GB18466-2005《醫(yī)療機(jī)構(gòu)水污染物排放標(biāo)準(zhǔn)》

本電子版內(nèi)容如與中國(guó)環(huán)境出版社出版的標(biāo)準(zhǔn)文本有出入 以 中國(guó)環(huán)境出版社出版的文本為準(zhǔn) 中 華 人 民 共 和 國(guó) 國(guó) 家 標(biāo) 準(zhǔn) GB 18466 2005 醫(yī)療機(jī)構(gòu)水污染物排放標(biāo)準(zhǔn) Discharge standard of water pollutants for medical organization 2005 07 27 發(fā)布 2006 01 01 實(shí)施 國(guó)家環(huán)境保護(hù)總局 國(guó) 家 質(zhì) 量 監(jiān) 督 檢 驗(yàn) 檢 疫 總 局 發(fā)布 目錄 前 言 II 1 范圍 1 2 規(guī)范性引用文件 1 3 術(shù)語(yǔ)和定義 1 4 技術(shù)內(nèi)容 1 4 1 污水排放要求 1 4 2 廢氣排放要求 4 4 3 污泥控制與處置 4 5 處理工藝與消毒要求 4 6 取樣與監(jiān)測(cè) 5 6 1 污水取樣與監(jiān)測(cè) 5 6 2 大氣取樣與監(jiān)測(cè) 7 6 3 污泥取樣與監(jiān)測(cè) 7 7 標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施與監(jiān)督 7 附錄 A 8 附錄 B 15 附錄 C 19 附錄 D 21 附錄 E 23 附錄 F 25 I 前言 為貫徹 中華人民共和國(guó)環(huán)境保護(hù)法 中華人民共和國(guó)水污染防治法 中華人民共和 國(guó) 海洋環(huán)境保護(hù)法 中華人民共和國(guó)大氣污染防治法 中華人民共和國(guó)傳染病防治法 加強(qiáng) 對(duì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水 污水處理站廢氣 污泥排放的控制和管理 預(yù)防和控制傳染病的發(fā)生和流行 保障人體健康 維護(hù)良好的生態(tài)環(huán)境 制定本標(biāo)準(zhǔn) 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水及污水處理站產(chǎn)生的廢氣和污泥的污染物控制項(xiàng)目及其排放限 值 處理工藝與消毒要求 取樣與監(jiān)測(cè)和標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施與監(jiān)督等 本標(biāo)準(zhǔn)自實(shí)施之日起 代替GB8978 1996 污水綜合排放標(biāo)準(zhǔn) 中有關(guān)醫(yī)療機(jī)構(gòu)水污染物 排 放標(biāo)準(zhǔn)部分 并取代 GB18466 2001 醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水排放要求 新 擴(kuò) 改醫(yī)療機(jī)構(gòu)自本標(biāo)準(zhǔn)實(shí) 施之日起按本標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施管理 現(xiàn)有醫(yī)療機(jī)構(gòu)在 2007 年 12 月 31 日前達(dá)到本標(biāo)準(zhǔn)要求 本標(biāo)準(zhǔn)的附錄 A 附錄 B 附錄 C 附錄 D 附錄 E 和附錄 F 為規(guī)范性附錄 本標(biāo)準(zhǔn)為首次發(fā)布 本標(biāo)準(zhǔn)由國(guó)家環(huán)境保護(hù)總局科技標(biāo)準(zhǔn)司提出并歸口 本標(biāo)準(zhǔn)委托北京市環(huán)境保護(hù)科學(xué)研究院和中國(guó)疾病預(yù)防控制中心起草 本標(biāo)準(zhǔn)由國(guó)家環(huán)境保護(hù)總局 2005 年 07 月 27 日批準(zhǔn) 本標(biāo)準(zhǔn)由國(guó)家環(huán)境保護(hù)總局負(fù)責(zé)解釋 II 1 范圍 醫(yī)療機(jī)構(gòu)水污染物排放標(biāo)準(zhǔn) 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水 污水處理站產(chǎn)生的廢氣 污泥的污染物控制項(xiàng)目及其排 放和控制限值 處理工藝和消毒要求 取樣與監(jiān)測(cè)和標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施與監(jiān)督 本標(biāo)準(zhǔn)適用于醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水 污水處理站產(chǎn)生污泥及廢氣排放的控制 醫(yī)療機(jī)構(gòu)建設(shè) 項(xiàng)目的環(huán)境影響評(píng)價(jià) 環(huán)境保護(hù)設(shè)施設(shè)計(jì) 竣工驗(yàn)收及驗(yàn)收后的排放管理 當(dāng)醫(yī)療機(jī)構(gòu)的辦 公區(qū) 非醫(yī)療生活區(qū)等污水與病區(qū)污水合流收集時(shí) 其綜合污水排放均執(zhí)行本標(biāo)準(zhǔn) 建有分 流污水收集系統(tǒng)的醫(yī)療機(jī)構(gòu) 其非病區(qū)生活區(qū)污水排放執(zhí)行 GB8978 的相關(guān)規(guī)定 2 規(guī)范性引用文件 下列標(biāo)準(zhǔn)和本標(biāo)準(zhǔn)表 5 表 6 所列分析方法標(biāo)準(zhǔn)及規(guī)范所含條文在本標(biāo)準(zhǔn)中被引用即構(gòu) 成為本標(biāo)準(zhǔn)的條文 與本標(biāo)準(zhǔn)同效 當(dāng)上述標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范被修訂時(shí) 應(yīng)使用其最新版本 GB8978 污水綜合排放標(biāo)準(zhǔn) GB3838 地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) GB3097 海水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn) GB16297 大氣污染物綜合排放標(biāo)準(zhǔn) HJ T55大氣污染物無(wú)組織排放監(jiān)測(cè)技術(shù)導(dǎo)則 HJ T91地表水和污水檢測(cè)技術(shù)規(guī)范 3 術(shù)語(yǔ)和定義 本標(biāo)準(zhǔn)采用下列定義 3 1 醫(yī)療機(jī)構(gòu) medical organization 指從事疾病診斷 治療活動(dòng)的醫(yī)院 衛(wèi)生院 療養(yǎng)院 門(mén)診部 診所 衛(wèi)生急救站等 3 2 醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水medical organization wastewater 指醫(yī)療機(jī)構(gòu)門(mén)診 病房 