EGFR背景.docx

精品文檔肺癌是當(dāng)今世界各國常見的惡性腫瘤，并已成為絕大多數(shù)國家癌癥死亡的主要原因。其中以非小細胞肺癌(NSCLC)最常見。目前靶向治療已經(jīng)成為非小細胞肺癌（NSCLC）臨床治療的重要手段。易瑞沙（Iressa/吉非替尼/Gefitinib,阿斯利康）和特羅凱（Tarceva/厄羅替尼/Erlotinib，羅氏制藥）作為表皮生長因子受體（EGFR）酪氨酸激酶抑制劑(TKI)，是美國FDA批準用于NSCLC靶向治療的主要藥物。但是，臨床試驗表明易瑞沙和特羅凱僅對10-30%的NSCLC病人有顯著療效。進一步的研究發(fā)現(xiàn)EGFR基因突變與NSCLC靶向治療的療效具有相關(guān)性，絕大多數(shù)攜帶EGFR基因突變的病人療效顯著。大量研究資料表明EGFR基因突變主要集中在酪氨酸激酶區(qū)(tyrosine kinase coding domain，18-2l外顯子)，其中19外顯子多為框內(nèi)缺失(746-753)性突變，約占所有突變的45；21外顯子多為替代突變(主要是L858R)，約占所有突變的40。目前普遍認為，這兩個熱點突變可以增強腫瘤細胞對TKI的敏感性，并且可作為TKI治療的有效預(yù)測指標。因此，檢測EGFR基因突變對于指導(dǎo)NSCLC病人臨床用藥具有重要的參考價值。表皮生長因子受體（EGFR）是一個170 kDa的跨膜糖蛋白受體酪氨酸激酶，由表皮生長因子激活，影響細胞的生長和分化。EGF 或 TGF 對EGFR的結(jié)合激活受體的酪氨酸激酶活力。 EGFR羧基末端的酪氨酸殘基Tyr 1068、Tyr 1148、 和Tyr 1173是EGF結(jié)合后發(fā)生的自動磷酸化的主要位點。一旦被激活，EGFR1068位和1173位磷酸化的酪氨酸殘基就能介導(dǎo) Grb2對EGFR的結(jié)合。此外，1173位磷酸化的酪氨酸殘基是 SHC在EGFR上的主要結(jié)合位點。EGFR廣泛分布在許多正常和惡性上皮細胞中，其過度表達和自我激活可能與許多腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。目前主要用于各種上皮源性惡性腫瘤包括頭頸部鱗癌、肺癌、乳腺癌和膀胱癌等的研究。表皮生長因子受體介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑 表皮生長因子與其受體表皮生長因子受體結(jié)合后可引發(fā)一系列細胞內(nèi)變化，最終使細胞發(fā)生分化或增殖。表皮生長因子受體是一種受體酪氨酸蛋白激酶，而受體酪氨酸蛋白激酶RasMAPK級聯(lián)途徑是表皮生長因子刺激信號傳遞到細胞核內(nèi)的最主要途徑。它由以下成員組成：表皮生長因子受體含有SH2結(jié)構(gòu)域的接頭蛋白(如Grb2)鳥嘌呤核苷酸釋放因子(如SOS)Ras蛋白MAPKKK(如Raf1)MAPKKMAPK轉(zhuǎn)錄因子等EGF受體介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程 表皮生長因子與受體結(jié)合后，可以使受體發(fā)生二聚體化，從而改變了受體的構(gòu)象，使其中的蛋白酪氨酸激酶活性增強，受體自身的酪氨酸殘基發(fā)生磷酸化，磷酸化的受體便形成了與含SH2結(jié)構(gòu)域的蛋白分子Grb2結(jié)合的位點，導(dǎo)致Grb2與受體的結(jié)合。Grb2中有兩個SH3結(jié)構(gòu)域，該部位與一種稱為SOS的鳥苷酸交換因子結(jié)合，使之活性改變，SOS則進一步活化Ras，激活的Ras作用于MAPK激活系統(tǒng)，導(dǎo)致ERK的激活。最后ERK轉(zhuǎn)移到細胞核內(nèi)，導(dǎo)致某些轉(zhuǎn)錄因子的活性改變從而改變基因的表達狀態(tài)及細胞的增殖與分化過程。