【畢業(yè)學位論文】(Word原稿)芭蕉屬植物內(nèi)生菌特性的研究-園林植物與觀賞園藝

福建農(nóng)林大學博 /碩士學位論文 芭蕉屬植物內(nèi)生菌特性的研究 on 學 科 門 類：農(nóng) 學 一級學科名稱：園 林 二級學科名稱：園林植物與觀賞園藝 研 究 方 向：園林植物生物技術(shù) 論 文 編 號： 指導老師： 論文完成時間：二 on 2008 獨創(chuàng)性聲明 本人聲明，所呈交的學位（畢業(yè)）論文，是本人在指導教師的指導下獨立完成的研究成果，并且是自己撰寫的。盡我所知，除了文中作了 標注和致謝中已作了答謝的地方外，論文中不包含其他人發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一同對本研究做出貢獻的同志，都在論文中作了明確的說明并表示了謝意，如被查有侵犯他人知識產(chǎn)權(quán)的行為，由本人承擔應有的責任。 學位（畢業(yè)）論文作者親筆簽名： 日期： 論文使用授權(quán)的說明 本人完全了解福建農(nóng)林大學有關(guān)保留、使用學位（畢業(yè)）論文的規(guī)定，即學校有權(quán)送交論文的復印件，允許論文被查閱和借閱 ; 學?？梢怨颊撐牡娜炕虿糠謨?nèi)容，可以采用影印、縮印或其他復制手段保存論文。 保密，在 年后解密可適用本授權(quán)書。 不保密，本論文屬于不保密。 學位（畢業(yè)）論文作者親筆簽名： 日期： 指導教師親筆簽名： 日期： 目 錄 中文摘要 . 1 英文摘要 . 2 第一章 研究綜述 . 4 1植物內(nèi)生菌研究進展 . 4 . 4 . 5 . 6 . 7 . 8 2香蕉枯萎病生物防治研究進展 . 10 3本研究的目的和擬解決的問題 . 11 第二章 芭蕉屬植物內(nèi)生菌的分離與數(shù)量分布特性 . 12 1 材料與方法 . 12 . 12 . 12 2結(jié)果與分析 . 13 . 13 數(shù)量的分布特性 . 13 . 14 . 15 3 討論 . 16 第三章 芭蕉屬植物內(nèi)生細菌的鑒定及種群分布特性 . 17 1 材料與方法 . 17 . 17 . 17 2結(jié)果與分析 . 18 . 18 . 18 3討論 . 21 第四章 芭蕉屬植物內(nèi)生細菌生防功能菌的篩選 . 23 1 材料與方法 . 23 . 23 . 23 2結(jié)果與分析 . 24 菌的生防菌篩選 . 24 . 24 3 討論 . 27 第五章 生防菌銅綠假單孢桿菌在香蕉苗上的定殖規(guī)律 . 29 1 材料與方法 . 29 . 29 . 29 4. 29 蕉苗上定殖菌的分離檢測 . 30 蕉苗上定殖菌的電鏡觀察 . 30 2結(jié)果與分析 . 30 4香蕉組培苗植株內(nèi)定殖情況 . 30 4香蕉沙床苗植株內(nèi)定殖情況 . 37 3討論 . 40 第六章 討論與展望 . 41 參考文獻 . 43 問題如下 致謝 簡歷 發(fā)表論文 參加項目 所有的表格和圖都是頁碼格式，怎么搞的，請修改。 1 中文摘要 香蕉枯萎病是一種毀滅性的土傳病害，在防治上難度比較大，該病的生物防治已受到世界各國的極大關(guān)注。植物 內(nèi)生菌作為一種新的微生物資源，引起廣大研究者的注意。健康的芭蕉屬植物體內(nèi)可能存在能夠與其協(xié)作起來共同抵抗香蕉枯萎病的內(nèi)生菌，尋找這種內(nèi)生菌作為生防菌防治香蕉枯萎病， 相對于其他生防因子而言，有很大的優(yōu)勢。 