手術(shù)室 各類檢驗(yàn)室 病理解剖室 放射室 洗衣房 太平間 等處排出的診療 生活及糞便污水 當(dāng)醫(yī)療機(jī)構(gòu)其他污水與上述污水混合排出時(shí)一律視為醫(yī) 療機(jī)構(gòu)污水 3 3 污泥sludge 指醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水處理過(guò)程中產(chǎn)生的柵渣 沉淀污泥和化糞池污泥 3 4 廢氣 waste gas 指醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水處理過(guò)程中產(chǎn)生的有害氣體 4 技術(shù)內(nèi)容 4 1 污水排放要求 4 1 1 傳染病和結(jié)核病醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水排放執(zhí)行表 1 的規(guī)定 4 1 2 縣級(jí)及縣級(jí)以上或 20 張床位及以上的綜合醫(yī)療機(jī)構(gòu)和其他醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水排放執(zhí)行表 2 1 的規(guī)定 直接或間接排入地表水體和海域的污水執(zhí)行排放標(biāo)準(zhǔn) 排入終端已建有正常運(yùn)行城 鎮(zhèn)二級(jí)污水處理廠的下水道的污水 執(zhí)行預(yù)處理標(biāo)準(zhǔn) 4 1 3 縣級(jí)以下或 20 張床位以下的綜合醫(yī)療機(jī)構(gòu)和其他所有醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水經(jīng)消毒處理后方可 排放 4 1 4 禁止向 GB3838I II 類水域和 III 類水域的飲用水保護(hù)區(qū)和游泳區(qū) GB3097 一 二類 海域直接排放醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水 4 1 5 帶傳染病房的綜合醫(yī)療機(jī)構(gòu) 應(yīng)將傳染病房污水與非傳染病房污水分開(kāi) 傳染病房的 污水 糞便經(jīng)過(guò)消毒后方可與其他污水合并處理 4 1 6 采用含氯消毒劑進(jìn)行消毒的醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水 若直接排入地表水體和海域 應(yīng)進(jìn)行脫氯 處理 使總余氯小于 0 5mg L 表 1傳染病 結(jié)核病醫(yī)療機(jī)構(gòu)水污染物排放限值 日均值 序號(hào) 1 2 3 4 5 PH 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 控制項(xiàng)目 糞大腸菌群數(shù) MPN L 腸道致病菌 腸道病毒 結(jié)核桿菌 化學(xué)需氧量 COD 濃度 mg L 最高允許排放負(fù)荷 g 床位 生化需氧量 BOD 濃度 mg L 最高允許排放負(fù)荷 g 床位 懸浮物 SS 濃度 mg L 最高允許排放負(fù)荷 g 床位 氨氮 mg L 15 動(dòng)植物油 mg L 5 石油類 mg L 5 陰離子表面活性劑 mg L 色度 稀釋倍數(shù) 30 揮發(fā)酚 mg L 0 5 總氰化物 mg L 總汞 mg L 0 05 總鎘 mg L 0 1 總鉻 mg L 1 5 六價(jià)鉻 mg L 0 5 總砷 mg L 0 5 標(biāo)準(zhǔn)值 不得檢出 不得檢出 不得檢出 6 9 60 60 20 20 20 20 0 5 2 100 5 21 22 23 24 25 總鉛 mg L 1 0 總銀 mg L 0 5 總 Bq L 1 總 Bq L 10 總余氯 1 2 mg L 直接排入水體的要求 0 5 注 1 采用含氯消毒劑消毒的工藝控制要求為 消毒接觸池的接觸時(shí)間 1 5h 接觸池出口總余氯 6 5 10 mg L 2 采用其他消毒劑對(duì)總余氯不作要求 表 2綜合醫(yī)療機(jī)構(gòu)和其他醫(yī)療機(jī)構(gòu)水污染物排放限值 日均值 序號(hào) 1 2 3 4 pH 5 6 7 8 9 10 11 控制項(xiàng)目 糞大腸菌群數(shù) MPN L 腸道致病菌 腸道病毒 化學(xué)需氧量 COD 濃度 mg L 最高允許排放負(fù)荷 g 床位 生化需氧量 BOD 濃度 mg L 最高允許排放負(fù)荷 g 床位 懸浮物 SS 濃度 mg L 最高允許排放負(fù)荷 g 床位 氨氮 mg L 動(dòng)植物油 mg L 石油類 mg L 陰離子表面活性劑 mg L 排放標(biāo)準(zhǔn) 不得檢出 不得檢出 6 9 60 60 20 20 20 20 預(yù)處理標(biāo) 準(zhǔn) 500 6 9 250 250 100 100 60 60 20 20 5 15 5 5 10 12色度 稀釋倍數(shù) 30 13揮發(fā)酚 mg L 1 0 0 5 14總氰化物 mg L 0 50 5 15 16 17 18 總汞 mg L 總鎘 mg L 總鉻 mg L 六價(jià)鉻 mg L 0 05 0 1 1 5 0 5 0 05 0 1 1 5 0 5 3 19 20 21 22 23 24 總砷 mg L 總鉛 mg L 總銀 mg L 總 Bq L 1 總 Bq L 10 總余氯 1 2 mg L 0 5 1 0 0 5 1 10 0 5 0 5 1 0 0 5 注 1 采用含氯消毒劑消毒的工藝控制要求為 一級(jí)標(biāo)準(zhǔn) 消毒接觸池接觸時(shí)間 1h 接觸池出口總余氯 3 10 mg L 二級(jí)標(biāo)準(zhǔn) 消毒接觸池接觸時(shí)間 1h 接觸池出口總余氯 2 8 mg L 2 采用其他消毒劑對(duì)總余氯不作要求 4 2 廢氣排放要求 4 2 1 污水處理站排出的廢氣應(yīng)進(jìn)行除臭除味處理 保證污水處理站周邊空氣中污染物達(dá)到 表 3 要求 4 2 2 傳染病和結(jié)核病醫(yī)療機(jī)構(gòu)應(yīng)對(duì)污水處理站排出的廢氣進(jìn)行消毒處理 表 3污水處理站周邊大氣污染物最高允許濃度 序號(hào) 1 2 3 4 5 控制項(xiàng)目 氨 mg m3 1 0 硫化氫 mg m3 0 03 臭氣濃度 無(wú)量綱 10 氯氣 mg m3 0 1 甲烷 指處理站內(nèi)最高體積百分?jǐn)?shù) 標(biāo)準(zhǔn)值 1 4 3 污泥控制與處置 4 3 1 柵渣 化糞池和污水處理站污泥屬危險(xiǎn)廢物 應(yīng)按危險(xiǎn)廢物進(jìn)行處理和處置 4 3 2 污泥清淘前應(yīng)進(jìn)行監(jiān)測(cè) 達(dá)到表 4 要求 表 4醫(yī)療機(jī)構(gòu)污泥控制標(biāo)準(zhǔn) 醫(yī)療機(jī)構(gòu)類別 糞大腸菌群數(shù) MPN g 腸道致病菌腸道病毒結(jié)核桿菌 蛔蟲(chóng)卵死亡率 傳染病醫(yī)療機(jī)構(gòu) 結(jié)核病醫(yī)療機(jī)構(gòu) 綜 合 醫(yī) 療 機(jī) 構(gòu) 和 其它醫(yī)療機(jī)構(gòu) 5 處理工藝與消毒要求 100 100 100 不得檢出 不得檢出 不得檢出 95 95 