【畢業(yè)學(xué)位論文】（Word原稿）微生物來源CpG疫苗佐劑篩選研究特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物飼養(yǎng)學(xué)碩士論文

密級(jí)： 論文編號(hào)： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩士學(xué)位論文 微生物來源 苗佐劑篩選研究 pG pG 摘 要 一些具有免疫激活功能的以未甲基化的 包括含 量研究證實(shí)， 化因子、粘附因子和共刺激分子等，誘導(dǎo)機(jī)體天然免疫系統(tǒng)活化，并產(chǎn)生抗原特異性的獲得性免疫應(yīng)答。 本項(xiàng)研究依據(jù) 成和 克隆了 32條 過體外篩選及動(dòng)物免疫試驗(yàn)選出 4種免疫效果好、安全可靠的序列，為 究內(nèi)容如下： 從四種非致病性的食品釀造菌（枯草芽孢桿菌、德氏乳酸菌、黃色短桿菌、雙歧桿菌）基因組中找出 27條 由北京華大中生科技發(fā)展有限公司合成； 在壞 死梭桿菌保護(hù)性抗原基因篩選 工作中，克隆了許多基因片段質(zhì)粒，從 中找出 4條富含 同時(shí)，在 檢索 節(jié)瘤擬桿菌纖毛蛋白基因中的 現(xiàn) ， 將克隆的 壞 死梭桿菌基因片段質(zhì)粒菌株與節(jié)瘤擬桿菌纖毛蛋白基因質(zhì)粒菌株分別提取質(zhì)粒， 無菌采取羊、小鼠血液，肝素鈉抗凝。用淋巴細(xì)胞分離液分離羊、小鼠淋巴細(xì)胞。通過淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)篩選出 4種對(duì)羊、小鼠淋巴細(xì)胞都有較強(qiáng)細(xì)胞增殖作用的序列。 將 淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)選出的 果均無毒副作用。 分別用 壞死梭桿菌抗原、重組節(jié)瘤擬桿菌纖毛蛋白抗原制備 弗氏完全佐劑疫苗、氫氧化 鋁膠佐劑疫苗、 膠佐劑疫苗免疫小鼠， 發(fā)現(xiàn) 氧化 鋁膠配合制成氏完全佐劑疫苗有幾乎同樣的免疫效果，明顯好于氫氧化 鋁膠佐劑疫苗， 質(zhì)粒酶切回收的 粒免疫佐劑作用無明顯差別。 關(guān)鍵詞： 疫佐劑， 疫苗 I NA pG NA of in is to to of s we pG to by in is of ou r no in o.,In of it P6 id to by in it pG l(,pG l( by pG co pG l( as pG pG of m ay be in 錄 第一章 緒 論 . 1 究目的和意義 . 1 內(nèi)外研究現(xiàn)狀 . 1 構(gòu)特征 . 2 免疫激活機(jī)理 . 4 疫激活的分子機(jī)制 . 5 開發(fā)應(yīng)用 . 6 安全性及面臨的問題 . 9 究內(nèi)容和方法 . 9 生物來源的 品的制備 . 10 巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn) . 10 品的動(dòng)物安全性試 驗(yàn) . 10 苗佐劑實(shí)驗(yàn) . 10 第二章 研究內(nèi)容 . 11 驗(yàn)材料和方法 . 11 料 . 11 法 . 15 驗(yàn)結(jié)果 . 18 列質(zhì)粒提取，以及 列片段的回收： . 18 巴細(xì)胞增殖反應(yīng) . 19 全性試驗(yàn) . 21 疫試驗(yàn) . 22 論 . 26 第三章 結(jié) 論 . 28 參考文獻(xiàn) . 29 致 謝 . 33 者簡(jiǎn)歷 . 