EGFR是原癌基因c-erbB1的表達產(chǎn)物，是表皮生長因子受體（HER）家族成員之一。該家族包括HER1（erbB1，EGFR）、HER2（erbB2，NEU）、HER3（erbB3）及HER4（erbB4）。HER家族在細胞生理過程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。 EGFR廣泛分布于哺乳動物上皮細胞、成纖維細胞、膠質(zhì)細胞、角質(zhì)細胞等細胞表面，EGFR信號通路對細胞的生長、增殖和分化等生理過程發(fā)揮重要的作用。EGFR等蛋白酪氨酸激酶功能缺失或其相關(guān)信號通路中關(guān)鍵因子的活性或細胞定位異常，均會引起腫瘤、糖尿病、免疫缺陷及心血管疾病的發(fā)生。 分布EGFR廣泛分布于哺乳動物上皮細胞、成纖維細胞、膠質(zhì)細胞、角質(zhì)細胞等細胞表面，EGFR信號通路對細胞的生長、增殖和分化等生理過程發(fā)揮重要的作用。EGFR等蛋白酪氨酸激酶功能缺失或其相關(guān)信號通路中關(guān)鍵因子的活性或細胞定位異常，均會引起腫瘤、糖尿病、免疫缺陷及心血管疾病的發(fā)生。 EGFR研究進展EGFR的單克隆抗體西妥昔單抗和帕尼單抗的問世大大拓寬了轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸腫瘤療效，而當(dāng)人們意識到使用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測EGFR蛋白表達陽性與應(yīng)用EGFR單抗治療的療效并沒有相關(guān)性，便致力于可能的療效預(yù)測標志物的研究。EGFR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)下游的例如K-ras、BRAF、PIK3CA的基因突變，以及腫瘤抑制基因PTEN的失活都成了研究的熱點。在結(jié)直腸癌中，K-ras基因突變率為35%-45%，已成為EGFR單克隆抗體治療轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌的主要療效預(yù)測標志物。另外，在K-ras野生型基因的患者中，BRAF、PIK3CA基因突變以及PTEN的缺失表達，都可能與EGFR單克隆抗體的耐藥有關(guān)，但在這些可能的療效預(yù)測標志物被運用到臨床實踐中前，還需進一步地研究以明確他們的價值，以期在選擇適合接受EGFR單克隆抗體的患者中起到更大的作用，而K-ras基因突變被作為治療前的療效預(yù)測標志物，則是開創(chuàng)了轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌個體化治療的第一步。 編輯本段其他相關(guān)資料EGFR和KRAS基因檢測意義EGFR表達 EGFR表達 EGFR表達于正常上皮細胞表面，而在 一些腫瘤細胞中常過表達，EGFR的過表達 和腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移、侵潤、預(yù)后差有關(guān)。 EGFR信號通路 EGFR信號通路 Shc Grb2 PI3K Sos-1 Ras MEKK-1 Raf MEK mTOR MKK-7 ERK JNK AKT EGFR靶向藥物分類 EGFR靶向藥物分類 EGFR突變 EGFR突變 EGFR酪氨酸激酶區(qū)域的突變主要發(fā)生在1821外 EGFR酪氨酸激酶區(qū)域的突變主要發(fā)生在1821外 酪氨酸激酶區(qū)域的突變主要發(fā)生在18 顯子, 其中19和21號外顯子突變覆蓋突變的 90%. 