95 5 1 醫(yī)療機(jī)構(gòu)病區(qū)和非病區(qū)的污水 傳染病區(qū)和非傳染病區(qū)的污水應(yīng)分流 不得將固體傳染 性廢物 各種化學(xué)廢液棄置和傾倒排入下水道 4 5 2 傳染病醫(yī)療機(jī)構(gòu)和綜合醫(yī)療機(jī)構(gòu)的傳染病房應(yīng)設(shè)專用化糞池 收集經(jīng)消毒處理后的糞便 排泄物等傳染性廢物 5 3 化糞池應(yīng)按最高日排水量設(shè)計(jì) 停留時(shí)間為 24 36h 清掏周期為 180 360d 5 4 醫(yī)療機(jī)構(gòu)的各種特殊排水應(yīng)單獨(dú)收集并進(jìn)行處理后 再排入醫(yī)院污水處理系統(tǒng) 5 4 1 低放射性廢水應(yīng)經(jīng)衰變池處理 5 4 2 洗相室廢液應(yīng)回收銀 并對(duì)廢液進(jìn)行處理 5 4 3 口腔科含汞廢水應(yīng)進(jìn)行除汞處理 5 4 4 檢驗(yàn)室廢水應(yīng)根據(jù)使用化學(xué)品的性質(zhì)單獨(dú)收集 單獨(dú)處理 5 4 5 含油廢水應(yīng)設(shè)置隔油池處理 5 5 傳染病醫(yī)療機(jī)構(gòu)和結(jié)核病醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水處理宜采用二級(jí)處理 消毒工藝或深度處理 消毒 工藝 5 6 綜合醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水排放執(zhí)行排放標(biāo)準(zhǔn)時(shí) 宜采用二級(jí)處理 消毒工藝或深度處理 消毒工 藝 執(zhí)行預(yù)處理標(biāo)準(zhǔn)時(shí)宜采用一級(jí)處理或一級(jí)強(qiáng)化處理 消毒工藝 5 7 消毒劑應(yīng)根據(jù)技術(shù)經(jīng)濟(jì)分析選用 通常使用的有 二氧化氯 次氯酸鈉 液氯 紫外線 和臭氧等 采用含氯消毒劑時(shí)按表 1 表 2 要求設(shè)計(jì) 5 7 1 采用紫外線消毒 污水懸浮物濃度應(yīng)小于 10 mg L 照射劑量 30 40mJ cm 2 照射接觸時(shí) 間應(yīng)大于 10s 或由試驗(yàn)確定 5 7 2 采用臭氧消毒 污水懸浮物濃度應(yīng)小于 20 mg L 臭氧用量應(yīng)大于 10mg L 接觸時(shí)間應(yīng) 大于 12min 或由試驗(yàn)確定 6 取樣與監(jiān)測(cè) 6 1 污水取樣與監(jiān)測(cè) 6 1 1 應(yīng)按規(guī)定設(shè)置科室處理設(shè)施排出口和單位污水外排口 并設(shè)置排放口標(biāo)志 6 1 2 表 1 第 16 22 項(xiàng) 表 2 第 15 21 項(xiàng)在科室處理設(shè)施排出口取樣 總 總 在衰變池出 口取樣監(jiān)測(cè) 其它污染物的采樣點(diǎn)一律設(shè)在排污單位的外排口 6 1 2 醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水外排口處應(yīng)設(shè)污水計(jì)量裝置 并宜設(shè)污水比例采樣器和在線監(jiān)測(cè)設(shè)備 6 1 3 監(jiān)測(cè)頻率 6 1 3 1 糞大腸菌群數(shù)每月監(jiān)測(cè)不得少于 1 次 采用含氯消毒劑消毒時(shí) 接觸池出口總余氯每 日監(jiān)測(cè)不得少于 2 次 采用間歇式消毒處理的 每次排放前監(jiān)測(cè) 6 1 3 2 腸道致病菌主要監(jiān)測(cè)沙門(mén)氏菌 志賀氏菌 沙門(mén)氏菌的監(jiān)測(cè) 每季度不少于 1 次 志 賀氏菌的監(jiān)測(cè) 每年不少于 2 次 其他致病菌和腸道病毒按 6 1 3 3 規(guī)定進(jìn)行監(jiān)測(cè) 結(jié)核病 醫(yī)療機(jī)構(gòu)根據(jù)需要監(jiān)測(cè)結(jié)核桿菌 6 1 3 3 收治了傳染病病人的醫(yī)院應(yīng)加強(qiáng)對(duì)腸道致病菌和腸道病毒的監(jiān)測(cè) 同時(shí)收治的感染上 同一種腸道致病菌或腸道病毒的甲類傳染病病人數(shù)超過(guò) 5 人 或乙類傳染病病人數(shù)超過(guò) 10 人 或丙類傳染病病人數(shù)超過(guò) 20 人時(shí) 應(yīng)及時(shí)監(jiān)測(cè)該種傳染病病原體 6 1 3 4 理化指標(biāo)監(jiān)測(cè)頻率 pH 每日監(jiān)測(cè)不少于 2 次 COD 和 SS 每周監(jiān)測(cè) 1 次 其他污染物 每季度監(jiān)測(cè)不少于 1 次 5 6 1 3 5 采樣頻率 每 4 小時(shí)采樣 1 次 一日至少采樣 3 次 測(cè)定結(jié)果以日均值計(jì) 6 1 4 監(jiān)督性監(jiān)測(cè)按 HJ T91 執(zhí)行 6 1 5 監(jiān)測(cè)分析方法按表 5 和附錄 6 1 6 污染物單位排放負(fù)荷計(jì)算見(jiàn)附錄 F 表 5水污染物監(jiān)測(cè)分析方法 序號(hào) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 控制項(xiàng)目 糞大腸菌群數(shù) 沙門(mén)氏菌 志賀氏菌 結(jié)核桿菌 總余氯 化學(xué)需氧量 COD 生化需氧量 BOD 懸浮物 SS 氨氮 測(cè)定方法 多管發(fā)酵法 N N 二乙基 1 4 苯二胺分光光度法 N N 二乙基 1 4 苯二胺滴定法 重鉻酸鹽法 稀釋與接種法 重量法 蒸餾和滴定法 測(cè)定下限 mg L 方法來(lái)源 附錄 A 附錄 B 附錄 C 附錄 E GB11898 GB11897 GB11914 30 GB74882 GB11901 0 2GB7478 GB7479 10 11 動(dòng)植物油 石油類 比色法 紅外光度法 紅外光度法 0 05 GB T 1 GB T 1 12陰離子表面活性劑亞甲藍(lán)分光光度法GB74940 05 13色 度稀釋倍數(shù)法GB11903 14 pH 值 15總 汞 玻璃電極法 冷吸收分光光度法 雙硫腙分光光度法 0 0001 0 002 GB6920 GB7468 GB7469 16揮發(fā)酚蒸餾后 4 氨基安替比林分光光度法 硝酸銀滴定法 0 002 GB7490 0 25GB7486 17 18 總氰化物 總 鎘 異煙酸 吡唑啉酮比色法 吡啶 巴比妥酸比色法 原子吸收分光光度法 螯合萃取法 雙硫腙分光光度法 0 004 0 002 0 001 0 001 GB7486 GB7486 GB7475 GB7471 19 20 21 22 23 24 25 總 鉻 六價(jià)鉻 總 砷 總 鉛 總 銀 總 總 高錳酸鉀氧化 二苯碳酰二肼分光光度法 二苯碳酰二肼分光光度法 二乙基二硫代氨基甲酸銀分光光度法 原子吸收分光光度法 螯合萃取法 雙硫腙分光光度法 火焰原子吸收分光光度法 鎘試劑 2B 分光光度法 厚源法 蒸發(fā)法 0 004 GB7466 0 004 0 007 GB7485 0 01GB7475 0 01GB7470 0 03GB 0 01GB11908 EJ T10750 05Bq L EJ T900 