本研究 對 4 種芭蕉屬植物 的內(nèi)生細菌進行了分離和 鑒定 。 對不同品種芭蕉屬植物不同部位的 內(nèi)生細菌分布規(guī)律 進行 研究。統(tǒng)計分析結(jié)果表明， 不同品種芭蕉屬植物內(nèi)生細菌含量存在較大差別， 4 個檢測品種中野生蕉內(nèi)生細菌含量最高，芭蕉和 紅花蕉 含菌量最低；紅花蕉和威廉斯蕉均為根部含菌量遠高于葉部和莖部。 野生蕉葉部內(nèi)生細菌含量比根部含量高， 多集中在輸導系統(tǒng)。 本研究將不同器官組織的研究具體細分到葉肉、葉脈、葉柄、莖頂部、莖中部、莖基部、根部，發(fā)現(xiàn)內(nèi)生細菌并不是分布在各部位的每個組織中。 分離到 沙門氏 菌屬 假單孢桿菌屬 腸桿菌屬 根瘤菌屬 芽孢桿菌屬 克雷伯氏菌屬 等 16 個屬的內(nèi)生細菌，并將其中 14 株鑒定到種級；其中， 種類群在不同品種和植株的不同器官中均有分布并且數(shù)量都占絕對優(yōu)勢 。 根據(jù)這 14 種內(nèi)生細菌的分布情況顯示， 不同品種內(nèi)生細菌在種群數(shù)量分布上存在差異 。 通過平板對峙試驗 從 65 株芭蕉屬植物內(nèi)生細菌中篩選 對辣椒青枯雷爾氏菌有抑制作用的內(nèi)生細菌 1 株，對香蕉枯萎尖孢鐮刀菌古巴?；娃卓棺饔幂^強的有 4 株，對苦瓜 炭疽菌拮抗效果較明顯的 4 株。其中銅綠假單孢桿菌 時對 3 種病原菌都有較好的離體抑菌效果， 具有研究開發(fā)價值。生防菌 利福平突變菌株 在香蕉沙床苗上定殖試驗結(jié)果顯示， 香蕉沙床苗的 7 天、 14 天致死濃度均為 107。 同一接菌濃度不同苗齡香蕉苗上 生防菌 定殖規(guī)律與數(shù)量也有所不同。同時，提高接菌濃度對生防菌定殖數(shù)量提高的作用不明顯。 在 20 天苗齡的香蕉組培苗上接種稀釋10000 倍的生防菌 酵液能夠使該菌在植株體內(nèi)較好的定殖，接種 20 天后在香蕉苗根部及莖上部的定殖數(shù)量 都能保持一個較高的水平，同時使用的菌液濃度又較低，試驗中死苗數(shù)也相對較少，在進一步的定殖規(guī)律、防病機理和菌劑開發(fā)應用的研究中可作為研究基礎(chǔ)模式。 關(guān)鍵詞： 芭蕉屬；內(nèi)生菌；分布；鑒定；生防菌；定殖 2 英文摘要 on of a it to It no of in As a It in be in of a of to as of to in of a in of in of of of s in on as at it in of 6 of 4 to in At in of 4 in of of 65 f. on 4of in 4on s in 407 to 4 To 40000 it 0 3 0 4in 4on a in of of 4 第一章 研究綜述 芭蕉屬植物，原產(chǎn)于亞洲東南部，是觀賞價值極高的觀賞花卉，已廣泛應用于華南等溫暖地區(qū)的庭院墻角、窗前、假山、亭口或池邊等地的園林種植，極富南方特色，亦可盆栽觀賞；其中紅花蕉具鮮艷挺拔的紅色直立花序，又是極好的插花材料，可作切花觀賞。 近 幾十 年來 毀滅性病害 香蕉枯萎病 蔓延 了幾乎全世界，僅 剩 南太平洋、地中海、馬來西亞的一些島嶼 沒有感染香蕉枯萎病 （ C， 2004） 。 目前已 危害 到幾乎所有香蕉 種 類 ， 如 “ 大 蜜 哈 ” 、 、 、 香蕉品系 ，還有 矮香蕉 、龍牙蕉(粉蕉 ( A)、棱香蕉 和野蕉 ( 王文華 ， 2007） 。 