顯子, 其中19和21號外顯子突變覆蓋突變的 19 細胞外區(qū)域 跨膜區(qū)域 細胞內(nèi)區(qū)域 EGFR突變率 EGFR突變率 100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% NS腺癌 NS 腺癌 東亞 歐美 EGFR突變細胞 癌基因休克假說 EGFR突變細胞癌基因休克假說 突變細胞 EGFR基因檢測在肺癌中的應(yīng)用 EGFR基因檢測在肺癌中的應(yīng)用檢測方法：DNA測序法 檢測方法 檢測周期: 檢測周期 7-10天 檢測位點：EGFR的18，19，21號外顯子 檢測位點 標本要求： 標本要求 腫瘤組織病理切片，厚度8-10m, 5-10張，要 求腫瘤組織占標本的70%以上 支氣管鏡活檢組織，厚度8-10m，需要10張 切片 KRAS基因檢測 KRAS基因檢測 KRAS蛋白處于EGFR信號 通路通路的下游。在生理情況 下，EGFR信號通路活化后， KRAS蛋白短暫激活，其后迅 速失活，KRAS激活/失活效應(yīng) 是受控的。 而KRAS基因突變時，可以 導(dǎo)致EGRF信號通路持續(xù)激活， 加 速 腫 瘤 細 胞 增 殖 。 KRAS基因突變 KRAS基因突變 KRAS基因突變96%發(fā)生在第2號外顯子的 12、 13號密碼子。 20% 非小細胞肺癌、30-35%大腸癌患者中 存在KRAS基因突變。 KRAS基因檢測的重要性 基因檢測的重要性 ? K-ras基因可以是正常狀態(tài)（稱為野生型）或異常狀態(tài) （突變型）。 ? K-ras突變型編碼異常的蛋白，刺激促進惡性腫瘤細胞的 生長和擴散；并且不受上游EGFR的信號影響，所以對抗 EGFR治療效果差。 KRAS基因檢測可以篩選出EGFR靶向治療藥物有效的大腸 癌患者，幫助醫(yī)生選擇對腫瘤病人最有效的治療方法，實 現(xiàn)腫瘤病人的個體化治療。 目前在歐美國家，大腸癌患者內(nèi)科治療前已經(jīng)常規(guī)檢測 KRAS狀態(tài)，并且成為能否報銷相關(guān)抗EGFR治療費用的憑 據(jù)。 KRAS基因 - K-ras基因突變發(fā)生的時間 基因 基因突變發(fā)生的時間 ? K-ras基因突變發(fā)生在腫瘤惡變的早期，并 且原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶的K-ras基因高度保持一 致。一般認為，K-ras基因狀態(tài)不會因治療 而發(fā)生變化。 大腸癌患者K-ras基因突變異 常的概率為30%35%。 KRAS基因 - K-ras基因檢測（K-ras,p21） 臨床意義 ? 檢測K-ras基因突變是深入了解癌基因的情 況、了解各種癌癥的發(fā)展預(yù)后、放化療療 效的重要指標。 ? 1.K-ras基因突變發(fā)生在腫瘤惡變的早期， 并且原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶的K-ras基因高度保持 一致。一般認為，K-ras基因狀態(tài)不會因治 療而發(fā)生變化。 ? 2.K-ras基因突變見于20%的非小細胞肺癌 (NSCLC)，其中肺腺癌占30%50%。 KRAS基因檢測在大腸癌中的應(yīng)用 KRAS基因檢測在大腸癌中的應(yīng)用檢測方法：DNA測序法 檢測方法 檢測周期: 檢測周期 7-10天 檢測位點：KRAS基因第2外顯子的12，13密碼子 檢測位點 標本要求： 標本要求 腫瘤組織病理切片，厚度8-10?m, 5-10張，要求腫 瘤組織占標本的70%以上。 腸鏡活檢組織，厚度8-10?m，需要10張切片。 項目開展情況生物治療研究室于2009年10月開始 進行靶向藥物特異靶點的基因檢測工作， 目前已經(jīng)獨立檢測60余例，突變率達到27%， 為個體化治療提供依據(jù)，取得較好的臨床療 效，希望更多的臨床醫(yī)生充分利用這個技術(shù) 平臺，實現(xiàn)腫瘤病人的個體化治療。 上皮生長因子受體（Epidermal Growth Factor Receptor; EGFR）是上皮生長因子（EGF）細胞增殖和信號傳導(dǎo)的受體。