6 6 2 大氣取樣與監(jiān)測(cè) 6 2 1 污水處理站大氣監(jiān)測(cè)點(diǎn)的布置方法與采樣方法按 GB16297 中附錄 C 和 HJ T55 的有關(guān)規(guī) 定執(zhí)行 6 2 2 采樣頻率 每 2h 采樣一次 共采集 4 次 取其最大測(cè)定值 每季度監(jiān)測(cè)一次 6 2 3 監(jiān)測(cè)分析方法按表 6 表 6大氣污染物監(jiān)測(cè)分析方法 序號(hào) 1 2 3 4 5 控制項(xiàng)目 氨 硫化氫 臭氣濃度 無(wú)量綱 氯氣 甲烷 測(cè)定方法 次氯酸鈉 水楊酸分光光度法 氣相色譜法 三點(diǎn)比較式臭袋法 甲基橙分光光度法 氣相色譜法 方法來(lái)源 GB T14679 GB T14678 GB T14675 HJ T30 CJ 3037 6 3 污泥取樣與監(jiān)測(cè) 6 3 1 取樣方法 采用多點(diǎn)取樣 樣品應(yīng)有代表性 樣品重量不小于 1kg 清掏前監(jiān)測(cè) 6 3 2 監(jiān)測(cè)分析方法見(jiàn)附錄 A 附錄 B 附錄 C 附錄 D 和附錄 E 7 標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施與監(jiān)督 7 1 本標(biāo)準(zhǔn)由縣級(jí)以上人民政府環(huán)境保護(hù)行政主管部門(mén)負(fù)責(zé)監(jiān)督實(shí)施 7 2 省 自治區(qū) 直轄市人民政府對(duì)執(zhí)行本標(biāo)準(zhǔn)不能達(dá)到本地區(qū)環(huán)境功能要求時(shí) 可以根據(jù) 總量控制要求和環(huán)境影響評(píng)價(jià)結(jié)果制定嚴(yán)于本標(biāo)準(zhǔn)的地方污染物排放標(biāo)準(zhǔn) 7 A1 儀器和設(shè)備 附錄A 規(guī)范性附錄 醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水和污泥中糞大腸菌群的檢驗(yàn)方法 A1 1 高壓蒸汽滅菌器 A1 2 干燥滅菌箱 A1 3 培養(yǎng)箱 37 A1 4 恒溫水浴箱 A1 5 電爐 A1 6 天平 A1 7 滅菌平皿 A1 8 滅菌刻度吸管 A1 9 酒精燈 A2 培養(yǎng)基和試劑 A2 1 乳糖膽鹽培養(yǎng)液 A2 1 1 成分 蛋白胨 20g 豬膽鹽 或牛 羊膽鹽 5g 乳糖 5g 0 4 溴甲酚紫水溶液 2 5mL 蒸餾水 1000mL A2 1 2 制法 將蛋白胨 豬膽鹽及乳糖溶解于 1000mL 蒸餾水中 調(diào)整 pH 到 7 4 加入指示劑 充分 混勻 分裝于內(nèi)有倒管的試管中 115 下滅菌 20min 貯存于冷暗處備用 A2 2 三倍濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液 A2 2 1 成分 蛋白胨 60g 豬膽鹽 或牛 羊膽鹽 15g 乳糖 15g 0 4 溴甲酚紫水溶液 7 5mL 蒸餾水 1000mL A2 2 2 制法 制法同附錄 A2 1 2 A2 3 伊紅美蘭培養(yǎng)基 EMB 培養(yǎng)基 A2 3 1 成分 蛋白胨 10g 乳糖 10g 磷酸氫二鉀 2g 瓊脂 20g 2 伊紅水溶液 20mL 0 5 美藍(lán)水溶液 13mL 8 蒸餾水 1000mL A2 3 2 制法 將瓊脂加到 900mL 蒸餾水中 加熱溶解 然后加入磷酸氫二鉀和蛋白胨 混勻使溶解 再加入蒸餾水補(bǔ)足至 1000mL 調(diào)整 pH 至 7 2 7 4 趁熱用脫脂棉和砂布過(guò)濾 再加入乳糖 混勻 定量分裝于燒瓶?jī)?nèi) 115 滅菌 20min 作為儲(chǔ)備培養(yǎng)基貯存于冷暗處備用 臨用時(shí) 加熱融化儲(chǔ)備培養(yǎng)基 待冷至60 左右 根據(jù)燒瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基的容量 加入一 定量的已滅菌的 2 伊紅水溶液和 0 5 美藍(lán)水溶液 充分搖勻 防止產(chǎn)生氣泡 傾注平皿 備用 A2 4 乳糖蛋白胨培養(yǎng)液 A2 4 1 成分 蛋白胨 10g 牛肉膏 3g 乳糖 5g 氯化鈉 5g 1 6 溴甲酚紫乙醇溶液 1mL 蒸餾水 1000mL A2 4 2 制法 將蛋白胨 牛肉膏 乳糖及氯化鈉加熱溶解于 1000mL 蒸餾水中 調(diào)整 pH 到 7 2 7 4 加入 1 6 溴甲酚紫乙醇溶液 1mL 充分混勻 分裝于內(nèi)有倒管的試管中 115 下滅菌 20min 貯存于冷暗處備用 A2 5 革蘭氏染色液 A2 5 1 結(jié)晶紫染色液 結(jié)晶紫 1g 95 乙醇溶液 20mL 1 草酸銨水溶液 1000mL 將結(jié)晶紫溶于乙醇中 然后與草酸銨水溶液混合 A2 5 2 革蘭氏碘液 碘 1g 碘化鉀 2g 蒸餾水 300mL 將碘與碘化鉀混合 加入蒸餾水少許 充分搖勻 待完全溶解 再加入蒸餾水至 300mL A2 5 3 脫色液 95 乙醇 A2 5 4 沙黃復(fù)染液 沙黃 1g 95 乙醇 2g 蒸餾水 90mL 將沙黃溶于 95 乙醇中 然后用蒸餾水稀釋 A2 6 染色法 染色的基本步驟為 1 涂片 在載玻片上滴加一滴生理鹽水 用滅菌的接種環(huán)取菌落 少許 與生理鹽水混勻 涂布成薄膜 2 干燥 在室溫中使自然干燥 3 固定 將涂片迅 速通過(guò)火焰 2 3 次 以載玻片反面接觸皮膚 熱而不燙為度 4 染色 滴加結(jié)晶紫染色液 染色 1min 水洗 5 媒染 滴加革蘭氏碘液 作用 1min 水洗 6 脫色 滴加 95 乙醇 脫色 約 30s 水洗 7 復(fù)染 滴加復(fù)染液 復(fù)染 1min 水洗 9 革蘭氏陽(yáng)性菌染色后呈紫色 革蘭氏陰性菌染色后呈紅色 注 亦可用 1 10 稀釋的石炭酸復(fù)紅染色液作復(fù)染劑 復(fù)染時(shí)間為 10s A3 檢驗(yàn)程序 檢驗(yàn)程序見(jiàn)圖 A 樣品處理 確定樣品接種量 發(fā)酵試驗(yàn) 將樣品接種于乳糖膽鹽培養(yǎng)液 44 培養(yǎng)24h 平板分離 將產(chǎn)酸發(fā)酵管液接種于EMB 37 培養(yǎng)18 24h 鑒定 挑取可疑菌落革蘭氏染色 鏡檢 鑒定 挑取革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌接種于乳糖蛋白胨培養(yǎng)液 44 培養(yǎng)24h 計(jì)數(shù) 根據(jù)產(chǎn)酸產(chǎn)氣的陽(yáng)性管數(shù)查MPN表 檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告 圖 A污水 污泥中糞大腸菌群檢驗(yàn)程序 A4 操作步驟 A4 1 樣品準(zhǔn)備 A4 1 1 污水 污水樣品應(yīng)至少取 200mL 使用前應(yīng)充分混勻 根據(jù)預(yù)計(jì)的污水樣品中糞大腸菌群數(shù)確定污水樣品接種量 糞大腸菌群數(shù)量相對(duì)較少 的接種量一般為 10mL 1mL 0 1mL 糞大腸菌群數(shù)較多時(shí)接種量為 1mL 0 1mL 0 01mL 或 0 1mL 0 01mL 0 001mL 等 接種量少于 1mL 時(shí) 水樣應(yīng)制成稀釋樣品后供發(fā)酵試驗(yàn)使用 