香蕉枯萎病傳播蔓延十分迅速，發(fā)生為害逐年加重，而且可能會使香蕉在地球上逐漸消亡。香蕉枯萎病作為一種土傳維管束病害，在防治上難度比較大，一般化學藥劑幾乎無效，到目前為止還沒有一個對香蕉枯萎病行之有效的防治方法 ，但是越來越多的研究者把目光投 向生物防治。在生物防治領(lǐng)域，植物 內(nèi)生菌 作為一種新的微生物資源，引起廣大研究者的注意。健康的芭蕉屬植物體內(nèi)可能存在能夠 與 其 協(xié)作起來共同抵抗香蕉枯萎病的內(nèi)生菌，尋找這種內(nèi)生菌作為生防菌 防治香蕉枯萎病 ， 相對于其他生防因子而言，有很大的優(yōu)勢 。 1植物內(nèi)生菌研究進展 植物內(nèi)生菌是指在其生活史的一定階段或全部階段生活于健康植物的組織和器官內(nèi)部或細胞間隙的 一類微生物 ，被感染的宿主植物不表現(xiàn)出外在病癥，可通過組織學方法或從嚴格表面消毒的植物組織中分離或從植物組織內(nèi)直接擴增出微生物 即我們可把植物內(nèi)生 菌理解為植物組織內(nèi)的正常菌群，它們不僅包括了互惠共利的和中性的內(nèi)共生微生物，也包括了那些潛伏在宿主體內(nèi)的病原微生物。 （鄒文欣， 2001） 遍存在性 內(nèi)生菌普遍存在于目前已研究過的各種植物中 。目前，已報道宿主植物主要分布在77科 153個屬（鄒文欣， 1999） 。 最早的認識起始于 1898年 ， 1898； F， 1898；， 1898； ， 1898）。 現(xiàn)在 全世界已在 80個屬 290多種禾本科植物中發(fā)現(xiàn) 內(nèi)生真菌 （鄒文欣， 2001）。 近年來在甘蔗、玉米、水稻等禾本科農(nóng)作物中還發(fā)現(xiàn)多種能固氮的內(nèi)生細菌 （鄒文欣， 1999） 。雙子葉植物的內(nèi)生菌研究主要集中 在 經(jīng)濟 植物和 藥 5 用植物，如：菊科、?？?、葫蘆科、梧桐科、十字花科、芭蕉科、衛(wèi)矛科、珙桐科、夾竹桃科、小檗科、瑞香科等。由于裸子植物 的 內(nèi)生真菌可產(chǎn)生抗腫瘤和抗菌的活性物質(zhì)，現(xiàn)已對紅豆杉科、三尖杉科、油松科、羅漢松科、銀杏科等進行了系統(tǒng)的研究 （ 張曉瑞，2007） 。 研究 發(fā)現(xiàn)內(nèi)生菌 也 存 在 于 灌木 植物 、草本植物以及栽培作物 、果樹甚至藻類、苔蘚和蕨類植物中 （鄒文欣， 2001） 。 同時，植物體的根、莖、葉、花、果實和種子等中均有發(fā)現(xiàn)內(nèi)生菌（張曉瑞， 2007）。 布與生物 多樣性 植物中內(nèi)生菌的種類和數(shù)量與植物的種類、基因型有關(guān)，在宿主植物科的水平上具有專一性，有的甚至在宿主種的水平上也有專一性（張曉瑞， 2007）。在同一種植物的不同器官組織中，內(nèi)生菌的種類和數(shù)量也有不同，不同內(nèi)生菌往往占據(jù)不同的生態(tài)位，它們在植物體中相互作用， 促進生長而或抑制生長， 建立一種微生態(tài) 的動態(tài) 平衡，植物體可被看作一個微生態(tài)系統(tǒng)（ L， 2001； 王堅， 2008）。 其中有一些是分離頻率高、數(shù)量大的優(yōu)勢種群，還有一些是稀有種群（ 文才藝， 2004）。同一種植物，內(nèi)生菌的種類和數(shù)量也與植物的生長階段有關(guān)。 