生物化學(xué)實驗論文.doc

黃曲霉侵染前后大豆可溶性蛋白與可溶性淀粉酶活性變化的研究實驗小組成員：朱敏超 趙亞克 徐立靜 朱彥敏 王芳摘要：采用分光光度法對黃曲霉侵染前后大豆三種酶（-淀粉酶、-淀粉酶）活力隨時間變化測定。實驗結(jié)果表明：接種48h后總酶活性最高，接種36h-淀粉酶活性最高，接種12h-淀粉酶活性最高，兩種酶之間的變化無明顯同步性，兩大豆品種中兩種酶的活性變化趨勢也不盡相同，蛋白含量與正常大豆、破皮大豆相比也明顯下降。關(guān)鍵詞：大豆、黃曲霉侵染、-淀粉酶活性、-淀粉酶活性、蛋白質(zhì)含量引言：大豆被稱為“豆中之王”，“田中之肉”，“綠色的牛乳” 等，它的營養(yǎng)價值很高，其數(shù)百種天然食物中最受營養(yǎng)學(xué)家推崇的食物，然而在收獲，貯藏過程中極易受黃曲霉菌的侵染，淀粉酶主要包括-淀粉酶、-淀粉酶，葡萄糖淀粉酶和R-酶，它們廣泛存在與動物、植物和微生物界。不同來源的淀粉酶，性質(zhì)有所不同。植物中最重要的淀粉酶是-淀粉酶和-淀粉酶。淀粉酶活力大小可用其作用于淀粉生成的還原糖與3，5-二硝基水楊酸的顯色反應(yīng)來測定，還原糖作用于黃色的3，5-二硝基水楊酸生成棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸，生成物顏色的深淺與還原糖的量成正比。本研究旨在通過對黃曲霉侵染前后的大豆中-淀粉酶-淀粉酶酶活性的變化進(jìn)行比較分析，以前從酶活性變化角度揭示大豆在黃曲霉侵染條件下的生理生化機制，為大豆抗黃曲霉研究提供理論依據(jù)。一.材料與方法1. 材料接種黃曲霉的大豆，黃曲霉菌株2. 儀器與用具分光光度計、離心機、微波爐、電子天平、恒溫水浴鍋、離心管、研缽、容量瓶（100ml、250ml、1000ml）、試管、具塞試管25ml3方法.材料處理次氯酸鈉消毒處理大豆，采用無菌水清洗除掉殘留的次氯酸鈉，清洗后除皮，將剝皮后的種子接種噴施黃曲霉孢子液，每個培養(yǎng)皿放置200粒，開始計時，并且取零時刻種子各10粒，放置樣品袋，液氮速凍，取樣時間分別在3h,6h,12h,24h,36h,48h。.試劑1%淀粉溶液，0.4mol/l NaOH溶液， pH5.6檸檬酸緩沖液，3，5-二硝基水楊酸，還原糖標(biāo)準(zhǔn)液，標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液，考馬斯亮藍(lán)G-250蛋白試劑.黃曲霉侵染的大豆酶液提取稱取10粒黃曲霉侵染過的大豆，置研缽中加少量石英砂和10ml左右蒸餾水，冰浴研成勻漿，無損轉(zhuǎn)入100ml容量瓶中，用蒸餾水定容至100ml，每隔數(shù)分鐘震蕩一次，提取20min，3000r/min離心10min，轉(zhuǎn)出上清液備用。.淀粉酶總活力測定取3支試管編號123，各加酶液1ml和pH5.6檸檬酸1ml，然后將2號試管70水浴15min，將3號試管加入4ml 0.4mol/lNaOH溶液，在三支試管中各加淀粉2ml搖勻，40水浴5min后，將12管中各加4ml 0.4mol/lNaOH溶液，將三支試管沸水浴5min，定容至25ml，520nm比色，記錄數(shù)據(jù)。二.結(jié)果分析與討論1. 可溶性蛋白含量變化1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作可溶性蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度蛋白質(zhì)含量020406080100吸光度00.1790.3230.4290.6360.7152.