接種量為 0 1mL 0 01mL 時(shí) 取稀釋比分別為 1 10 1 100 其它接種量的稀釋比依此類推 1 10 稀釋樣品的制作方法為 吸取 1mL 水樣 注入到盛有 9mL 滅菌水的試管中 混勻 制成 1 10 稀釋樣品 因此 取 1mL1 10 稀釋樣品 等于取 0 1mL 污水樣品 其它稀釋比的 稀釋樣品同法制作 注 1 若樣品為經(jīng)過(guò)氯消毒的污水 應(yīng)在采樣后立即用 5 硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯 A4 1 2 污泥 污泥樣品應(yīng)至少取 200g 使用前應(yīng)充分混勻 10 根據(jù)預(yù)計(jì)的污泥樣品中糞大腸菌群數(shù)量確定污泥樣品接種量 糞大腸菌群數(shù)量相對(duì)較 少的污泥樣品接種量一般為 0 1g 0 01g 0 001g 糞大腸菌群數(shù)量較多時(shí)接種量為 0 01g 0 001g 0 0001g 或 0 001g 0 0001g 0 00001g 等 污泥樣品應(yīng)制成稀釋樣品后供發(fā)酵試驗(yàn)使用 接種量0 1g 0 01g 0 001g的 稀釋樣 品制作方法如下 取 20g 污泥樣品 加入到三角燒瓶中 加滅菌水使成 200mL 混勻 制成 1 10 稀釋樣品 吸取 1 10 稀釋樣品 1mL 注入到盛有 9mL 滅菌水的試管中 混勻 制成 1 100 稀釋樣品 按同法制成 1 1000 稀釋樣品 接種 1mL1 10 1 100 1 1000 稀釋樣品等于接種 0 1g 0 01g 0 001g 污泥樣品 注 1 若樣品為經(jīng)過(guò)氯消毒的污泥 應(yīng)在采樣后立即用 5 硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯 A4 2 發(fā)酵試驗(yàn) 將樣品接種于裝有乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管 內(nèi)有小倒管 中 44 培養(yǎng) 24h 樣品接種 體積以及管內(nèi)乳糖膽鹽培養(yǎng)液的濃度與體積根據(jù)以下條件確定 樣品為污水時(shí) 取三個(gè)接種量 每個(gè)接種量的樣品分別接種于 5 個(gè)試管內(nèi) 共需 15 個(gè) 試管 試管內(nèi)乳糖膽鹽培養(yǎng)液的濃度與體積應(yīng)根據(jù)接種量確定 若接種量為 10mL 吸取 10mL 樣品接種于裝有 5mL 三倍濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管內(nèi) 若接種量為 1mL 時(shí) 吸取 1mL 樣品 接種于裝有 10mL 普通濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管內(nèi) 若接種量少于 1mL 時(shí) 吸取 1mL 稀釋 樣品接種于裝有 10mL 普通濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管內(nèi) 樣品為污泥時(shí) 取三個(gè)接種量 每個(gè)接種量的稀釋樣品分別接種于 3 個(gè)試管內(nèi) 共需 9 個(gè)試管 9 個(gè)試管中 各裝有 10mL 乳糖膽鹽培養(yǎng)液 各個(gè)試管接種稀釋樣品體積均為 1mL A4 3 平板分離 大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸時(shí)培養(yǎng)液變色 產(chǎn)氣時(shí)小倒管內(nèi)出現(xiàn)氣泡 經(jīng) 24h 培養(yǎng)后 將產(chǎn) 酸的試管內(nèi)培養(yǎng)液分別劃線接種于 EMB 培養(yǎng)基上 置于 37 培養(yǎng)箱中 培養(yǎng) 18 24h A4 4 鑒定 挑選可疑糞大腸菌群菌落 進(jìn)行革蘭氏染色和鏡檢 可疑菌落有 1 深紫黑色 具有 金屬光澤的菌落 2 紫黑色 不帶或略帶金屑光澤的菌落 3 淡紫紅色 中心色較深的菌 落 上述涂片鏡檢的菌落如為革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌 則挑取上述典型菌落 1 3 個(gè)接種于 盛有 5mL 乳糖蛋白胨培養(yǎng)液倒管和倒管的試管內(nèi) 置于 44 培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24h 產(chǎn)酸產(chǎn)氣試 管為糞大腸菌群陽(yáng)性管 A5 計(jì)數(shù) 根據(jù)證實(shí)有糞大腸菌群存在的陽(yáng)性管數(shù) 查表 A1 或 A2 可得 100mL 污水或 1g 污泥中 糞大腸菌群 MPN 值 由于表 A1 和表 A2 是按一定的三個(gè) 10 倍濃度差接種量設(shè)計(jì)的 污水接種量為 10mL 1mL 和 0 1mL 污泥接種量為 0 1g 0 01g 和 0 001g 當(dāng)采用其他三個(gè) 10 倍濃度差接種量時(shí) 需要修正表內(nèi) MPN 值 具體方法如下 表內(nèi)所列污水 污泥 最大接種量增加 10 倍時(shí)表內(nèi) MPN 值相應(yīng)降低 10 倍 污水 污泥 最大接種量減少 10 倍時(shí)表內(nèi) MPN 值相應(yīng)增加 10 倍 如污水接種量改為 1mL 0 1mL 和 0 01mL 時(shí) A1 表內(nèi) MPN 值相應(yīng)增加 10 倍 其它的三個(gè) 10 倍濃度差接種量的 MPN 值相應(yīng)類推 由于 A1 表內(nèi) MPN 值的單位為每 100mL 污水樣品中 MPN 值 而污水以 1L 為報(bào)告單位 因 此需將查 A1 表得到的 MPN 值乘上 10 換算成 1L 污水樣品中的 MPN 值 11 接種 表 A1污水中糞大腸菌群最可能數(shù) MPN 檢索表 污水樣品接種量為 5 份 10mL 水樣 5 份 1mL 水樣和 5 份 0 1mL 水樣 陽(yáng)性管數(shù)每陽(yáng)性管數(shù)每陽(yáng)性管數(shù) 接種接種100mL接種接種接種100mL接種接種接種 每 100mL 100mL 水樣 10mL 水樣 0 1mL 水樣 水樣中 MPN 100mL 水樣 10mL 水樣 0 1mL 水樣 水樣中 MPN 100mL 水樣 10mL 水樣 0 1mL 水樣 水樣中 MPN 0 0 0 0 2 0 0 5 4 0 0 13 0 0 1 2 2 0 1 7 4 0 1 17 0 0 2 4 2 0 2 9 4 0 2 21 0 0 3 5 2 0 3 12 4 0 3 25 0 0 4 7 2 0 4 14 4 0 4 30 0 0 5 9 2 0 5 16 4 0 5 36 0 1 0 2 2 1 0 7 4 1 0 17 0 1 1 4 2 1 1 9 4 1 1 21 0 1 2 6 2 1 2 12 4 1 2 26 0 1 3 7 2 1 3 14 1 1 3 31 0 1 4 9 2 1 4 17 4 1 4 36 0 1 5 11 2 1 5 19 4 1 5 42 0 2 0 4 2 2 0 9 4 2 0 22 0 2 1 6 2 2 1 12 4 2 1 26 0 2 2 7 2 2 2 14 4 2 2 32 0 2 3 9 2 2 3 17 4 2 