EGFR屬于ErbB受體家族的一種，該家族包括EGFR (ErbB-1), HER2/c-neu (ErbB-2), Her 3 (ErbB-3) 和 Her 4 (ErbB-4)。EGFR也被稱作HER1、ErbB1，突變或過表達一般會引發(fā)腫瘤。EGFR是一種糖蛋白，屬于酪氨酸激酶型受體，細胞膜貫通，分子量170Da。 EGFR位于細胞膜表面，靠與配體結(jié)合來激活，包括EGF和TGF（transforming growth factor ）. 激活后，EGFR有單體轉(zhuǎn)化為二聚體-盡管也有證據(jù)表明，激活前也存在二聚體。EGFR還可能和ErbB受體家族的其他成員聚合來激活，例如ErbB2/Her2/neu。 EGFR二聚后可以激活它位于細胞內(nèi)的激酶通路。包括Y992, Y1045, Y1068, Y1148 and Y1173等激活位點。 這個自磷酸化可以引導(dǎo)下游的磷酸化，包括MPAK，Akt和JNK通路, 誘導(dǎo)細胞增殖。 受體激活對于皮膚的免疫來說很重要。 研究表明在許多實體腫瘤中存在EGFR的高表達或異常表達。EGFR與腫瘤細胞的增殖、血管生成、腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移及細胞凋亡的抑制有關(guān)。其可能機制有：EGFR的高表達引起下游信號傳導(dǎo)的增強；突變型EGFR受體或配體表達的增加導(dǎo)致EGFR的持續(xù)活化；自分泌環(huán)的作用增強；受體下調(diào)機制的破壞;異常信號傳導(dǎo)通路的激活等。EGFR的過表達在惡性腫瘤的演進中起重要作用，膠質(zhì)細胞、腎癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌等組織中都有EGFR的過表達。對膠質(zhì)細胞瘤的研究發(fā)現(xiàn)EGFR的高表達主要與其基因擴增有關(guān)。但有時EGFR表達水平的調(diào)節(jié)異常也存在于翻譯及翻譯后。EGFR在腫瘤中的高表達還可能與活化后降解減少有關(guān)，一些研究指出c-Src可通過抑制受體泛素化和內(nèi)吞作用而上調(diào)EGFR水平。許多腫瘤中有突變型EGFR存在，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)許多種EGFR突變型。突變型EGFR的作用可能包括：具有配體非依賴型受體的細胞持續(xù)活化；由于EGFR的某些結(jié)構(gòu)域缺失而導(dǎo)致受體下調(diào)機制的破壞；異常信號傳導(dǎo)通路的激活；細胞凋亡的抑制等。突變體的產(chǎn)生是由于EGFR基因的缺失、突變和重排。EGFR的配體對細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)有很大影響。EGFR的配體通過自分泌形式激活EGFR促進細胞增殖，他們的共表達往往預(yù)示腫瘤預(yù)后不良，例如，在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的研究中發(fā)現(xiàn)，TGF與EGFR共表達，且這種共表達與病人的生存率顯著相關(guān)。Kopp等人對結(jié)/直腸癌的研究表明腫瘤的自分泌生長是EGFR的過表達及其配體表達共同作用的結(jié)果。 此外，對EGFR與腫瘤的血管生成、高侵襲性及轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究發(fā)現(xiàn)EGFR可以通過Ang-1及VEGF等因子水平的調(diào)節(jié)而影響腫瘤血管生成。 相關(guān)術(shù)語解釋表皮生長因子受體 在過去的20多年里，制藥公司與生物技術(shù)公司一直將表皮生長因子受體（EGFR）作為腫瘤治療的主要靶點，因為有研究表明阻斷EGFR，就可以使細胞信號傳遞中斷，從而遏制細胞的生長繁殖。 