34 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 0 英文縮寫 英文全稱 中文名稱 寡聚脫 氧核苷酸 序 m 分支結(jié)核桿菌 病原相關(guān)分子模式 模式識(shí)別受體 r 白樣受體 a B K 基因結(jié)合核因子 ac 1 轉(zhuǎn)錄因子激活蛋白 1 o sp 活性氧元素 al 白氨基端激酶激酶 I al 白氨基端激酶激酶 1/2 8 髓樣分化標(biāo)志物 r 關(guān)激酶 r 6 腫瘤壞死因子相關(guān)受體因子 6 K 基因結(jié)合核因子抑制因子 r co mp 組織相容性復(fù)合體 r co mp 組織相容性復(fù)合體 g 免疫球蛋白 腫瘤壞死因子 IL 白細(xì)胞介素 o f 分化群 an o f h 輔助性 /誘導(dǎo)性 T 細(xì)胞抗原標(biāo)志 Th 輔助性 T 細(xì)胞 B 細(xì)胞（抗原識(shí)別）受體 細(xì)胞毒性 T 細(xì)胞 DC 突狀細(xì)胞 NK 自然殺傷細(xì)胞 抑制性 T 淋巴細(xì)胞 /細(xì)胞毒性 T 淋巴細(xì)胞 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章緒論 1 第一章 緒 論 究目的和意義 特異性免疫是含有 反應(yīng)物與天然免疫細(xì)胞上的 結(jié)合，激活天然免疫應(yīng)答，從而活化抗感染途徑，并最終激活獲得性免疫系統(tǒng)的過程 34。高度純化的新型疫苗因缺少 分，不能被天然免疫細(xì)胞的 好識(shí)別，不足以產(chǎn)生引起免疫 應(yīng)答的有效信號(hào)。 為佐劑可以克服新型疫苗 足的缺陷，通過模擬感染過程誘導(dǎo)強(qiáng)烈的免疫應(yīng)答 15。如 苗，在 苗中由于攜帶抗原編碼基因的載體 源于細(xì)菌，富含 列，從而保證了 本項(xiàng)研究 為篩選適合壞死梭桿菌抗原及重組節(jié)瘤擬桿菌纖毛蛋白的 通過淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)篩選出對(duì)羊、小鼠淋巴細(xì)胞都有較強(qiáng)細(xì)胞增殖作用的序列， 分別用 壞死梭桿菌抗原、重組節(jié)瘤擬桿菌纖毛 蛋白抗原制備 弗氏完全佐劑疫苗、氫氧化 鋁膠佐劑疫苗、 劑疫苗、 膠佐劑疫苗免疫小鼠，觀察 含 列的質(zhì)粒單獨(dú)作為佐劑，以及 與氫氧化鋁膠配合制成的 膠佐劑的效果，為 劑的研制與應(yīng)用提供理論依據(jù)，為 壞死梭桿菌及重組節(jié)瘤擬桿菌纖毛蛋白疫苗佐劑的研制奠定基礎(chǔ) 內(nèi)外研究現(xiàn)狀 一些具有免疫激活功能的以未甲基化的 序?yàn)楹诵牡?列，它包括含 序的人工合成的寡聚脫氧核苷酸 (自然界中細(xì)菌、病毒、無脊椎動(dòng)物等低等生物的基因組 序 (指一類以非甲基化胞嘧啶和鳥嘌呤核苷酸為核心的寡聚脫氧核糖核苷酸 ,其堿基排列大多遵循以下規(guī)律 : 5端為 2 個(gè)嘌呤 ,3端為 2 個(gè)嘧啶 。 研究表明 ,這種序列可激活多種免疫效應(yīng)細(xì)胞 ,因此又被稱為免疫刺激 列。 長期以來， 以引起機(jī)體強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)。雖然早在 1965年 41就發(fā)現(xiàn)用寡聚脫氧核苷酸與綿羊紅細(xì)胞一起注射小鼠，可明顯提高小鼠對(duì)綿羊紅細(xì)胞的免 疫應(yīng)答水平，并首先提出寡聚脫氧核苷酸具有免疫佐劑的觀點(diǎn)。但是， 0年后的 80年中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章緒論 2 代中期 ， 人們經(jīng)過 研究表明 特別是具有特定序列的細(xì)菌 類 具有重要的免疫調(diào)節(jié)作用。 1984年， 63報(bào)道了牛分支結(jié)核桿菌 ( 取物中的 有抗腫瘤效應(yīng)。 在對(duì) 究中發(fā)現(xiàn)， 脊椎動(dòng)物 菌 顯的差異， 脊椎動(dòng)物中 苷酸 出現(xiàn)的頻率較小約為 1/501/60，其中 70嘧啶 被 甲基化 ；而在 細(xì)菌 苷酸 出現(xiàn)的頻率為 1/16，約為脊椎動(dòng)物的 4倍， 其中 僅 5%胞嘧啶 被 甲基化 ， 脊椎動(dòng)物 4。 