3 38 0 2 4 11 2 2 4 19 4 2 4 44 0 2 5 13 2 2 5 22 4 2 5 50 0 3 0 6 2 3 0 12 4 3 0 27 0 3 1 7 2 3 1 14 4 3 1 33 0 3 2 9 2 3 2 17 4 3 2 39 0 3 3 11 2 3 3 20 4 3 3 45 0 3 4 13 2 3 4 22 4 3 4 52 0 3 5 15 2 3 5 25 4 3 5 59 0 4 0 8 2 4 0 15 4 4 0 34 0 4 1 9 2 4 1 17 4 4 1 40 0 4 2 11 2 4 2 20 4 4 2 47 0 4 3 13 2 4 3 23 4 4 3 54 0 4 4 15 2 4 4 25 4 4 4 62 0 4 5 17 2 4 5 28 4 4 5 69 0 5 0 9 2 5 0 17 4 5 0 41 0 5 1 11 2 5 1 20 4 5 1 48 0 5 2 13 2 5 2 23 4 5 2 56 0 5 3 15 2 5 3 26 4 5 3 64 0 5 4 17 2 5 4 29 4 5 4 72 0 5 5 19 2 5 5 32 4 5 5 81 12 接種 100mL 水樣 陽(yáng)性管數(shù) 接種 10mL 水樣 接種 0 1mL 水樣 每 100mL 水樣中 MPN 接種 100mL 水樣 陽(yáng)性管數(shù) 接種 10mL 水樣 接種 0 1mL 水樣 每 100mL 水樣中 MPN 接種 100mL 水樣 陽(yáng)性管數(shù) 接種 10mL 水樣 接種 0 1mL 水樣 每 100mL 水樣中 MPN 1 0 0 2 3 0 0 8 5 0 0 23 1 0 1 4 3 0 1 11 5 0 1 31 1 0 2 6 3 0 2 13 5 0 2 43 1 0 3 8 3 0 3 16 5 0 3 58 1 0 4 10 3 0 4 20 5 0 4 76 1 0 5 12 3 0 5 23 5 0 5 95 1 1 0 4 3 1 0 11 5 1 0 33 1 1 1 6 3 1 1 14 5 1 1 46 1 1 2 8 3 1 2 17 5 1 2 63 1 1 3 10 3 1 3 20 5 1 3 84 1 1 4 12 3 1 4 23 5 1 4 110 1 1 5 14 3 1 5 27 5 1 5 130 1 2 0 6 3 2 0 14 5 2 0 49 1 2 1 8 3 2 1 17 5 2 1 70 1 2 2 10 3 2 2 20 5 2 2 94 1 2 3 12 3 2 3 24 5 2 3 120 1 2 4 15 3 2 4 27 5 2 4 150 1 2 5 17 3 2 5 31 5 2 5 180 1 3 0 8 3 3 0 17 5 3 0 79 1 3 1 10 3 3 1 21 5 3 1 110 1 3 2 12 3 3 2 24 5 3 2 140 1 3 3 15 3 3 3 28 5 3 3 180 1 3 4 17 3 3 4 32 5 3 4 210 1 3 5 19 3 3 5 36 5 3 5 250 1 4 0 11 3 4 0 21 5 4 0 130 1 4 1 13 3 4 1 24 5 4 1 170 1 4 2 15 3 4 2 28 5 4 2 220 1 4 3 17 3 4 3 32 5 4 3 280 1 4 4 19 3 4 4 36 5 4 4 350 1 4 5 22 3 4 5 40 5 4 5 430 1 5 0 13 3 5 0 25 5 5 0 240 1 5 1 15 3 5 1 29 5 5 1 350 1 5 2 17 3 5 2 32 5 5 2 540 1 5 3 19 3 5 3 37 5 5 3 920 1 5 4 22 3 5 4 41 5 5 4 1600 1 5 5 24 3 5 5 45 5 5 5 1600 13 表 A2污泥中糞大腸菌群最可能數(shù) MPN 檢索表 污泥樣品接種量為 3 份 0 1g 泥樣 3 份 0 01g 泥樣和 3 份 0 001g 泥樣 接種 0 1 g 污樣 管 陽(yáng)性管 數(shù) 接種 0 01 g 污樣 管 接種 0 001 g 污樣 管 每 1g 泥樣 中 MPN 接種 0 1 g 污樣 管 陽(yáng)性管 數(shù) 接種 0 01 g 污樣 管 接種 0 001 g 污樣 管 每 1g 泥樣 中 MPN 接種 0 1 g 污樣 管 陽(yáng)性管 數(shù) 接種 0 01 g 污樣 管 接種 0 001 g 污樣 管 每 1g 泥樣 中 MPN 0 0 01100 14 B1 儀器和設(shè)備 B1 1 高壓蒸汽滅菌器 B1 2 干燥滅菌箱 B1 3 培養(yǎng)箱 B1 4 恒溫水浴箱 B1 5 電爐 B1 6 天平 B1 7 滅菌平皿 B1 8 滅菌刻度吸管 B1 9 酒精燈 B2 培養(yǎng)基和試劑 附錄B 規(guī)范性附錄 醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水和污泥中沙門(mén)氏菌的檢驗(yàn) B2 1 亞硒酸鹽增菌液 SF 增菌液 B2 1 1 成分 胰蛋白胨 或多價(jià)胨 10g 磷酸氫二鈉 Na2HPO3 16g 磷酸二氫鈉 NaH2PO3 2 5g 乳糖 4g 亞硒酸氫鈉 4g 蒸餾水 1000mL B2 1 2 制法 除亞硒酸氫鈉外 將以上各成分放入蒸餾水中 加熱溶化 再加入亞硒酸氫鈉 待完 全溶解后 調(diào)整 pH 到 7 0 7 1 分裝于三角燒杯內(nèi) 121 下滅菌 15min 備用 B2 2 二倍濃度亞硒酸鹽增菌液 二倍濃度 SF 增菌液 B2 2 1 成分 除蒸餾水改為 500mL 外 其它成分同附錄 B2 1 1 B2 2 2 制法 制法同附錄 B2 1 2 B2 3 SS 培養(yǎng)基 B2 3 1 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 B2 3 1 1成分 牛肉膏 5g 示胨 5g 三號(hào)膽鹽 3 5g 瓊脂 17g 蒸餾水 1000mL B2 3 1 2制法 將牛肉膏 示胨和膽鹽溶解于 400mL蒸餾水中 將瓊脂加到 600mL蒸餾水中 煮沸使 其溶解 再將二者混合 121 下滅菌 15min 保存?zhèn)溆?B2 3 2 完成培養(yǎng)基 B2 3 2 1成分 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 1000mL 15 乳糖 10g 檸檬酸鈉 8 5g 硫代硫酸鈉 8 5g 10 檸檬酸鐵溶液 10mL 1 中性紅溶液 2 5mL 0 1 煌綠溶液 0 33mL B2 3 2 2制法 加熱溶化基礎(chǔ)培養(yǎng)基 按比例加入除中性紅和煌綠溶液以外的各成分 充分混合均勻 調(diào)整 pH 到 7 0 加入中性紅和煌綠溶液 傾注平板 注 制好的培養(yǎng)基宜當(dāng)日使用 或保存于冰箱內(nèi)于 18h 內(nèi)使用 煌綠溶液配好后應(yīng)在 10 天以內(nèi)使用 B2 4 亞硫酸鉍瓊脂培養(yǎng)基 BS 培養(yǎng)基 B2 4 1 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 B2 4 1 1成分 蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 氯化鈉 5g 瓊脂 20g 蒸餾水 1000mL B2 4 1 2制法 加熱溶解各成分 