表皮生長因子受(Epidermal Growth Factor Receptor) 表皮生長因子 吸煙史與健擇方案的關(guān)系 在NSCLC靶向治療中,患者吸煙史可影響治療轉(zhuǎn)歸,例如表皮生長因子(EGFR)抑制劑治療時,吸煙史(特別是從未吸煙者)是這些藥物有效、有生存受益的臨床預(yù)測指標。 上皮生長因子受體(Epithelial Growth Factor Receptor) 盡管Argos與SpitZ結(jié)合的模式和上皮生長因子(EGF)和上皮生長因子受體(EGFR)結(jié)合的模式十分相似，但Argos與上皮生長因子受體(EGFR)卻無相同的氨基酸序列也無相同的結(jié)構(gòu)。 短語 EGFR inhibitors 因子蒙體克制劑 MDRD eGFR 估計腎小球過濾率 EGFR inhibitor 抑制劑 認識EGFR認識EGFR-正常分裂中的 EGFR 在配體與表皮生長因子受體（EGFR）結(jié)合后，受體發(fā)生了二聚作用，二聚作用既包括兩個同種受體分子的結(jié)合（同源性二聚作用），也包括人類EGF相關(guān)性受體（HER）酪氨酸激酶家族中的不同成員的結(jié)合（異源性二聚作用）。 二聚作用后是酪氨酸殘基的自磷酸化作用。這 在配體與表皮生長因子受體（EGFR）結(jié)合后，受體發(fā)生了二聚作用，二聚作用既包括兩個同種受體分子的結(jié)合（同源性二聚作用），也包括人類EGF相關(guān)性受體（HER）酪氨酸激酶家族中的不同成員的結(jié)合（異源性二聚作用）。 二聚作用后是酪氨酸殘基的自磷酸化作用。這些磷酸化的殘基是募集適配蛋白和額外的酪氨酸激酶底物的結(jié)合位點。蛋白質(zhì)在激活的受體復(fù)合物中相互作用刺激ras蛋白，導(dǎo)致磷酸化級聯(lián)反應(yīng)的發(fā)生和絲裂原激活蛋白（MAP）激酶的激活?；蛘咿D(zhuǎn)錄信號傳導(dǎo)和激活、磷脂酰肌醇激酶-3（PI3K）-Akt和應(yīng)激活化蛋白激酶（SAPK）信號傳導(dǎo)通路將被激活。這些信號通路依次觸發(fā)基因轉(zhuǎn)錄，同時控制細胞增生、分化和生存的通路被激活。 EGFR介導(dǎo)信號通路的特異性和強度取決于激活蛋白的性質(zhì)和四種EGFR家族成員的水平。與HER2結(jié)合的配體不詳，但當(dāng)HER2和EGFR共表達時，前者經(jīng)常與配體激活的后者結(jié)合形成二聚體。這種異源性二聚體與EGFR同源性二聚體相比，往往具有更高的再利用率、穩(wěn)定性和傳導(dǎo)信號的能力。EGFR也能與HER3和HER4發(fā)生二聚作用，其產(chǎn)物具有更高的持久性和更強的PI3K活性。 EGFR 信號傳導(dǎo)通路一旦配體結(jié)合的EGFR被內(nèi)吞入細胞，信號將終止，受體將被降解或再循環(huán)到細胞膜表面，這取決于配體的性質(zhì)。例如，EGF結(jié)合的受體將被降解，而TGF-結(jié)合的受體則進入再循環(huán)。不同的生長因子會影響EGFR信號通路的數(shù)量和持續(xù)時間。 EGFR信號通路有多重的生物學(xué)作用。例如，ras-MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路刺激細胞的分裂和遷徙。EGFR也是多種受體通路的重要介體，起到信號會聚點的作用，能夠?qū)⑿盘栒团c多樣化。例如，在應(yīng)激、膜解聚作用和一些非生理性刺激物（包括氧化劑、放射線和烷化劑）的反應(yīng)中，反向激活能誘導(dǎo)EGFR酪氨酸激酶的磷酸化并隨后發(fā)生信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)。 EGFR家族的成員在正常發(fā)育中起了重要的作用，但在人類腫瘤中經(jīng)常過度表達并失去控制，具體內(nèi)容見惡性腫瘤中的EGFR。 