脫細胞真皮基質(zhì)分析報告.doc

精品文檔前言大面積深度燒傷或其他創(chuàng)傷導致皮膚真皮成分缺損，通過刃厚小皮片或微粒植皮技術(shù)雖然能使創(chuàng)面愈合，但由于其缺乏真皮層，導致愈合后創(chuàng)面彈性差，凸凹不平，易攣縮且不耐摩擦。移植自體皮瓣或全厚及中厚皮片固然是最好的方法，但大面積深度燒傷后，能作為供皮區(qū)的部位已很少，供皮區(qū)又將形成同等程度的缺損，日后形成瘢痕。為解決這一問題，國內(nèi)外學者致力于尋找一種理想的真皮替代品。1.脫細胞真皮基質(zhì)概述脫細胞真皮基質(zhì)（acellular dermal matrix ADM）是用物理、化學等方法將人或動物皮膚中的表皮層及細胞成分徹底去除僅保留真皮中含膠原網(wǎng)架的細胞外基質(zhì)。脫細胞真皮基質(zhì)由于完全沒有了細胞成分和、型細胞相容性抗原的主要免疫活性,故一般不會誘發(fā)排斥反應。但脫細胞真皮基質(zhì)保留有正常膠原的三維結(jié)構(gòu)和真皮中含膠原支架的細胞外基質(zhì)能為組織細胞的再生提供一個良好的支架結(jié)構(gòu)，具有創(chuàng)面覆蓋、組織缺損填充、引導組織再生和支架等作用。脫細胞真皮基質(zhì)中無細胞成分,免疫活性低,不會誘發(fā)免疫反應。它保留了表皮和真皮間的基底膜,移植后可形成真皮面和基底膜面?；啄っ婵芍С謹鄬悠て纳L,這對表皮細胞的增殖分化以及移植皮的外觀和功能起著重要作用,同時也有利于種子細胞的點附增殖等。真皮面利于脫細胞真皮基質(zhì)的快速血管化,為成纖維細胞的增殖提供支架,有助于膠原成分改建,促使成纖維細胞排列分布規(guī)則,形成結(jié)構(gòu)形態(tài)正常的膠原纖維,此外,還有誘導、調(diào)節(jié)宿主細胞和新生血管長入,促進上皮形成等作用。此外,細胞外基質(zhì)蛋白也可以促進表皮細胞的再生。因此,脫細胞真皮基質(zhì)可作為真皮替代品,在為燒傷創(chuàng)面提供真皮的同時,可明顯減少瘢痕形成。是一種理想的真皮替代材料。1.1脫細胞真皮基質(zhì)的制備方法根據(jù)來源的不同脫細胞真皮基質(zhì)分為異體脫細胞真皮基質(zhì)（來源主要為尸體皮）和異種脫細胞真皮基質(zhì)（來源為動物皮以豬皮和牛皮為主）兩種。制備過程都是盡可能的去除具有抗原性的細胞(表皮細胞、毛囊、皮脂腺、汗腺及真皮中血管內(nèi)皮細胞、成纖維細胞等), 保留完整的膠原纖維成分和組織基本結(jié)構(gòu)。早期人們曾利用反復凍融法、胰酶消化法等制備ADM，但由于這些方法不能完全去除真皮內(nèi)細胞成分, 導致ADM移植后引起宿主強烈的排異反應, 而且制備過程也過于復雜, 因而并未廣泛開展。目前ADM的制備方法主要有DispaseII-Triton法、高滲鹽-SDS法、高滲鹽-酶消化法、NaOH消蝕法等。只要條件控制適度,這些方法均可制備出合乎條件的ADMDispaseII-Triton法皮膚標本先經(jīng)DispaseII處理(2.5 U/ml溶液, 4下作用48 h), 再經(jīng)TritonX2100處理(0.5%溶液, 室溫下作用48 h)可將皮膚中的細胞徹底脫除。DispaseII主要分解IV型膠原和纖維粘蛋白, 能裂解基底膜中的致密層。DispaseII是一種快速有效的分離表皮與真皮的酶。標本經(jīng)DispaseII處理后, 表皮真皮間的基底膜及皮膚附屬器官周圍結(jié)締組織成分均被破壞。DispaseII同時也破壞了纖維細胞和結(jié)締組織基質(zhì)間的連結(jié), 更有利于TritonX2100的浸透。TritonX2100屬于非離子型表面活性劑, 在溶液中穩(wěn)定性高, 不易受強電解質(zhì)無機鹽存在的影響, 能與生物膜中的磷脂等脂質(zhì)結(jié)合形成復合物,溶解于溶液中。同時, TritonX2100中的疏水端也能和膜蛋白破壞生物膜, 從而使細胞溶解破壞。