按每份 100mL 的量分裝于 250mL 三角瓶中 121 下滅菌 20min 備用 B2 4 2 亞硫酸鉍貯備液 B2 4 2 1成分 檸檬酸鉍銨 2g 亞硫酸鈉 20g 磷酸氯二鈉 10g 葡萄糖 10g 蒸餾水 200mL B2 4 2 2制法 將檸檬酸鉍銨溶解于 50mL 沸水中 同時(shí)將壓硫酸鈉溶解于 100mL 沸水中 混合兩液并 煮沸 3min 趁熱加入磷酸氯二鈉攪拌至溶解 冷卻后 加入剩余的 50mL 葡萄糖水溶液 貯 存于冰箱中 B2 4 3 檸檬酸鐵煌綠貯備液 B2 4 3 1成分 檸檬酸鐵 2g 煌綠 1 水溶液 25mL 蒸餾水 200mL B2 4 3 2制法 將上述成分溶解于水中 盛于已滅菌的玻璃瓶?jī)?nèi) 貯存于冰箱 B2 4 4 完成培養(yǎng)基 B2 4 4 1成分 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 100mL 亞硫酸鉍貯備液 20mL 檸檬酸鐵煌綠貯備液 4 5mL B2 4 4 2制法 16 加熱融化基礎(chǔ)培養(yǎng)基并冷卻至50 同時(shí)分別加熱亞硫酸鉍貯備液和檸檬酸鐵煌綠貯 備液至 50 在無(wú)菌操作下將后者加入到前者去 充分混合 無(wú)菌傾入已滅菌的培養(yǎng)皿中 B2 5 三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基 TSI 培養(yǎng)基 B2 5 1 成分 蛋白胨 20g 牛肉膏 5g 乳糖 10g 蔗糖 10g 葡萄糖 1g 氯化鈉 5g 硫酸亞鐵銨 0 2g 硫代硫酸鈉 0 2g 瓊脂 12g 酚紅 0 025g 蒸餾水 1000mL B2 5 2 制法 將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中 調(diào) pH 到 7 4 加入瓊脂 加熱煮沸 再加入 0 2 酚紅水溶液 12 5mL 搖勻 分裝試管 裝量宜多些 以便得到較高的底層 121 下滅菌 15min 放置高層斜面?zhèn)溆?B2 6 沙門(mén)氏菌診斷血清 B3 檢驗(yàn)程序 檢驗(yàn)程序見(jiàn)圖 B 污水樣品處理 過(guò)濾污水樣品處理 稀釋 B4 操作步驟 B4 1 樣品處理和增菌 增菌 將樣品接種于二倍濃度SF 37 培養(yǎng)24h 平板分離 將增菌培養(yǎng)液分別接種于SS和BS 37 培養(yǎng)24 48h 平板分離 挑選可疑菌落接種于TSI 37 培養(yǎng)18 24h 鑒定 生化 血清學(xué)試驗(yàn) 檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告 圖 B污水 污泥中沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)程序 17 B4 1 1 污水 取 200mL 污水 用滅菌濾膜進(jìn)行抽濾 用 100mL 二倍濃度 SF 增菌液把濾膜上截留的雜 質(zhì)洗脫到滅菌三角燒瓶?jī)?nèi) 充公搖勻 置于 37 恒溫培養(yǎng)箱 增菌培養(yǎng) 12 24h 注 若樣品為經(jīng)過(guò)氯消毒的污水 應(yīng)在采樣后立即用 5 硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯 B4 1 2 污泥 用滅菌匙稱取污泥 20g 放入滅菌容器內(nèi) 加入 200mL 滅菌水 充分混勻 制成 1 10 混懸液 吸取上述 1 10 混懸液 100mL 加入到裝有 100mL 二倍濃度 SF 增菌液的已滅菌的 三角燒瓶?jī)?nèi) 搖勻 置于 37 恒溫培養(yǎng)箱 增菌培養(yǎng) 24h 注 若樣品為經(jīng)過(guò)氯消毒的污泥 應(yīng)在采樣后立即用 5 硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯 B4 2 平板分離 取上述增菌培養(yǎng)液 分別接種于 SS 培養(yǎng)基平板和 BS 培養(yǎng)基平板 置于 37 培養(yǎng)箱中 培養(yǎng) 24 48h 觀察各平板上生長(zhǎng)的菌落形態(tài) 挑取在 SS 培養(yǎng)基平板上呈無(wú)色透明或中間有黑心 直徑 1 2mm 的菌落 挑取在 BS 培 養(yǎng)基平板上呈黑色的菌落或灰綠色的可疑腸道病原菌菌落 每個(gè)平板最少挑取 5 個(gè)菌落 接 種于 TSI 培養(yǎng)基中 置于 37 培養(yǎng)箱中 培養(yǎng) 18 24h B4 3 鑒定 B4 3 1 血清學(xué)試驗(yàn) 在 TSI 培養(yǎng)基中 如不發(fā)酵乳糖 發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣或只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣 一般產(chǎn)生硫 化氫 有動(dòng)力者 先與沙門(mén)氏 A F 群 O 多價(jià)血清作玻璃片凝集 凡與多價(jià) O 血清凝集者 再 與 O 因子血清凝集 以確定所屬群別 然后用 H 因子血清 確定血清型 雙向菌株應(yīng)證實(shí)兩 相的 H 抗原 有 Vi 抗原的菌型 傷寒和丙型副傷寒沙門(mén)氏菌 應(yīng)用 Vi 因子血清檢驗(yàn) B4 3 2 生化試驗(yàn) 應(yīng)進(jìn)行葡萄糖 甘露醇 麥芽糖 乳糖 蔗糖 靛基質(zhì) 硫化氫 動(dòng)力 尿素試驗(yàn) 沙 門(mén)氏菌屬中除傷寒沙門(mén)氏菌和雞沙門(mén)氏菌不產(chǎn)氣外 通過(guò)發(fā)酵葡萄糖 產(chǎn)氣 均發(fā)酵甘露醇 和麥芽糖 但豬沙門(mén)氏菌 雛沙門(mén)氏菌不發(fā)酵麥芽糖 不分解乳糖 蔗糖 尿素酶和靛基質(zhì) 為陰性 通常產(chǎn)生硫化氫 除雞 雛沙門(mén)氏菌和傷寒沙門(mén)氏菌的 O 型菌株無(wú)動(dòng)力外 通常均 有動(dòng)力 如遇多價(jià) O 血清不凝集而一般生化反應(yīng)符合上述情況時(shí) 可加做側(cè)金盞花醇 水楊素和 氰化鉀試驗(yàn) 沙門(mén)氏菌均為陰性 B5 檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告 根據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果 報(bào)告一定體積的樣品中存在或不存在沙門(mén)氏菌 18 C1 儀器和設(shè)備 C1 1 高壓蒸汽滅菌器 C1 2 干燥滅菌箱 C1 3 培養(yǎng)箱 C1 4 恒溫水浴箱 C1 5 電爐 C1 6 天平 C1 7 滅菌平皿 C1 8 滅菌刻度吸管 C1 9 酒精燈 C2 培養(yǎng)基和培養(yǎng)液 附錄C 規(guī)范性附錄 醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水及污泥中志賀氏菌的檢驗(yàn)方法 C2 1 革蘭氏陰性增菌液 GN 增菌液 C2 1 1 成分 胰蛋白胨 或多價(jià)胨 20g 葡萄糖 1g 甘露醇 2g 枸櫞酸鈉 5g 去氧膽酸鈉 0 5g 磷酸氫二鉀 16g 磷酸二氫鉀 2 5g 氯化鈉 5g 蒸餾水 1000mL C2 1 2 制法 將以上各成分加入蒸餾水中溶化 調(diào)整 pH 