 205 24 kDa MG012W15 12 15 25 l Tris MOPS SDS Tris Bicine 205 14 kDa MG420W15 4 20 15 25 l Tris MOPS SDS Tris Bicine 205 6 5 kDa MG816W15 8 16 15 25 l Tris MOPS SDS Tris Bicine 205 14 kDa III 蛋白遷移表 下圖是蛋白質(zhì)遷移表可以幫助您選擇合適的蛋白電泳凝膠 本數(shù)據(jù)表是由凝膠在 140 伏特下電泳 45 分鐘所顯 示的條帶分布 IV 相匹配的電泳槽 GradiGel Mini 4 Cell IBI Universal Protein System EC 4 Cell Hoefer Tall Mighty Small SE 280 Hoefer Mighty Small SE 260 SE 250 Daiichi Mini 2 Gel 6 Gel Owl Road Runner Penguin Novex XCell I and II and Surelock Bio Rad Mini PROTEAN II 3 Owl Single Sided Vertical System ExpressTM PAGE Gels 3 Jinsite Corporation Tel 025 84347333 Fax 025 84347334 email order V 相關(guān)產(chǎn)品 Express Gel Running Buffer Powder M00138 To make 1000ml 1 Running Buffer Transfer Bufffer Powder M00139 To make 1000ml 1 Transfer Buffer Novel Coomassie brilliant blue stain C01714 250ml 5X上樣緩沖液配方 5X Sample Buffer SDS 1 0 g Glycerol 5 0 ml Bromophenol Blue 25 mg Tris base 150 mg 調(diào)節(jié)pH值至6 8 2 Mercapoethanol 1 0 ml Deionized water to 10 ml 10X電泳緩沖液和20X轉(zhuǎn)印緩沖液配方 10X Running Buffer 20X Transfer Buffer Tris base 60 6 g 60 0 g Bicine 81 6 g Mops 104 6 g EDTA 3 0 g SDS 10 0 g Deionized water to 1000 ml 1000 ml 配制1L1X轉(zhuǎn)印緩沖液 量取50 ml 20X轉(zhuǎn)印緩沖液 100 ml甲醇或乙醇以及850 ml雙蒸水混勻 VI 儲存條件 預(yù)制膠和緩沖液應(yīng)保存在4 8 VII 預(yù)制膠使用說明 1 從包裝袋中取出凝膠裝入電泳槽中 操作方式可參照電泳設(shè)備制造商的使用說明 2 在電泳槽內(nèi)槽里倒入充足的 1X 電泳緩沖液 使得緩沖液覆蓋上樣膠孔 5 7mm 外槽倒入充足 1X 電泳緩沖 液以確保電泳時(shí)的冷卻效果 外槽的緩沖液液面接近上樣孔的底部為最佳 3 使用移液槍或注射器 沖洗膠孔以去除氣泡和存在于膠孔中的緩沖液 4 每孔蛋白質(zhì)最大上樣量 50ug 樣品在 1X 樣品緩沖液 100 條件下 孵浴 5 分鐘 最佳的上樣量必須通過 實(shí)驗(yàn)得出 上樣過量將會導(dǎo)致涂抹帶或者條帶失真 樣品中含有過量的游離碳水化合物也會導(dǎo)致條帶失真 參 照問題解決方案 5 接上電源 正確的連接電源的電極 電泳 140V 30 45 分鐘 具體時(shí)間視目的蛋白質(zhì)的大小而定 ExpressTM PAGE Gels 4 Jinsite Corporation Tel 025 84347333 Fax 025 84347334 email order 6 一旦電泳結(jié)束后 按照使用說明從電泳槽取出膠夾 用薄片插入膠夾底部 橇開膠夾 取出膠染色或者轉(zhuǎn) 膜 A 染色 所有的染色步驟均適用于 Express PAGE Gels B 轉(zhuǎn)膜 所有的轉(zhuǎn)膜步驟均適用于 Express PAGE Gels 使用 1X 轉(zhuǎn)膜緩沖液濕法轉(zhuǎn)膜條件 40V 90 分鐘 或者半干方法轉(zhuǎn)膜條件 25V 30 分鐘完成 最佳的轉(zhuǎn)膜時(shí)間將視目的蛋白大小而定 VIII 預(yù)制膠使用實(shí)例 Express TM Precast Gels 與其它預(yù)制膠比較 與其它預(yù)制膠比較 Express TM PAGE Gels與其它預(yù)制膠進(jìn)行Western Blot檢測結(jié)果對比 圖 1 Express TM Precast Gels 與其它預(yù)制膠通過Western Blot檢測EasyWestern Protein Marker的對比結(jié)果 分別取10 l 5 0 l 2 5 l 1 3 l 0 6 l 0 3 l EasyWestern Protein Marker Genscript Cat No MM0908 加樣于4 20 Express TM PAGE Gel 的1 2 3 4 5 6泳道 電泳結(jié)束后將樣品轉(zhuǎn)移至硝酸纖維膜進(jìn)行Western Blot檢測 使用其它公司4 20 預(yù)制膠重復(fù)上述實(shí)驗(yàn) 與其它公司預(yù)制膠相比 Express TM Precast Gels 在更短的時(shí)間內(nèi)給出了更好的結(jié)果 較大的蛋白有更高的轉(zhuǎn)膜效 率 IX 常見問題及解決方法常見問題及解決方法 下述表格內(nèi)容僅供參考下述表格內(nèi)容僅供參考 問題 可能的原因 解決方案 條帶扭曲 上樣孔中有氣泡或者膠與膠盒 之間有氣泡 使用注射器或者上樣器吸取電 泳緩沖液徹底沖洗上樣孔 涂抹帶 樣品中含有不溶物或者弱的帶 電物質(zhì)例如碳水化合物 使樣品充分變性 上樣前離心 取上清加樣 條帶間過度不明顯 錯(cuò)誤的膠濃度 參照說明書選擇正確的膠濃度 上樣過量 減少上樣量 每孔