該方法細胞脫除徹底, 但同時基底膜結(jié)構(gòu)破壞大, 不利于上皮細胞底黏附生長。高滲鹽-SDS法皮膚標本先經(jīng)高滲鹽作用(1 mol/LNaCl溶液, 37下作用24h)使錨著細絲與表皮基底細胞的半橋粒分離,從而完整地去除表皮。然后在未改變膠原結(jié)構(gòu)的情況下,再用破膜劑十二烷基硫酸鈉(0.5%SDS溶液, 室溫下作用1h)將皮膚標本中的細胞脫除。該方法細胞脫除也比較徹底,基底膜完整保留,但真皮中型膠原、纖維結(jié)合素、彈力素、HLA-DR等含量較多,因此具有相對高的抗原性。高滲鹽-NaOH消蝕法該方法利用高滲鹽(1 mol/LNaCl溶液, 37下作用24h)去除表皮，同時再利用NaOH(低濃度溶液, 室溫下作用18h)中堿離子的吸水作用奪取組織細胞的水分,使細胞脫水而死亡;最后使用超聲清洗儀清洗除去細胞。該方法細胞徹底脫除,膠原纖維結(jié)構(gòu)完整, 排列較正常松散。但要注意控制NaOH的作用時間,如果過長(如:36h)會使膠原變性,蛋白裂解,得到的是真皮皮漿。酶消化- 去垢劑法該方法用胰蛋白酶(0.25%溶液,4下作用24 h), 接著用TritonX2100 (0.1%溶液, 室溫下作用8 h), 最后用Dispase(560 units/L, 4下作用24 h)。Ray等 7 使用胰蛋白酶(0.25%溶液, 室溫下作用18 h)和SDS(0.1%溶液, 室溫下作用12 h),然后用胰蛋白酶再作用12h, 最后用Dispase(560 units/L, 25下作用12 h), 制得的基質(zhì)均無細胞成分,膠原支架完整。脫細胞真皮基質(zhì)的制備流程1.2 脫細胞真皮基質(zhì)的作用機制脫細胞真皮基質(zhì)保留了真皮與表皮之間的基底膜, 故在應用時可形成基底膜與真皮兩個面?；啄っ嬷С忠浦灿谄浔砻娴臄鄬悠て纳L,對表皮細胞的分化成熟和移植皮的外觀與功能起著非常重要的作用,亦有利于組織工程中種子細胞或培養(yǎng)的角朊細胞的黏附、擴展等。真皮面有利于ADM 在宿主內(nèi)快速血管化, 為成纖維細胞的生長提供良好的支架,有助于對脫細胞真皮膠原成分的改建,促使成纖維細胞形成形態(tài)結(jié)構(gòu)及排列分布正常的膠原纖維,還具有調(diào)節(jié)、誘導、促進宿主細胞長入,促進纖維細胞增生、新生血管和上皮形成等作用。真皮成分的多寡是創(chuàng)面愈合后彈性、外觀是否良好的重要因素, 瘢痕形成的量及攣縮程度與所植皮片中真皮的含量成反比。真皮含量不足時成纖維細胞只能合成不成熟的基質(zhì), 此種基質(zhì)經(jīng)改建后即成為瘢痕組織。脫細胞真皮基質(zhì)作為一種真皮代替物能被宿主接納,并被改建成為自體真皮組織,減少皮片移植后的瘢痕形成及攣縮, 能與全厚皮片移植后的效果相媲美。1.3脫細胞真皮基質(zhì)的臨床應用范圍 1.腹壁外科 (1)嬰幼兒腹壁缺損 （2）嵌頓性或絞窄性腹壁疝（3）腹壁缺損伴有污染或感染創(chuàng)面 （4）食道裂孔疝（5）盆底腹膜修復 （6）腹腔室間隔綜合癥腹腔關(guān)閉（7）全腹壁切除或缺損的腹壁再造 （8）其他復雜的腹壁修復情況2.泌尿外科長段尿道狹窄或缺損、先天性尿道下裂、尿瘺、膀胱擴容、腎組織修補3.結(jié)直腸、肛門外科 (1)非急性期的單純性高位和低位肛瘺 （2）陰道前庭瘺(3)對肛門括約肌功能影響大的肛瘺和肛周感染 （4）管狀消化道瘺4口腔科（1）口腔黏膜缺損 （2）牙周手術(shù)治療 （3）腭裂修復術(shù)中修復軟組織缺損 5 整形外科(1) 燒傷創(chuàng)面及燒傷后期瘢痕攣縮畸形的修復 (2) 慢性創(chuàng)面及病理性瘢痕的修復(3) 面部整形及美容: 矯正鼻畸形、眼瞼，結(jié)膜層缺損的修復、隆唇6耳鼻喉科 （1）鼓膜穿孔的修補 （2）鼻中隔穿孔的修補 （3）咽部缺損的修復（4）腦脊液鼻漏修補及蝶鞍的修復1.4產(chǎn)品性能要求和技術(shù)可行性檢測標準外觀目測規(guī)格型號企標單位面積重量企標酸堿度企標干燥失重企標耐溫性企標熾灼殘渣企標重金屬含量GB/T 