脊椎動(dòng)物 基化是 脊椎動(dòng)物 由甲基轉(zhuǎn)移酶將胞嘧啶（ C）變?yōu)?5啶（ 5一種反應(yīng) 35。 它 是一種基因外修飾，不改變 在細(xì)胞正常發(fā)育、基因表達(dá)模式以及基因組穩(wěn)定性中起著至關(guān)重要的作用 23。 椎動(dòng)物免疫系統(tǒng)正是通過對(duì)未甲基化 識(shí)別來辨別細(xì)菌 對(duì)其產(chǎn)生免疫應(yīng)答的 56。1種細(xì)菌、病毒、無脊椎動(dòng)物的 67。隨 著對(duì) 人們對(duì) 在 毒免疫、抗腫瘤、抗寄生蟲病等方面進(jìn)行了廣泛研究。 構(gòu)特征 核心結(jié)構(gòu) 鳥嘌呤核苷酸 ( 位碳原子是否被甲基化，如果胞嘧啶發(fā)生甲基化，則其活性喪失。 位碳原子甲基化后，可直接影響到其鄰近的 也可能是導(dǎo)致 因之一 2。同時(shí)， 57發(fā)現(xiàn)， 且這兩個(gè)核苷酸的種類和序列也不能隨意改變。實(shí)驗(yàn)表明破壞或?qū)?免疫刺激活性也隨即消失。 側(cè)翼序列 研究人員將哺乳動(dòng)物來源的 苷酸 去甲基化處理后免疫物，結(jié)果沒有產(chǎn)生免疫。 5 嘧啶 并且當(dāng) 5 端為 3端為中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章緒論 3 53通過研究發(fā)現(xiàn) 端是細(xì)胞內(nèi)受體識(shí)別位點(diǎn)， 5端形成“發(fā)卡”或二聚體結(jié)構(gòu)時(shí)，則會(huì)阻礙受體的識(shí)別和結(jié)合，使信號(hào)傳導(dǎo)通路受阻。 骨架長度 純 6個(gè)脫氧核苷酸 生免疫刺激活性的序列為包含上述 0個(gè)核苷酸殘基 2。 0個(gè)堿基，但隨后的研究認(rèn)為含有 15個(gè)堿基的 61，可見要產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答， 5個(gè)堿基。 回文結(jié)構(gòu) 對(duì)這些 非所有的 有那些含有一個(gè)或多個(gè)回文序列的 為 且這種回文結(jié)構(gòu)出現(xiàn)的頻率越高 ，則免疫刺激性越強(qiáng)。但 64新近研究認(rèn)為 非回文結(jié)構(gòu)同樣具有免疫刺激作用。 骨架結(jié)構(gòu) 硫代磷酸酯、硫代磷酸甲酯等物質(zhì)修飾后的含 點(diǎn)、抗核酸酶降解能力、細(xì)胞對(duì) 且免疫活性顯著增強(qiáng)。這可能是因?yàn)榱姿嵛焯枪羌芙Y(jié)構(gòu)修飾后，增強(qiáng)了 長了 補(bǔ)了 其更好的發(fā)揮免疫刺激作用 65 66。 種屬特異性及其它 54通過研究發(fā)現(xiàn)低等和高等脊椎動(dòng)物免疫識(shí)別系統(tǒng)對(duì) 些對(duì)小鼠 細(xì)胞則無刺激活性。 有較強(qiáng)的刺激小鼠 對(duì)人的 5 人具有最佳的刺激活性，但對(duì)小鼠免疫細(xì)胞的刺激能力顯著降低?？梢?， 同的 外， 現(xiàn)其在結(jié)構(gòu)上可分為兩部分：轉(zhuǎn)錄單位（編碼區(qū)），直接指導(dǎo)合成抗原；佐劑單位（非編碼區(qū)），輔助機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，而只有位于非編碼區(qū)的 于編碼區(qū)的 22。 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章緒論 4 免疫激活機(jī)理 美國免疫學(xué)家 0提出了模式識(shí)別理論，將天然免疫針對(duì)主要靶分子信號(hào)稱作病原相關(guān)分子模式 （ 相對(duì)應(yīng)的識(shí)別受體稱為模式識(shí)別受體 （ 。 酵母細(xì)胞壁上的甘露糖以及脂多糖、多肽糖、胞壁酸等各種細(xì)菌的細(xì)胞壁成分等，它們?cè)谶M(jìn)化中趨于保守。 