研究表明內(nèi)生菌的種類多樣性還與植物的生長環(huán)境有關(guān)，熱帶、亞熱帶的植物與干燥、寒冷地區(qū)植物相比，其內(nèi)生菌種類比較多，生物多樣性越豐富的地區(qū)植物中內(nèi)生菌的種類和數(shù)量也越豐富（張曉瑞， 2007）。 對于一種植物而言，從中可分離到的內(nèi)生菌通常為數(shù)種至數(shù)十種，有的甚至多達數(shù)百種（鄒文欣， 2001）。如 子中的內(nèi)生菌，發(fā)現(xiàn)分離自 83個健康葉片上的內(nèi)生菌有多達 418個形態(tài)學種（其中基因型不同的分類元至少有 347個），這些內(nèi)生菌同時也表現(xiàn)出一定的宿主專化性和地域?qū)；裕?E，2000）。 目前在各種植物中發(fā)現(xiàn)的內(nèi)生細菌已超過 129種（隸屬于 54個屬）。這些內(nèi)生細菌大多為土壤微生物種類，其中假單 孢桿 菌屬 （ 、芽孢桿菌屬 （ 、腸桿菌屬（ 以及土壤桿菌屬（ 為最常見的屬。 （ 鄒文欣， 1999） 植物內(nèi)生真菌大多數(shù)屬于子囊菌類 （ 及其無性型，包括核菌綱（ 、盤菌綱 （ 和腔菌綱 （ 的許多種類以及它們的一些衍生菌 （任安芝， 2001） ?，F(xiàn)已 經(jīng) 在 80多屬的幾百種禾本科植物中發(fā)現(xiàn) 內(nèi)生真菌 。尹建雯 等 從 3種蘆薈中共分離 得到 內(nèi)生真菌 88株，經(jīng)微生物學形態(tài)觀察，初步鑒定有 4個目、 4個科、 22個屬 （尹建雯， 2004） 。內(nèi)生真菌在藥用植物中的研究 比較多，通過對一些藥用植物的研究發(fā)現(xiàn)其內(nèi)生真菌在鐮刀菌 屬 （ 、交鏈孢屬 （ 、青霉屬 （ 、根霉屬 （ 、 枝孢 屬（ 、毛殼菌屬 （ 、曲霉菌屬 （ 、盤多毛孢屬 （ 、向基孢屬 （ 、枝頂孢屬 （ 、頭孢霉屬 （ 等皆有分布，其生物 多樣性十分豐富 （王堅，2008） 。 6 近些年來，從植物中發(fā)現(xiàn)了大量的內(nèi)生放線菌。目前分離到的內(nèi)生放線菌主要為鏈霉菌屬（ （ 汪軍， 2008） 。 第一次發(fā)現(xiàn)內(nèi)生放線菌是 其中 51 株為鏈霉菌屬， 4 株 小單孢菌屬（ ， 1株 諾卡氏菌屬（ ， 1株 鏈孢囊菌屬（ （ T， 2003）。 2個科 31種植 物的葉子 中 分離 得 到 97株放線菌 ， 從莖分離到 21株，從根分離到 212株，可見根部分離到的內(nèi)生放線菌最多，在分離到的放線菌中鏈霉菌占 90以上，其余是 小雙孢菌屬（ ， 諾卡氏菌屬 ， 小單孢菌屬 和未鑒定的菌株 （ ， 2003） 。 物的 關(guān)系 傳統(tǒng)的觀點認為 大部分 植物內(nèi)生菌對植物有潛在的致病性， 為 條件致病菌。當植物健康 時一般不表現(xiàn)出病癥，但當植物衰老或受到環(huán)境條件的脅迫而防御功能嚴重削弱時，一 部分 內(nèi)生菌就會轉(zhuǎn)變?yōu)椴≡鹬参锊『Α，F(xiàn)在被廣為 接受的觀點則認為在內(nèi)生菌與宿主植物長期協(xié)同進化的過程中二者形成了互利共生的關(guān)系。一方面宿主植物產(chǎn)生的光和產(chǎn)物可為內(nèi)生菌提供 其生長所需的 營養(yǎng)，另一方面內(nèi)生菌產(chǎn)生的代謝 產(chǎn) 物常包含一些促生 或 抗菌的活性物質(zhì)，能促進植物 的 生長發(fā)育，提高植物抗逆境 、 抗脅迫和抗病害的能力。 （王堅， 2008） 進宿主植物生長 內(nèi)生菌促 進 植物生長 的 作用 表現(xiàn) 在 兩 個 方面。一方面，許多內(nèi)生菌 能產(chǎn)生促植物生長物質(zhì)如植物生長素、赤霉素以及細胞激動素等，直接促進植物生長。 假單孢桿 菌屬，芽孢桿菌屬等都能分泌吲哚乙酸或赤霉素，草生歐文氏菌（ 僅能產(chǎn)生吲哚乙酸，而且還能產(chǎn)生細胞分裂素（馮永君， 2001）。 張集慧等從蘭科植物中分離到的 5種內(nèi)生真菌的發(fā)酵液和菌絲體中，分別提取出 5種植物激素，赤霉素、吲哚乙酸、脫落酸、玉米素、玉米核苷等，它們對蘭花的生長發(fā)育有較好的促進作用（張集慧， 1999）。劉慧等人從黃花蒿中分離出一株內(nèi)生真菌，其發(fā)酵液中能積累 ， 2000）。 沈德龍等的研究證明水稻內(nèi)生成團泛 菌 （ 種植物生長激素，它們共同調(diào)節(jié)水稻的生命活動，能影 響水稻乳熟期光合產(chǎn)物的分布（沈德龍，2002）。 另一方面 ， 內(nèi)生菌可增進宿主植物對 N、 P、 從而間接促進植物生長 。 低水平 元素的吸收，如有內(nèi)生真菌的高羊茅葉片中的 1990）。同時，很多植物的內(nèi)生細菌可從空氣中吸收氮氣，并將其固定為化合態(tài)氮，固氮內(nèi)生細菌能利用宿主植物產(chǎn)生的多余能量發(fā)揮固氮作用，而且不形成特化結(jié)構(gòu)，幾乎可以在宿主各種營養(yǎng)器官內(nèi)發(fā)揮作用（馮永君， 2001）。 禾本科農(nóng)作物如水稻、 甘蔗、玉米上的內(nèi)生細菌 都 具有很強的固氮能力。 甘蔗的根、莖、葉內(nèi)存在大量的新型內(nèi)生固氮菌 重氮營養(yǎng)醋桿菌 （ ，這種內(nèi)生菌具有強抗酸能力 ， 能在高糖環(huán)境中生長和保持高效固氮活性并與甘蔗建立聯(lián)合固氮作用 ， 表現(xiàn) 了 嚴格的寄主專一性 7 （ ， 1998；陳麗梅， 2000）。 強宿主植物對逆境和病蟲害的抗性 研究表明許多內(nèi)生菌能提高植物 對環(huán)境 的抗逆性。感染內(nèi)生菌的牧草對環(huán)境脅迫如干旱（ ， 1997）、以及鋁的毒害（ P， 1999）等具有更強抗性。 內(nèi)生菌可增強宿主植物對植物病原細菌和真菌的抗性。目前已從多種植物中分離出了具有此種作用的內(nèi)生菌。 內(nèi)生真菌的草遭受真菌病害影響的程度遠遠低于沒有內(nèi)生菌的（ ； 1989）。 王萬能和肖崇剛從煙草根部分離 出能防治煙草黑脛病 的內(nèi)生細菌 （王萬能， 2003） 。龍良鯤等從番茄健康植株根內(nèi)分離獲得的 239株內(nèi)生細菌中有 18株能在平板 對峙 中拮抗番茄青枯病菌 （龍良鯤， 2003） 。 有些內(nèi)生菌是因為產(chǎn)生了抗生素類物質(zhì)對病原菌有拮抗作用， 這些 抗生素物質(zhì)包括 2,4二乙 酞藤黃酚（ 、吩嗪羧酸 （ 、藤黃綠膿菌素 （ 、硝吡咯菌素 （ 、膿青素 （ 、 ，其中 們對小麥全蝕病菌有較強抑制作用，對黃瓜枯萎病也有一定的生防作用（ 石晶盈， 2006） 。另外一部分內(nèi)生菌能產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶 ， 以降解真菌的細胞壁或其它致病因子。內(nèi)生菌的生防作用還表現(xiàn)在與病原菌競爭生態(tài)位和營養(yǎng)物質(zhì) ，從而 阻止病原菌入侵和繁殖。