14233.1-2008降解時間GB/T 16886.13-2001抑菌性能GB/T 20944.3-2008致熱性GB/T 16886.11-2011附錄F生物學評價皮內(nèi)反應試驗GB/T 16886.10-2005遲發(fā)型超敏反應GB/T 16886.10-2005細胞毒性試驗GB/T 16886.5-2003全身毒性（急性）GB/T 16886.11-2011亞慢性毒性GB/T 16886.11-2011遺傳毒性GB/T 16886.3-2008植入GB/T 16886.6-1997血液相容性GB/T 16886.4-2003 無菌試驗GB/T 14233.2-2005注：以上產(chǎn)品性能指標需要進行檢測之后才能設(shè)定企業(yè)本身的產(chǎn)品性能要求。從質(zhì)量控制角度，可從有脫細胞真皮生產(chǎn)能力的廠家采購真皮材料，根據(jù)公司制定的原材料檢驗標準對采購的真皮材料質(zhì)量進行控制，質(zhì)量合格方能進入生產(chǎn)，然后利用公司現(xiàn)有分切設(shè)備，包裝等設(shè)備進行生產(chǎn)，經(jīng)過滅菌后根據(jù)產(chǎn)品企業(yè)標準進行檢驗，檢驗合格后方能出廠銷售。 從關(guān)鍵技術(shù)控制角度，可對關(guān)鍵技術(shù)指標進行設(shè)定，要求供應商達到采購設(shè)定的性能技術(shù)要求，并制定原材料檢驗標準，根據(jù)檢驗標準對采購的真皮材料進行關(guān)鍵技術(shù)指標的檢驗，檢驗合格后方能入庫生產(chǎn)。 因此，終上所述，可吸收止血紗布技術(shù)可行，產(chǎn)品質(zhì)量可控。2.國內(nèi)外上市脫細胞真皮基質(zhì)現(xiàn)況異體脫細胞真皮基質(zhì)國內(nèi)外上市的產(chǎn)品有美國Life Cell公司推出的Allodern，該產(chǎn)品的異體真皮來源于尸體皮。臨床上應用于燒傷，瘢痕切除創(chuàng)面取得良好的效果。而國內(nèi)上市的產(chǎn)品主要有北京桀亞萊福生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的J-1型異體脫細胞真皮基質(zhì)和北京清源偉業(yè)生物組織工程科技有限公司生產(chǎn)的脫細胞異體真皮基質(zhì)醫(yī)用組織補片(商品名稱:瑞諾)。雖然異體脫細胞基質(zhì)在臨床上的應用效果較好但也存在著不可忽視的不足（1）異體皮供體來源有限；（2）有傳播人類疾病的可能性；（3）存在著倫理問題；（4）需要低溫保存，保存運輸不方便。而目前，異種脫細胞真皮基質(zhì)在國內(nèi)以上市的有：（1）北京瑞克倍爾醫(yī)療器械有限公司出產(chǎn)的脫細胞真皮基質(zhì)敷料，該產(chǎn)品以豬皮為主要原材料，采用新型物理、化學及生化等方法除去了豬皮內(nèi)的各種雜質(zhì)，完整地保留了真皮細胞外基質(zhì)的形態(tài)，保持原有的三維立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。主要適用于1.外傷撕脫傷創(chuàng)面；2.骨外露、肌腱外露創(chuàng)面；3.慢性潰瘍、褥瘡及肉芽創(chuàng)面；4.中厚皮供皮區(qū)創(chuàng)面；5.刃厚皮、郵票皮、微粒皮移植手術(shù)創(chuàng)面，6.燒傷創(chuàng)面、切削痂后的創(chuàng)面。（2）江蘇優(yōu)創(chuàng)生物醫(yī)學科技有限公司生產(chǎn)的異種脫細胞真皮基質(zhì)敷料(商品名：東慈真皮基質(zhì))同樣該產(chǎn)品也是以豬皮為原料，經(jīng)病毒滅活與脫細胞等工藝制備而成具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，主要用于淺度燒(燙)傷創(chuàng)面、供皮區(qū)創(chuàng)面、深度燒傷切(削)痂創(chuàng)面，肉芽創(chuàng)面等創(chuàng)面的覆蓋治療。