CD44在不孕癥子宮內(nèi)膜組織的表達及意義.doc

CD44在不孕癥子宮內(nèi)膜組織的表達及意義【摘要】目的: 探討CD44在不孕癥子宮內(nèi)膜組織中的表達與不孕癥發(fā)生的關(guān)系,尋找不孕癥的發(fā)病規(guī)律。方法: 采用免疫組化S-P法檢測41例不明原因不孕癥及35例正常宮內(nèi)膜組織中CD44的表達水平及分布。結(jié)果: 在正常子宮內(nèi)膜腺上皮及間質(zhì)細胞中，增生期僅見CD44的弱陽性表達，分泌期表達水平增加，在分泌中期表達最高，分泌晚期表達下降。在不孕組中，增生期CD44僅有弱表達，分泌期表達增加，與增生期比較差異顯著（P0.05）。結(jié)論:不孕癥中CD44表達異常可引起內(nèi)膜接受性的降低,使著床失敗引起不孕。 【關(guān)鍵詞】 子宮內(nèi)膜 Expression and Clinical Significance of CD44 in Endometrium with Infertility TIAN Lin，GUO Hong-li，DU Xing-gui，et al.(Department of Pathology，Renmin Hospital，Yunyang Medical College，Shiyan，Hubei 442000) Abstract:Objective To explore the relationship between the expression of CD44 in endometrium and infertility，so that the mechanism of infertility was elucidated. Methods The level of expression of CD44 in 41 unknown reason infertility and 35 normal endometrium was measured by immuno-histochemical method(S-P technique).Results In glandular epithelium and stromal cells of normal endometrium，the weak expression of CD44 was observed during proliferative phase，the expression was increased gradually in secretory phase,and the highest expression in mid-secretory phase，decreased in late secretory phase.In infertility,there was weak expression in proliferative phase，the expression increased gradually in secretory phase（P0.05).Conclusion The anormal expression of CD44 in infertility will reduce endometrium’s acceptation,which led to the failure of imbed. Key words:CD44；Endometrium；Unknown Reason Infertility 不孕癥是婦科常見病之一，80%由解剖內(nèi)分泌異常及感染等因素所致，20%為不明原因不孕。近來研究發(fā)現(xiàn)，部分黏附分子在人子宮內(nèi)膜呈周期性表達，并證實在不孕癥中有其表達異常，這提示該表達異?？赡芘c不孕癥的發(fā)生有一定關(guān)系1。CD44是一類重要的黏附分子，目前國內(nèi)外在女性生殖系統(tǒng)疾病的研究主要集中在子宮內(nèi)膜癌子宮內(nèi)膜異位癥等疾病2-3，而尚未見關(guān)于其與不明原因不孕癥發(fā)病機制研究的報道。本研究應(yīng)用免疫組化S-P法檢測不明原因不孕癥宮內(nèi)膜組織及正常宮內(nèi)膜組織中CD44的表達水平，以探討它們在腺上皮及間質(zhì)細胞的表達與不明原因不孕癥的關(guān)系。 1 材料和方法 1.1 材料 本研究病例為鄖陽醫(yī)學(xué)院附屬人民醫(yī)院和附屬東風(fēng)醫(yī)院病理科1998年1月-2003年12月的診刮內(nèi)膜標(biāo)本，有完整的臨床和病理資料。育齡婦女，2439歲，平均年齡31.6歲，月經(jīng)周期規(guī)律，內(nèi)分泌正常，近3個月內(nèi)未用過任何激素類藥物，腹腔鏡檢查正常，排除解剖感染精神等因素確診為女性不明原因不孕癥，行診斷性刮宮術(shù)刮出的內(nèi)膜組織41例作為不孕組。另選相同年齡段正常生育婦女診斷性刮宮術(shù)獲取的內(nèi)膜組織35例作為正常對照組。