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文檔簡介

技術(shù)路線 雙光子激光建立斑馬魚脊髓損傷模型的探索 明場下對脊髓定位 利用雙光子強激光對脊髓進行深度掃描切割損傷 12小時后做縱切切片 利用生物胞素抗體做免疫染色 判斷損傷的位置與大小是否與符合 前期實驗 手術(shù)建模 手術(shù)組 n 68 假手術(shù)組 n 68 建模成功性分析 每周分析術(shù)后運動能力 連續(xù)跟蹤7周 基因芯片分析 提總RNA分析全部基因的表達水平 統(tǒng)計分析各個基因表達變化 定量PCR 提總RNA反轉(zhuǎn)錄檢測sema4e和plxnd1相對內(nèi)參GADPH表達水平的變化 原位雜交 制作切片制作探針檢測sema4e和plxnd1mRNA的表達水平變化及表達細胞 WestenBolt 提總蛋白檢測sema4e和plxnd1蛋白表達水平的變化 取脊髓 損傷位點以下1cm 術(shù)后4hour 12hour 6day 11day組 sema4e與plxnd1關(guān)系研究 sema4e活性片段DNA的擴增 sema4e特異性肽段的設(shè)計與合成 sema4e表達載體的構(gòu)建 表達載體的導(dǎo)入 轉(zhuǎn)染細胞的篩選與培養(yǎng) 表達蛋白的提取 表達蛋白的活性檢測 sema4e免疫磁珠的制作 sema4e與plxnd1免疫共沉淀 噬菌體展示技術(shù)淘選抗體 ELISA檢測抗體活性 ELISA檢測抗體專一性 sema4e與plxnd1免疫共定位 sema4e與plxnd1在斑馬魚脊髓損傷修復(fù)中的作用研究 前期結(jié)果 Beforelesion Red shamoperation n 10 Blue operation n 10 圖1 斑馬魚脊髓損傷后的運動能力的變化 RealtimePCR timepoints changefolds 10X 10X 10X 10X 10X anti senseprobessham4hour12hour11day 10X 10X 10X anti senseprobessham4hour12hour11day sema4e plxnd1 10X 10X 通過雙光子顯微鏡活體觀察斑馬魚脊髓內(nèi)的血管 plxnd1在血管內(nèi)皮細胞上表達 10X 20X 此課

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