樣品液蛋白質(zhì)含量的吸光度時間03612243648平均值方差ttest黃曲霉0.2910.1670.270.2590.350.240.2720.26410.0030391&20.005984246剝皮大豆0.4350.6490.4430.5490.530.3650.360.47590.011122&30.002897073對照組0.2440.3710.2560.20.4240.30.2450.29140.0063331&30.467911762由標(biāo)注曲線及各所測數(shù)據(jù)，根據(jù)計算公式可算出各組蛋白質(zhì)含量下圖蛋白質(zhì)含量（微克）時間03612243648平均值方差ttest黃處理288202274266329253275269.57141462.2861&20.005934剝皮388536394467454340336416.42865314.6192&30.002804對照組256344264225380294256288.42863037.9521&30.469958由圖可知黃曲霉處理的大豆與剝皮大豆的比較 ：差異顯著，黃曲霉處理后大豆中蛋白質(zhì)含量明顯小于剝皮后大豆；剝皮大豆與對照組大豆差異顯著，剝皮大豆中蛋白質(zhì)含量明顯高于對照組；黃曲霉處理的大豆與對照組大豆無明顯差異。本實驗研究表明，黃曲霉侵染對大豆的可溶性蛋白含量沒有顯著影響，反而剝皮大豆中蛋白質(zhì)含量顯著增加，初步懷疑對照組數(shù)據(jù)記錄有誤。2. 可溶性淀粉酶活性變化樣品液還原糖測定的吸光度及標(biāo)準(zhǔn)曲線：1234567平均值方差吸光度00.040.0510.0830.1110.1440.1530.08310.003194總酶組別 時間03612243648平均值方差ttest黃曲霉0.4510.2340.5830.6120.5610.6080.7210.53860.02441&20.742053655剝皮豆0.430.6790.5870.3930.3380.5250.6110.5090.0157642&30.061624562對照組0.6190.6421.2051.0231.0010.6890.4520.80440.0741951&30.055478151由圖可知黃曲霉處理的大豆與剝皮大豆的比較 ：淀粉酶總活力差別不大；剝皮大豆與對照組大豆差異不明顯；黃曲霉處理的大豆與對照組大豆有較明顯明顯差異。黃曲霉處理后，在第3小時對淀粉酶的抑制程度最大。組別 時間03612243648平均值方差ttest黃曲霉0.2040.1760.3720.2040.250.3950.3360.27670.0080031&20.000706085剝皮豆0.0780.0430.0430.0630.0410.0710.0380.05390.0002692&30.003629119對照組0.2390.1410.1920.1990.3820.1960.1060.20790.0077681&30.230069102 酶00.050.10.150.20.250.30.350.40.4503612243648時間（h）吸光度黃處剝皮對照 由圖可知黃曲霉處理的大豆與剝皮大豆的比較 ：差異極其顯著，黃曲霉處理后大豆在發(fā)芽過程中a酶的活力明顯上升；剝皮大豆與對照組大豆差異顯著，剝皮大豆中a酶受到抑制，酶活力下降；黃曲霉處理的大豆與對照組大豆無明顯差異。 酶組別時間03612243648平均值方差ttest黃曲霉0.2470.0580.2110.4080.3110.2130.3850.26190.0142811&20.060312601剝皮豆0.3520.6360.5440.330.2970.4540.5730.45510.0176342&30.242408986對照組0.380.5011.0130.8240.6190.4930.3460.59660.0591981&30.015531219 由圖可知黃曲霉處理的大豆與剝皮大豆的比較 ：差異顯著；剝皮大豆與對照組大豆無差異，剝皮對大豆中酶活力沒有影響；黃曲霉處理的大豆與對照組大豆油顯著差異，黃曲霉侵染后，酶受到抑制。三討論與結(jié)論此次實驗研究結(jié)果表明：黃曲霉的侵染大豆與對照組相比可溶性蛋白含量，淀粉酶總酶活力，酶影響不明顯，對酶抑制。但與剝皮大豆比較，明顯促進(jìn)了酶的活性。四 結(jié)語此次實習(xí)使我們組學(xué)到了許多，除了專業(yè)知識外，還充分體會到了只有團(tuán)結(jié)協(xié)作實驗才能順利完成。實驗期間，由于某些試劑配