選取的每份內(nèi)膜組織行常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片，各切3張，厚4 μm，分別作HE染色免疫組化染色和作陰性對照用，每組均含41例不孕癥宮內(nèi)膜組織和35例正常宮內(nèi)膜組織。在HE染色切片中，根據(jù)John M4子宮內(nèi)膜月經(jīng)周期組織學(xué)分期標(biāo)準(zhǔn)，將其分為增生期內(nèi)膜（月經(jīng)周期第414天）、分泌早期內(nèi)膜（月經(jīng)周期第1519天）、分泌中期內(nèi)膜（月經(jīng)周期第2023天）和分泌晚期內(nèi)膜（月經(jīng)周期第2428天）。正常組及不孕組各期標(biāo)本數(shù)分別為6、7、16、6例和 6、9、17、9例。 1.2試劑 鼠抗人的CD44(H-CAM)單克隆抗體購自北京中杉生物技術(shù)有限公司,SP試劑盒及DAB顯色劑均為福州邁新生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。 1.3方法 1.3.1 免疫組化實驗:石蠟切片常規(guī)脫蠟入水，行抗原修復(fù)H2O2阻斷血清封閉，滴加50 μl一抗，PBS代替一抗作陰性對照，4 冰箱過夜。滴加生物素標(biāo)記的二抗，PBS沖洗3次。滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素，DAB顯色。蘇木精復(fù)染，鹽酸分化，氨水返藍。中性樹膠封固。 1.3.2結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn):獨立觀察切片至少5個具有代表性的高倍視野，不少于1 000個細胞。根據(jù)鏡下著色深淺及陽性細胞占總細胞數(shù)的百分比進行半定量計數(shù)：陽性細胞數(shù)75%計為3；無著色(-)計為0，淺黃色(+)計為1，黃色(+)計為2，棕黃色(+)計為3。CD44陽性標(biāo)準(zhǔn)為細胞膜有明顯棕黃色顆粒，少量胞質(zhì)著色。以兩項計分的相加數(shù)為最終值。 1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 計量資料用均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差(xs)表示，各組樣本均數(shù)間比較采用SPSS10.0統(tǒng)計分析軟件包進行單因素的方差分析，計數(shù)資料率的比較采用四格表Fisher精確概率法檢驗，以α=0.05為檢驗水準(zhǔn)，P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 2結(jié)果 2.1正常組月經(jīng)周期腺上皮及間質(zhì)細胞CD44的表達正常組增生期，CD44在子宮內(nèi)膜腺上皮及間質(zhì)細胞僅有弱表達，分泌早期增加到3.000.38，差異有顯著性(P0.05)；分泌中期腺上皮表達值為4.030.68，是分泌早期的134%(4.03/3.00)，進入分泌晚期表達減少到2.920.37?？梢姺置谥衅谙偕掀さ谋磉_，為表達的高峰期（見表1）。在宮內(nèi)膜腺上皮中，CD44呈較強的膜表達，未見或少量胞質(zhì)表達；間質(zhì)細胞為胞膜或胞質(zhì)或膜質(zhì)混合表達（見圖1）。 2.2不孕組月經(jīng)周期腺上皮及間質(zhì)細胞CD44的表達不孕組增生期，腺上皮及間質(zhì)細胞CD44僅有弱表達，分泌早期表達增加到2.560.36，相當(dāng)于增生期的218%(2.56/1.17)，差異顯著（P0.05）。對比不孕組腺上皮分泌中期及正常組腺上皮分泌中期表達結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不孕組比正常組表達低1.25個計分值，為低水平表達，差異有顯著性（P0.05）。這提示，雖然子宮內(nèi)膜在植入窗CD44表達比增生期顯著增加，但表達量低于正常組，處于低水平表達，無分泌中期表達的高峰，也無分泌晚期的降低。眾所周知，子宮內(nèi)膜的接受性和子宮內(nèi)膜與胚胎發(fā)育的同步性是著床的兩個重要因素，而其中內(nèi)膜的接受性又是著床成功的關(guān)鍵。植入窗CD44的異常表達可能會引起內(nèi)膜的接受性降低，使著床失敗而導(dǎo)致不孕。關(guān)于CD44在不孕癥中的表達及機制，國內(nèi)外鮮有報道。Nothnick9等對正常子宮內(nèi)膜及異位內(nèi)膜CD44的表達作了比較，發(fā)現(xiàn)異位內(nèi)膜CD44表達水平降低。