一定數(shù)量的內(nèi)生菌及其誘導植物產(chǎn)生的酚類、醌 類物質(zhì)在細胞間隙的積累 ，能 構(gòu)成病原菌進入植物體內(nèi)或在植物體內(nèi)運轉(zhuǎn)的機械 和 化學屏障 （ 文才藝， 2004） 。 許多研究表明，內(nèi)生菌 能使宿主 植物對植物害蟲和土壤線蟲也有一定的抗性。 內(nèi)生菌控制昆蟲主要表現(xiàn)在其產(chǎn)生 一些毒素（ 包括生物堿 ） 使寄主能防御植食者，導致昆蟲拒食 、 體重減輕 、 生長發(fā)育受抑制甚至死亡率增加等 。 在加拿大白株樹中分離出的內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物苯并呋喃衍生物對云杉卷葉蛾有很高的 抑制 活性 （ A， 1997） 。另外一種殺蟲機制是植物體內(nèi)固醇類物質(zhì)代謝改變，以及真菌與昆蟲競爭宿主植物的能源供應，引起被真菌 感染的植株上的幼蟲生長緩慢甚至死亡 （劉峰， 2004） 。 工接種內(nèi)生菌防治病蟲害 用人工接種方法將有對植物病蟲害有拮抗作用的內(nèi)生菌接入到植物體內(nèi)，發(fā)揮內(nèi)生菌的防病作用。目前常用的人工接種方法有 3種： 灌根接種法，用內(nèi)生菌懸浮液澆灌植株根際，使內(nèi)生菌進入 到 植物根莖 內(nèi) （ 翁啟勇， 2003）。 浸種接種法，將宿主植物的種子在內(nèi)生菌懸浮液中浸泡一定 的 時間 再播種，長出后的植物體內(nèi)會有該內(nèi)生菌 （ 龍良鯤， 2003）。 葉片接種法 。另外， 莖基部注射、愈傷組織培養(yǎng)等 也 是常 見 的人工接種方法 （ 何紅， 2004）。 為種子保護劑能有效防治玉米病害（ M， 1995）。 田宏先等 通過試驗證明， 馬鈴薯組織內(nèi)生菌 能 對馬鈴薯莖基腐病 進行 田間防治及 具 增產(chǎn)作用 （田宏先， 2002） 。目前，美國、澳大利亞、新西蘭和歐洲一些國家的種子公司，都 能 提供內(nèi)生真菌感染率高的草種。據(jù)估計 1990年全世界有 6000噸 內(nèi)生真菌感染的黑麥草種子得到利用 （ R， 1993） ?，F(xiàn)已培育出 8 的含內(nèi)生真菌的種子除多個品種的黑麥草外，還包括草地 早熟禾、高羊茅、紫羊茅、藍羊茅、硬羊茅以及剪股穎等若干品種 （ 梁宇， 2000） 。 用內(nèi)生菌分泌的抗生素 植物內(nèi)生菌分泌的抗生素是 直接 抑制和殺死病原菌， 因此 可以利用內(nèi)生菌的代謝產(chǎn)物 直接 控制植物病害，作為研制無公害生物農(nóng)藥的重要來源 之一（汪軍， 2008） 。根際內(nèi)生菌 假單孢桿菌 會 產(chǎn)生一類鼠李糖脂生物表面活性劑物質(zhì)， 能 破壞腐霉菌 （ 卵孢子的原生質(zhì)膜，引起卵孢子細胞壁的水解破裂 （ ， 1995） 。 等從雷公藤的莖中分離到一株內(nèi)生真菌 （ ，能產(chǎn)一種肽類抗生素 （ ， 不但能抑制灰葡萄孢 （ 等植物病原真菌，還能抑制白假絲酵母 菌（ 等人類病原真菌 （ A， 1999） 。 建外源基因的載體 內(nèi)生菌長期生活在植物體內(nèi)，能夠在植物體內(nèi)穩(wěn)定的生長和進行代謝活動，這就使內(nèi)生菌成為絕佳的載體在植物體內(nèi)表達外源基因 （李強， 2006） 。