組與天然免疫密切相關(guān)的受體家族， 發(fā)的信號(hào)傳導(dǎo)能導(dǎo)致炎癥介質(zhì)的釋放，在天然免疫防御中起重要作用 36，并最終激活獲得性免疫系統(tǒng)。因此有人認(rèn)為 1。 是對(duì)病原體生存極為根 本的結(jié)構(gòu)，因而極為保守， 它 是很多微生物共有的一種保守分子模式， 能夠 被天然免疫中 0類受體 。 依據(jù) 模式識(shí)別理論 ， 可以作為模擬感染的“危險(xiǎn)信號(hào)”，被宿主天然免疫細(xì)胞上的 要為 ， 15。 免疫細(xì)胞攝入細(xì)菌 泡進(jìn)一步與內(nèi)體融合，形成內(nèi)吞小體，在內(nèi)吞小體酸化成熟過程中， 同被內(nèi)吞的 49。有 關(guān)研究證實(shí) （ 應(yīng)激激酶途徑，這兩條途徑可直接激活 和 導(dǎo)特定基因的表達(dá) 49。 隨著內(nèi)體的形成，酸性逐漸增強(qiáng)， 而引發(fā)細(xì)胞內(nèi)活性氧元素（ 量迅速增加。 從而激發(fā)細(xì)胞內(nèi)的應(yīng)激激酶途徑 48。首先，誘導(dǎo) （ ）磷酸化激活，激活的 白氨基端激酶 1/2（ ）和 和 1（ 這一步也是通過磷酸化 完成的 29?；罨?控如細(xì)胞因子、黏附因子、免疫相關(guān)分子的基因表達(dá)。 途徑是指 募銜接蛋白 8（ 酸化，磷酸化的 （ 互作用，激活 激酶復(fù)合體，使 直接被磷酸化 25。 是 的特異性抑制因子，通常與 結(jié)合使其處于失活狀態(tài)， 磷酸化后即與 分離，游離的 遷移到細(xì)胞核中，激活機(jī)體免疫細(xì)胞，誘導(dǎo)某些細(xì)胞因子基因的表達(dá) 16。 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章緒論 5 疫激活的分子機(jī)制 大量研究證實(shí)， 括 核 /巨噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞（ 樹突狀細(xì)胞，同時(shí)刺激免疫活性細(xì)胞分泌多種細(xì)胞因子并能上調(diào)某些表面分子、趨化因子 、粘附因子和共刺激分子等，誘導(dǎo)機(jī)體天然免疫系統(tǒng)活化，并產(chǎn)生抗原特異性的獲得性免疫應(yīng)答。 對(duì) 免疫效應(yīng) 研究發(fā)現(xiàn)， 細(xì)胞有絲分裂原，可以使 95%的 很短的時(shí)間內(nèi)，就進(jìn)入了細(xì)胞分裂周期的 條件適宜時(shí)完成有絲分裂 37。有研究表明， 調(diào)節(jié) 殖和分化過程中起重要作用，抗 細(xì)胞 增生、 接誘導(dǎo) 泌 38。說明細(xì)胞 自分泌 特殊循環(huán)實(shí)現(xiàn) 24。 由 細(xì)胞 的活化是 過在 面提供共刺激信號(hào)，與 面的 而活化 釋放 g55 68。同時(shí)， 細(xì)胞表面分子的表達(dá)，使 胞間粘附因子 親和力 達(dá)下調(diào) 51。 通過這些細(xì)胞表面分子表達(dá)的調(diào)整，從而增強(qiáng)機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫的協(xié)同作用，上調(diào)抗原遞呈細(xì)胞呈遞抗原的能力，誘導(dǎo)混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)反應(yīng)和調(diào)理吞噬作用 24。 細(xì)胞抗原受體（ 激活信號(hào)有很強(qiáng)的協(xié)同作用，這種協(xié)同作用理論上可以促進(jìn)對(duì)抗原的免疫應(yīng)答的產(chǎn)生 23。 細(xì)胞增殖和免疫球蛋白的產(chǎn)生，阻斷 細(xì)胞的細(xì)胞凋亡 25。 對(duì) 是在細(xì)胞免疫中都發(fā)揮重要作用。目前的研究尚未發(fā)現(xiàn) 細(xì)胞的證據(jù)。 細(xì)胞。