后有學(xué)者10發(fā)現(xiàn)腹膜異位內(nèi)膜上皮鈣黏素及CD44表達較正常子宮內(nèi)膜明顯降低，并隨病情進展而進一步表達減少，認為上皮鈣黏素及CD44表達可能與異位病灶的發(fā)展有關(guān)。可見，CD44介導(dǎo)細胞間的黏附，影響子宮內(nèi)膜的容受性，在胚泡植入過程中發(fā)揮重要作用。CAMs的表達可能受到性甾體激素細胞因子等的調(diào)節(jié)，在不孕癥子宮內(nèi)膜異位癥等婦科疾病中其表達水平的降低可能是引起這些疾病的重要原因之一。有研究發(fā)現(xiàn)，不孕癥中也有其它一些黏附分子表達水平的異常，如植入窗整合素αvβ3α4β1α1β1α6β1α7β1等的表達6。細胞外基質(zhì)成份是子宮內(nèi)膜微環(huán)境的重要組成部分，在著床過程中，可觀察到它的時相性變化，如分泌期膠原纖維(COL)及FN呈低水平表達而LN表達則明顯增加，COL和FN表達低可減少胚泡入侵時的阻力，為胚泡入侵提供有利的微環(huán)境，LN表達的增加可為胚泡入侵提供連接作用，而這又是胚泡入侵時攝取營養(yǎng)的重要條件11。由此可見，腺上皮和間質(zhì)細胞多種黏附分子細胞因子表達的相互協(xié)調(diào)也是著床成功的重要因素，它可為胚胎著床創(chuàng)造良好的微環(huán)境，使內(nèi)膜具有相適應(yīng)的接受性，確保著床順利進行?！緟⒖嘉墨I】 1 Li HW,CheungAN,Tsao SW,et al.Expression of E-cadherin and beta-catenin in trophoblastic tissue in normal and pathological pregnanciesJ.Int Society Gynecol Pathol,2003,22(1):63-70. 2 Demir AY,Groothuis PG,Nap AW,et al.Menstrual effluent induces epithelial-mesenchymal transitions in mesothelial cellsJ.Hum Reprod,2004,19(1):21-29. 3 Half ElizabethE,Bresalier RobertS.Clinical management of here-ditary colore-ctal cancer syndromesJ.Current Opinion Gastroenterol，2004,20(1):32-42. 4 John M Kissane.Andersons PathologyM.Volume Two,St.Louis Baltimore Philadel-phia.Toronto, The C.V.Mosby Company,1990： 1 652-1 654. 5 Ohta N,Saito H,Kuzumaki T,et al.Expression of CD44 in human cumulus and mural granulose cells of individual patients in in-vitro-fertilization programmesJ.Mol Hum Reprod,1999,5(1):22-28. 6 Nardo LG,Nikas G,Makrigiannakis A,et al.Synchronous expression of pinopodes and alpha(v)beta3 and alpha4beta1 integrins in the endometrialsurface epithelium of normally menstruating women during the implantation windowJ.Reprod Med,2003,48(5):355-361. 7 國宏莉，杜興貴，朱潤慶等.不明原因不孕癥子宮內(nèi)膜上皮鈣黏素的表達J.生殖與避孕，2005，25（2）：122-124. 8 國宏莉，朱潤慶，杜興貴等.細胞黏附分子與不孕癥J.國外醫(yī)學(xué)計劃生育分冊，2004，23(4):211-214. 9 Nothnick WB,Fan F,Iczkowski kA,et al.CD44s expression is reduced in endometriotic lesions compared to eutopic endometrium in women with endometiosisJ.Int J Gynecol Pathol,2001,20(2):140-146. 10 Poncelet C,Leblanc M,Walker-Combrouze F,et al.Expression of cadherins and CD44 isoforms in human endometrium and peritoneal endometriosisJ.Acta Obstet Gynecol Scand,200