編輯本段eGFR公式：評價與選擇正確理解eGFR公式腎小球濾過率（GFR）是慢性腎臟?。–KD）診斷和分期所依據(jù)的重要功能指標。它不能直接測量，只能用某些物質(zhì)的腎臟或血漿清除率表示。 臨床常用內(nèi)生肌酐清除率（Ccr）估算GFR，但測量Ccr操作繁瑣，影響因素多，易出偏差。數(shù)十年前臨床學(xué)者即開始嘗試開發(fā)含肌酐及性別、年齡、身高和體重等因素的GFR估算值（eGFR）公式。 eGFR公式為CKD分期提供了極大便利，但其缺陷促使人們不斷對其進行完善。最近發(fā)布的美國腎臟病膳食改良實驗（MDRD）公式和慢性腎臟病流行病學(xué)合作（CKD-EPI）公式就是努力的結(jié)果。 在MDRD公式本土化過程中，我國和日本為公式添加的種族系數(shù)分別為1.23和0.8。同是黃種人，為何有如此大的差異？是否有種族之外的影響因素？我國和日本腎病學(xué)者已開始共同探討這一話題。 為此，北京大學(xué)第一醫(yī)院左力教授闡述了eGFR公式開發(fā)歷程，并就種族系數(shù)的差異性進行評說，希望能幫助讀者正確理解eGFR公式。 MDRD公式應(yīng)用發(fā)表于1999年的MDRD原始公式用苦味酸法測量肌酐，用接近GFR真值的碘（125I）海醇腎臟清除率作為GFR參考值（rGFR）。用于開發(fā)公式的1628例患者平均肌酐2.3 mg/dl，rGFR 39.8 ml/（min1.73m2）。經(jīng)檢測，該公式在美國人群中的準確性和精確性優(yōu)于既往eGFR公式，獲得腎臟病預(yù)后生存指南（K/DOQI）的推薦。 為提高準確性，研究者于2006年用更準確的同位素稀釋質(zhì)譜法（IDMS-Traceable）重新測量上述1628例患者的血肌酐水平，將重新表達的MDRD公式用于美國國家健康和營養(yǎng)調(diào)查研究（NHANES）人群，得到eGFR60 ml/（min1.73m2）患病率為8.1%。 大量研究證實，上述公式用于GFR正常或接近正常的人群時，所得eGFR將低于rGFR。 2009年研究者將樣本量擴大到8254例，平均rGFR 68 ml/（min1.73m2），平均肌酐1.7 mg/dl，用IDMS-Traceable法測定肌酐，再次修訂eGFR公式，得到CKD-EPI公式。該公式用于NHANES人群，得到eGFR60 ml/（min1.73m2）的患病率為6.7%。 eGFR協(xié)作組對公式的改良由北京大學(xué)第一醫(yī)院腎內(nèi)科牽頭的我國9個腎臟病中心組成eGFR協(xié)作組，于2005年對MDRD原始公式進行檢驗，發(fā)現(xiàn)當(dāng)rGFR接近正?；蜉^低時，MDRD公式會較rGFR偏低或偏高。 2006年，協(xié)作組納入684例CKD患者，通過添加種族系數(shù)對MDRD原始公式進行本土化。研究采用雙血漿法锝（99mTc）-DTPA血漿清除率作為rGFR，患者平均rGFR 55 ml/（min1.73m2）；用苦味酸法測定血漿肌酐，通過線性回歸將肌酐標準化為MDRD肌酐，回歸斜率1.3，即將eGFR協(xié)作組肌酐乘以1.3轉(zhuǎn)化為MDRD肌酐，決定系數(shù)為0.999。將標準化肌酐水平（平均2.0 mg/dl）、患者性別和年齡代入MDRD原始公式計算eGFR，以eGFR為自變量、rGFR為因變量進行線性回歸，確定種族系數(shù)為1.23。協(xié)作組還公布了與MDRD原始公式形式相同、無種族系數(shù)的eGFR公式：eGFR=175肌酐（mg/dl）-1.234 年齡(歲)-0.179 性別(男性=1，女性=0.79)。用其得到北京市人群eGFR 60 ml/（min1.73m2）患病率為1.7%。 日本eGFR公式變化過程2007年，日本學(xué)者開發(fā)了適合其民族的eGFR公式。