目前的研究較多的主要是構(gòu)建能夠表達外源殺蟲防病基因的工程菌株， 這是現(xiàn)在植物病蟲害 生物防治又一新思路 。 在植物內(nèi)生菌中轉(zhuǎn)入抗病蟲基因比 在植物中直接轉(zhuǎn)入抗病蟲基因簡單容易， 而且將某些抗病蟲基因?qū)雰?nèi)生菌，提高植物的抗病蟲能力 的同時， 植物本身的基因并未發(fā)生改變 可 保持植物的天然性狀 （汪軍， 2008） 。 將蘇云金桿菌的殺蟲基因?qū)胫参飪?nèi)生菌是現(xiàn)在的研究熱點。 到 的木質(zhì)棍狀桿菌犬齒亞種（ 接種到某些植物上后可以很快轉(zhuǎn)移到整個植物體中 ， 利用這點將蘇云金桿菌 （ 的伴胞晶體編碼基因轉(zhuǎn)移到這種內(nèi)生菌中，實現(xiàn)了對歐洲玉米螟的生物防治 （ H， 1992） ，減少了化學農(nóng)藥的使用。 甘蔗害蟲 J， 1993） 。 離與侵染定殖 生菌的分離 首先要考慮宿主植物的選擇。選擇宿主植物的時候一般要考慮植物的獨特生物學特性、一些特有的 現(xiàn)象、生長年限、生長環(huán)境等。例如要分離可產(chǎn)生對疾病有治療作用物質(zhì)的內(nèi)生菌，一般選擇藥用植物；如果要選擇對農(nóng)作物病蟲害具有防治作用的內(nèi)生菌，一般要選擇具天然抗病蟲害能力的植物；如果要選擇能降解污染物的內(nèi)生菌，可選擇生長在有污染物環(huán)境下的植物。這樣可以減少隨機篩選帶來的繁重工作量。 （李強， 2006） 目前，內(nèi)生菌的分離方法主要使用平板分離法，因為此法簡便經(jīng)濟，易于推廣。分離過程通常要先采用升汞、乙醇、 氯酸鈉、 菌水沖洗。然后切取植物組織直接接入分離培養(yǎng)基或研磨榨取植 物組織汁液稀釋涂布平板。 （王堅， 2008） 生菌的 侵染定殖 與檢測 9 植物內(nèi)生菌可以分為專性內(nèi)生菌和兼性內(nèi)生菌。前者只能存活于植物體內(nèi)，如 環(huán)腐棒桿菌（ 是甜菜專性內(nèi)生細菌，織片草螺菌 （ 、紅蒼白假單 孢桿 菌 （ 是玉米、甘蔗、高粱等植物的專性內(nèi)生菌，它們跟隨植物的整個生活史而存活，并通過種子傳播到下一代（ G， 1996； 馮永君， 2001） 。后者不僅能在植物體內(nèi)存活還能從植物根際和土壤中分離到 ， 多數(shù)內(nèi)生菌都屬于兼性內(nèi)生菌 ，許多研究者認為，根際土壤是植物內(nèi)生細菌的主要來源目前這一觀點得到了大多數(shù)人的支持（ G， 1996； ，1999） 。 內(nèi)生菌進入宿主植物體內(nèi) 要經(jīng)過 吸附、侵入和定殖 三個階段 。內(nèi)生菌對植物的表面吸附是一個主動過程。內(nèi)生菌與植物組織表面的親和機制如何 ， 可能會影響到內(nèi)生菌侵染 植物的效率 （ ， 1997）。關(guān)于內(nèi)生菌的侵染方式有幾種假說，有人通過植物內(nèi)生菌分解纖維素的研究結(jié)果認為內(nèi)生菌 可能是通過分解植物表皮和破壞細胞壁進入植物，并且可能利用植物組織中的纖維素為碳源，以維持生長活動的需要（ 1996）。 大多數(shù)研究者 認為內(nèi)生菌是通過自然孔口和傷口等進入植物體：自然孔口通常包括植物葉上氣孔、水孔以及莖上的皮孔、蜜腺、胚根和次生根發(fā)生處等 ； 傷 口 則包括根在土壤中伸展時造成的持續(xù)不斷的擦傷口 ， 以及雨水冰雹和收割多年生植物等造成的機械損傷等 （ ， 2003） 。內(nèi)生菌侵入植物體的方式途徑會因植物