（3）江陰奔翔生物科技有限公司生產(chǎn)的豬皮脫細胞真皮基質(zhì)敷料，同樣也是以豬皮為原料經(jīng)純化處理冷凍干燥后成型加工而成，該產(chǎn)品適用于度燒傷創(chuàng)面、供皮區(qū)創(chuàng)面覆蓋。（4）煙臺正海生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的口腔修復膜(商品名：海奧)和皮膚修復膜(商品名：海孚)兩者均為牛的皮膚組織經(jīng)一系列處理后制備的異種脫細胞真皮基質(zhì)，主要成分為膠原蛋白。前者適用于：1. 口腔內(nèi)軟組織淺層缺損的修復。2. 腮腺手術(shù)中預防味覺出汗(Freys)綜合征。后者適用于：真皮層缺損的創(chuàng)面修復。上述這些一種脫細胞真皮基質(zhì)的作用機理與異體脫細胞真皮基質(zhì)類似，臨床使用效果接近于異體脫細胞真皮基質(zhì)。同時，異種脫細胞真皮基質(zhì)的來源充足，采用凍干工藝，常溫存儲，有效期長，運輸和存儲都更為方便。3.技術(shù)難點制備中如何解決既要完全脫除細胞等抗原，又能最大限度的保留基底膜等精品文檔，你值得期待（1） 有效成分。小草急急忙忙的返青依舊；細雨迷迷濛濛的飄灑依舊。盈盈月下來，照亮你的山歌依舊；燦燦星升起，白楊樹綠影婆娑依舊。好風似水，不驚你安眠依舊；鳥兒呢噥，愛的春天依舊?？晌?，望盡了我的花季，望盡了長長的一路落英繽紛呵！岑凱倫的綿綿春雨依舊，戴望舒的深深雨巷依舊！漂泊的船，尋找一個溫馨港口；孤寂的心，渴望一聲溫暖問候。是你在我最落寞的時候，把親切放在我左右；是你在我最失意的時候，把慰藉放在我心頭。紅酥手，黃藤酒；春如舊，人空瘦。蝴蝶雙飛影孤單，淚痕紅浥鮫綃透！那一葉小舟，那一雙眼眸，望穿了幾層山水幾層樓？那一縷相思，那一縷離愁，孤獨了多少暮風晨雨后？春風依舊，桃花依舊；春水依舊，明月依舊；渡口依舊，時光依舊。前世的情緣，今生的守候，多少次夢里相逢，追憶難收，點點相思堆成無言的愁。紅塵多少愛，化作春水流。時光悠悠，歲月悠悠；韶華易逝 真情難留。忘情川上誰因離恨淚流？三生石前誰為癡情消廋？縱然我望斷天涯孤獨依舊，在桃花飄落的渡口，我依然會為你采擷相思的紅豆；在海鷗飛翔的碼頭，我依然會為你升起祝福的星斗。你若微笑，我青山嫵媚；你若安好，我綠水無憂！你若想我，我春風盈袖；你若念我，我春住心頭！正所謂：“穿金戴銀能怎樣，平平凡凡又如何，只要你能知足，就什么都不缺”.要知道有的人雖然貧窮，但感覺很幸福；有的人雖然富有，但浮而不實，憂慮重重。當然，人間的一切不幸?guī)缀醵寂c錢有關(guān)，但有了錢并不代表真的幸福。樂觀者的幸福府首皆拾，悲觀者的幸福高山仰止。幸福到底是什么呢？幸福就是一家老、小、平平安安、團團圓圓，即使吃著粗茶淡飯，也滿口香甜；幸福就是擁有一位甘苦與共、風雨同舟的知心朋友，可以有福同享有難同當；幸福就是擁有一顆平常心，過著比上不足，比下有余的日子，知足常樂！要知道幸福不是你有多少的鈔票，也不是你有幾座豪華的別墅、開什么牌子的名車，手上佩戴多少克拉的鉆戒和多么華麗的衣裳。真正幸福的人，不一定擁有很多財富，但他們內(nèi)心一定是踏實快樂的。所謂內(nèi)心的幸福，是過著和諧的正常生活所感到的快樂，這種幸福和滿足是任何金錢換不來的。幸福，其實很簡單，不一定是高官顯祿，腰纏萬貫，而是要懂得怎樣生活。只要您不放棄對美好生活的追求，一家人健健康康的活著，開開心心的過著，用一顆平常之心享受平淡生活的美好，快樂地度過人生中的每一天，這就是幸福！因為平淡是一種“福”,它能讓我們調(diào)整心態(tài)，在五味雜陳的大千世界里去發(fā)現(xiàn)生活的和諧之美，做到真正的滿足！正像黃磊所言：“平凡日常的記憶，最關(guān)一餐一飯。平淡生活的溫暖處，也許就是