該公式來自248例CKD患者，使用IDMS-Traceable肌酐方法并校準到MDRD研究方法?；颊邅碜詢山M研究，平均血肌酐水平分別為1.83 mg/dl和1.28 mg/dl，使用菊粉清除率作為rGFR。同樣通過為MDRD原始公式添加種族系數(shù)的方法，得到的種族系數(shù)為0.88。該公式估算日本人群eGFR60 ml/（min1.73m2）患病率為20%。 2009年，日本學(xué)者將樣本量擴大到413例，對種族系數(shù)進行調(diào)整。肌酐方法和rGFR方法不變，入選患者平均rGFR 59 ml/（min1.73m2），平均肌酐1.6 mg/dl，調(diào)整后的種族系數(shù)為0.80。 美、中、日eGFR相關(guān)研究啟示中國和日本為MDRD公式添加的種族系數(shù)分別為1.23和0.80。同為黃種人，為何差異如此之大？ 當(dāng)建立線性回歸模型時，我們假設(shè)變量呈線性相關(guān)。如果一個變量的變化完全可以用另一變量的變化來解釋，則此回歸分析決定系數(shù)為1。通常臨床研究不可能達到如此精度。 在上述種族系數(shù)調(diào)整建模過程中，實際作了如下假設(shè)：rGFR= MDRD 種族系數(shù) + 隨機誤差。據(jù)此，若用MDRD原始公式計算出的eGFR與rGFR之間無系統(tǒng)差異，則全部為隨機誤差，種族系數(shù)是1；若兩者間有系統(tǒng)差異，則該差異只能由種族系數(shù)承擔(dān)，盡管理想的種族系數(shù)是“種族差異”（可能包括身體構(gòu)成、飲食差異、甚至基因方面差異），而非其他原因?qū)е碌南到y(tǒng)誤差。 在計算種族系數(shù)時，以下因素可能導(dǎo)致偏大或偏小。 rGFR的系統(tǒng)差異 MDRD研究使用碘海醇皮下注射，計算4個時段平均rGFR；我國采用雙血漿法99mTc-DTPA血漿清除率；日本采用持續(xù)靜脈點滴菊粉，計算3個時段菊粉清除率均值。 這三種rGFR存在系統(tǒng)差異：CKD-EPI公式計算的人群平均rGFR為68 ml/（min1.73m2），平均肌酐1.7 mg/dl；日本平均rGFR 59 ml/（min1.73m2），平均肌酐1.6 mg/dl。日本的平均肌酐比美國低0.1 mg/dl，而相應(yīng)rGFR卻也低9 ml/（min1.73m2）。由于日本血肌酐是跟MDRD研究校準過的，這種rGFR之間的差異只能用rGFR系統(tǒng)偏差來解釋。日本rGFR偏低，當(dāng)然計算的種族系數(shù)1.0。 肌酐方法的系統(tǒng)差異 我國和日本的肌酐都校準到MDRD研究的方法，但需要把我國的肌酐乘以1.3才能轉(zhuǎn)化為MDRD肌酐值。若eGFR協(xié)作組測定的肌酐為3.0 mg/dl，轉(zhuǎn)變?yōu)镸DRD肌酐就成了3.9 mg/dl。這個巨大的系統(tǒng)誤差使人聯(lián)想到是否存在因校準帶來系統(tǒng)誤差，例如標本轉(zhuǎn)運、凍融、測量過程等。 如果用在中國國內(nèi)測量的肌酐值直接套入加中國系數(shù)的MDRD方程，得到的eGFR高于GFR真值。如果使用加種族系數(shù)的方程，則首先需把肌酐校準到MDRD研究的方法，可直接將肌酐乘以1.3，再套用加種族系數(shù)的方程。我們不建議這樣做，實際上直接使用公式eGFR=175肌酐(mg/dl)-1.234年齡(歲)-0.179 性別(男性=1，女性=0.79)更方便。由于不同實驗室存在系統(tǒng)誤差，如果用該公式進行人群研究，建議首先將肌酐水平校準到eGFR協(xié)作組方法，否則獲得的eGFR下降患病率差異較大。但如果將公式用于個體患者和臨床決策，就沒有必要進行這種復(fù)雜校準。 rGFR分布的系統(tǒng)差異 原始MDRD研究的rGFR平均值為39.8 ml/（min1.73m2），據(jù)此NHANES的eGFR降低患病率為8.1%；CKD-EPI研究rGFR均值為68 ml/（min1.73m2），據(jù)此NHANES的eGFR降低患病率為6.7%。