這些因子可刺激 導(dǎo)免疫應(yīng)答向 生較強(qiáng)的特異性細(xì)胞免疫和體液免疫 45。 等通過實(shí)驗(yàn)證實(shí) 細(xì)胞促進(jìn)使其分泌 可刺激 細(xì)胞（ 分泌高水平的 表達(dá)抗原特異性細(xì)胞毒活性 40?？乖f呈細(xì)胞產(chǎn)生高水平的協(xié)同刺激活化信號(hào)如 6、 12、 18，以及樹突狀細(xì)胞膜表面協(xié)同刺激信號(hào)分子的表達(dá)水平，在 24。 對(duì)樹突狀細(xì)胞的免疫效應(yīng) 樹突狀細(xì)胞（ 機(jī)體最主要的抗原遞呈細(xì)胞，在細(xì)胞免疫中起著關(guān)鍵且不可替代的作用，是啟動(dòng)體內(nèi) 第一章緒論 6 胞。 熟、活化、運(yùn)動(dòng)中起著重要的調(diào)控作用，它直接激活25。 等報(bào)道， 導(dǎo)其分化成熟并產(chǎn)生腫瘤壞死因子、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子、 時(shí)拮抗 62發(fā)現(xiàn)， 分子以及 時(shí)，誘導(dǎo) 8。 對(duì) 成防御病原微生物侵襲的第一道防線，是一類不需特異性抗體參與，不受 可殺傷靶細(xì)胞的淋巴細(xì)胞 24。 過刺激巨噬細(xì)胞分泌 強(qiáng) 激產(chǎn)生的25。 對(duì)單核 /巨噬細(xì)胞的免疫效應(yīng) 激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生多種細(xì)胞因子如 單核細(xì)胞受細(xì)菌 強(qiáng) 抗原及 1。 機(jī)體的非特異性免疫應(yīng)答中發(fā)揮巨大作用 25。 開發(fā)應(yīng)用 疫佐劑的應(yīng)用 免疫佐劑廣義上是指免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)劑，能非特異性地改變或增強(qiáng)機(jī)體對(duì)該抗原的特異性免疫應(yīng)答，能增強(qiáng)該抗原的免疫原性或改變免疫反應(yīng)類型而本身并無抗原性的物質(zhì) 7。在疫苗中應(yīng)用佐劑不僅可以增強(qiáng)疫苗的免疫原性，而且在決定免疫應(yīng)答產(chǎn)生的類型方面也發(fā)揮重要作用。 抗原特異性 助 據(jù)其分泌及效應(yīng)功能的不同，分 為 42。 生 疫苗開發(fā)中其目的主要是誘導(dǎo)抗原特異性免疫應(yīng)答向 11。 自從 20世紀(jì) 2種物質(zhì)被嘗試作為佐劑而使疫苗更有效。迄今為止，只有氫氧化鋁膠佐劑被 它有一定的缺陷：它不能誘導(dǎo)產(chǎn)生 擾細(xì)胞 免疫，阻斷 得疫苗的免疫保護(hù)不全面、不持久。同時(shí)，也存在一定的副作用：如有輕度局部反應(yīng)，可中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章緒論 7 以形成肉芽腫，極個(gè)別的發(fā)生局部無菌性膿腫。另外，有可能對(duì)人、畜神經(jīng)系統(tǒng)有影響等 18。因此研制新型的可誘導(dǎo) 全、有效、無毒副作用的佐劑成了眾多學(xué)者研究的熱點(diǎn)。 、 突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、 分泌以 而誘導(dǎo) 機(jī)體特異性細(xì)胞與體液免疫反應(yīng)同時(shí)增強(qiáng)，尤 其對(duì)細(xì)胞免疫應(yīng)答具有更突出的增強(qiáng)作用。另外， 作用于相同或不同類型的免疫細(xì)胞從而組成復(fù)雜的免疫網(wǎng)絡(luò)，通過免疫網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)作用。 可用于滅活疫苗，也可用于活疫苗，而且與其他佐劑有強(qiáng)烈的協(xié)同作用，可增強(qiáng)一些弱抗原的免疫原性。 