至 7 0 煮沸過(guò)濾 115 下滅菌 20min 貯 存于冷暗處備用 C2 2 二倍濃度革蘭氏陰性增菌液 二倍濃度 GN 增菌液 C2 2 1 成分 除蒸餾水改為 500mL 外 其它成分同附錄 C2 1 1 C2 2 2 制法 制法同附錄 C2 1 2 C2 3 SS 培養(yǎng)基 同附錄 B2 3 C2 4 伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基 EMB 培養(yǎng)基 同附錄 A2 3 C2 5 三糖鐵瓊脂 TSI 培養(yǎng)基 同附錄 B2 5 C2 6 志賀氏菌診斷血清 C3 檢驗(yàn)程序 檢驗(yàn)程序見(jiàn)圖 C 19 污水樣品處理 過(guò)濾污水樣品處理 稀釋 C4 操作步驟 增菌 將樣品接種于雙倍濃度GN 37 6 8h培養(yǎng) 平板分離 將增菌培養(yǎng)液分別接種于SS和EMB 37 培養(yǎng)24h 平板分離 挑選可疑菌落接種于TSI 37 培養(yǎng)18 24h 鑒定 生化 血清學(xué)試驗(yàn) 檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告 圖 C 污水 污泥中志賀氏菌檢驗(yàn)程序 C4 1 樣品處理和增菌培養(yǎng) C4 1 1 污水 取 200mL 污水 用滅菌濾膜進(jìn)行抽濾 用 100mL 二倍濃度 GN 增菌液把濾膜上截留的雜 質(zhì)洗脫到已滅菌的三角燒瓶?jī)?nèi) 搖勻 置于 37 恒溫培養(yǎng)箱 增菌培養(yǎng) 6 8h 注 若樣品為經(jīng)過(guò)氯消毒的污水 應(yīng)在采樣后立即用 5 硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯 C4 1 2 污泥 取污泥 30g 放入滅菌容器內(nèi) 加入 300mL 滅菌水 充分混勻制成 1 10 混懸液 吸取 上述 1 10 混懸液 100mL 加入到裝有 100mL 二倍濃度 GN 增菌液的已滅菌的三角燒瓶?jī)?nèi) 攪勻 置于 37 恒溫培養(yǎng)箱中 增菌培養(yǎng) 6 8h 注 若樣品為經(jīng)過(guò)氯消毒的污泥 應(yīng)在采樣后立即用 5 硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯 C4 2 分離 取上述增菌培養(yǎng)液 分別接種 SS 培養(yǎng)基平板和 EMB 培養(yǎng)基平板 置于 37 培養(yǎng)箱中培 養(yǎng) 24h 挑取在 SS 培養(yǎng)基平板和 EMB 培養(yǎng)基平板上呈無(wú)色透明 直徑 1 1 5mL 的可疑腸道病原 菌菌落 每個(gè)平板最少挑取 5 個(gè)菌落 接種于 TSI 培養(yǎng)基 置于 37 培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 18 24h 挑取在 TSI 中 葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣 無(wú)動(dòng)力 不產(chǎn)生硫化氫 上層斜面乳糖不分解的菌 株 可做血清學(xué)和生化試驗(yàn) C4 3 鑒定 C4 3 1 血清學(xué)試驗(yàn) 志賀氏菌屬分為四個(gè)群 先與多價(jià)血清作玻璃片凝集試驗(yàn) 如為陽(yáng)性 再分別與 A B C D 群血清凝集 并進(jìn)一步與分型血清做玻璃片凝集 最后確定其血清型 C4 3 2 生化試驗(yàn) 應(yīng)進(jìn)行葡萄糖 甘露醇 麥芽糖 乳糖 蔗糖 靛基質(zhì) 硫化氫 動(dòng)力 尿素試驗(yàn) 志 20 賀氏菌屬能分解葡萄糖 但不產(chǎn)氣 福氏志賀氏菌 6 型有時(shí)產(chǎn)生少量氣體 一般不能分解乳 糖和蔗糖 宋內(nèi)氏志賀氏菌對(duì)乳糖和蔗糖遲緩發(fā)酵產(chǎn)酸 志賀氏菌屬均不產(chǎn)生硫化氫 不分 解尿素 無(wú)動(dòng)力 對(duì)甘露醇 麥芽糖的發(fā)酵及靛基質(zhì)的產(chǎn)生 則因菌株不同而異 如遇多價(jià)血清玻璃片凝集試驗(yàn)為陰性 而生化反應(yīng)符合上述情況時(shí) 可加做肌醇 水 楊酸 V P 櫞酸鹽 氰化鉀等試驗(yàn) 志賀氏菌屬均為陰性反應(yīng) C5 檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告 根據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果 報(bào)告一定體積的樣品中存在或不存在志賀氏菌 附錄D 標(biāo)準(zhǔn)的附錄 醫(yī)療機(jī)構(gòu)污泥中蛔蟲(chóng)卵的檢驗(yàn)方法 D1 儀器和設(shè)備 D1 1 離心機(jī) D1 2 金屬篩 60 目 D1 3 顯微鏡 D1 4 恒溫培養(yǎng)箱 D1 5 高壓蒸汽滅菌器 D1 6 冰箱 D1 7 振蕩器 D2 培養(yǎng)基和試劑 D2 1 3 福爾馬林溶液或 3 鹽酸溶液 D2 2 飽和硝酸鈉溶液 比重 1 38 1 40 或飽和氯化鈉溶液 D2 3 30 次氯酸鈉溶液 D3 檢驗(yàn)程序 蛔蟲(chóng)卵檢驗(yàn)程序見(jiàn)圖 D 蛔蟲(chóng)卵收集 分離 加氫氧化鈉溶液振蕩 蛔蟲(chóng)卵收集 水洗 加蒸餾水離心 倒去上清液 蛔蟲(chóng)卵收集 漂浮 加飽和硝酸鈉溶液離心 吸取上層浮膜 蛔蟲(chóng)卵收集 沉淀 加蒸餾水離心 培養(yǎng) 鏡檢 生死蟲(chóng)卵數(shù) 檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告 圖 D污泥中蛔蟲(chóng)卵檢驗(yàn)程序 21 D4 操作步驟 D4 1 采樣及樣品處理 樣品采集后應(yīng)立即送到實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn) 若不能立即檢驗(yàn)時(shí) 可在 100g 污泥中加入 5mL3 福爾馬林或 3 鹽酸溶液 在 4 10 冰箱內(nèi)保存 若樣品為經(jīng)過(guò)氯消毒的污泥 應(yīng)在現(xiàn)場(chǎng)取 樣后立即用 5 硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯 D4 2 蛔蟲(chóng)卵收集 D4 2 1 分離 將 100g 污泥樣品和 50mL5 氫氧化鈉溶液 分別注入三角燒杯內(nèi) 置于振蕩器上 以 200 300 次 min 速度振蕩 30min 然后靜置 30min 以使蛔蟲(chóng)卵不再粘附在污泥上 D4 2 2 水洗 將上述樣品分裝在離心管內(nèi) 以 2000 2500 轉(zhuǎn) min 的轉(zhuǎn)速離心 5min 倒去離心管上 部的液體 加入容量為沉淀物 10 倍的蒸餾水 混勻 以 2000 2500 轉(zhuǎn) min 的轉(zhuǎn)速離心 5min 如此反復(fù)數(shù)次 直至沉淀物上面的液體接近透明 D4 2 3 漂浮 離心管內(nèi)注入飽和硝酸鈉溶液或飽和氯化鈉溶液 攪勻 以 2000 2500 轉(zhuǎn) min 的轉(zhuǎn) 速離心 5min 注 1 由于蛔蟲(chóng)卵的相對(duì)密度小于飽和硝酸