這說明用于研發(fā)公式的患者rGFR分布對eGFR公式的最終形式有很大影響。當(dāng)rGFR包含早期CKD或健康者較少時，研發(fā)的公式不適用于健康人群。MDRD公式和日本修訂公式的rGFR均包含較少的早期CKD患者，日本公式甚至還包含急性腎衰竭患者。因此用于社區(qū)人群調(diào)查時，eGFR 60 ml/（min1.73m2）患病率將被高估。 rGFR分布差異導(dǎo)致的公式形式差異不但影響對人群eGFR降低患病率的估計，也會導(dǎo)致種族系數(shù)偏差。 如何使eGFR更接近真值是個難題，需要證實不同的rGFR是否有系統(tǒng)差異，并計算其大小。另外，在用肌酐估計eGFR公式時，是否存在“真正的”種族系數(shù)、種族系數(shù)是多少。EGFR（epithelial growth factor receptor，表皮生長因子受體）本身具有酷氨酶激酶活性，一旦與表皮生長因子（EGF）組合可啟動細胞核內(nèi)的有關(guān)基因，從而促進細胞分裂增殖。胃癌、乳腺癌、膀胱癌和頭頸部鱗癌的EGFR表達增高。 EGFR是原癌基因c-erbB1的表達產(chǎn)物，是表皮生長因子受體（HER）家族成員之一。該家族包括HER1（erbB1，EGFR）、HER2（erbB2，NEU）、HER3（erbB3）及HER4（erbB4）。HER家族在細胞生理過程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。試劑盒：人表皮生長因子受體(EGFR)ELISA試劑盒本試劑盒僅供研究使用。藥品名稱：通用名：人表皮生長因子受體(EGFR)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用目的：本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中表皮生長因子受體(EGFR)含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人表皮生長因子受體(EGFR)水平。用純化的人抗-EGFR抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入表皮生長因子受體(EGFR)再與HRP標記的羊抗人抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的表皮生長因子受體呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人表皮生長因子受體(EGFR)濃度。試劑盒組成 120倍濃縮洗滌液30ml1瓶7終止液6ml1瓶2酶標試劑6ml1瓶8標準品（9g/L）0.5ml1瓶3酶標包被板12孔8條9標準品稀釋液1.5ml1瓶4樣品稀釋液6ml1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml1/瓶12密封袋1個標本要求1標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟：1.標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標準品100l，然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50l，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100l分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50l，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50l棄掉，再各取5