且在于其他佐劑合用時(shí)還可彌補(bǔ)其他佐劑誘導(dǎo) 外，一些不能與氫氧化鋁膠佐劑混合的減毒活疫苗或多價(jià)疫苗， 粘膜免疫佐劑 粘膜免疫系統(tǒng)是一個(gè)完整的淋巴細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)。一般情況下，經(jīng)非胃腸道途徑傳遞的抗原只誘導(dǎo)系統(tǒng)性免疫應(yīng)答，而粘膜免疫接種的抗原則既能誘導(dǎo)局部免疫，又可誘導(dǎo)系統(tǒng)性免疫應(yīng)答。大多數(shù)免疫原性弱的抗原經(jīng)粘膜供給時(shí)，易引起免疫耐受。研究發(fā)現(xiàn)， 且可以經(jīng)鼻腔、口服、直腸等途徑接種，具有粘膜佐劑的效應(yīng) 11。 擇性清除 制性 而解除粘膜免疫系統(tǒng)對(duì)抗原的免疫耐受性 15。 新型疫苗的佐劑 特異性免疫是含有 活天然免疫應(yīng)答，從而活化抗感染途徑，并最終激活獲得性免疫系統(tǒng)的過程 34。高度純化的新型疫苗因缺少 能被天然免疫細(xì)胞的 足以產(chǎn)生引起免疫應(yīng)答的有效信號(hào)。 過模擬感染過程誘導(dǎo)強(qiáng)烈的免疫應(yīng)答 15。如 含 而保證了 表達(dá)量就能激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生強(qiáng)烈的免疫應(yīng)答。 種疾病的治療方面 抗腫瘤治療 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明：患有 射抗腫瘤單克隆抗體，長期存活率達(dá) 70 時(shí) 第一章緒論 8 的成熟 和明顯促進(jìn)抗體依賴性細(xì)胞毒性細(xì)胞作用 ， 聯(lián)合使用 明顯且副作用少 25。 防治過敏性疾病 答的平衡是機(jī)體免疫狀態(tài)正常的必要條件之一。過敏性疾病是由于 引起，與細(xì)胞因子 6。若能抑制 且可以使已經(jīng)發(fā)生的 在寄生蟲方面的應(yīng)用 作為免疫治療藥物治療和預(yù)防利什曼原 蟲病。 包含 導(dǎo)了利什曼原蟲的在利什曼原蟲攻擊時(shí)產(chǎn)生了 40的保護(hù)率。 44報(bào)道，在用曼氏血吸蟲蟲卵誘導(dǎo)的鼠肺肉芽腫模型的研究中， 芽腫變小、肉芽腫嗜酸性細(xì)胞浸潤減少、且， 47報(bào)道，在無抗原存在的情況下用惡性瘧原蟲子孢子攻擊小鼠 1 2 果產(chǎn)生了保護(hù)作用。在靈長類動(dòng)物試驗(yàn)中，利用 激產(chǎn)生了較高滴度的特異性抗體?？梢姡?52。目前，瘧疾 28。 此外，在抗感染方面， 46發(fā)現(xiàn)，用 8耐受致死劑量的土絲倫拉 桿菌及李斯特單胞菌的攻擊，而且這種保護(hù)作用能維持兩周并有免疫記憶作用。 在魚類疾病防治中的應(yīng)用 13報(bào)道，利用 8小時(shí)后，在細(xì)胞培養(yǎng)液中可檢測(cè)倒型和型 真等 59通過研究表明， 強(qiáng)其殺菌能力。 待于進(jìn)一步研究。 增強(qiáng)造血功能 58發(fā)現(xiàn)，調(diào)抗原遞呈細(xì)胞的抗原呈遞功能，刺激特異性免疫系統(tǒng)產(chǎn)生保護(hù)性免疫應(yīng)答；另一方面，動(dòng)員機(jī)體的造血系統(tǒng)，產(chǎn)生和釋放更多的免疫細(xì)胞。 第一章緒論 9 生的細(xì)胞因子有關(guān)。 安全性及面臨的問題 安全、有效的佐劑特性受到人們關(guān)注。而且由于 細(xì)菌、抗寄生蟲、抗過敏等作用，應(yīng)用前景非常樂觀。但是，盡管如此仍有一些安全性 問題尚需解決：如 復(fù)注射高劑量的 造成其它與過度激活免疫相關(guān)的毒性表現(xiàn) 14，。而低劑量一次注射 10倍于常規(guī)用量 )，并無明顯的毒性效應(yīng)，小鼠的外觀、體重、行為等方面均無明顯改變 43。施海晶等 22報(bào)道，硫代磷酸酯修飾的 00mg/體治療日常用量達(dá) 4mg/代磷酸酯修飾的 核酸外切