（醫(yī)學PPT課件）胸腺肽的認識與對比

幾種不同的胸腺肽藥物 1 胸腺激素類免疫調(diào)節(jié)劑發(fā)展 胸腺肽 胸腺肽最早是由雪蘭諾公司從小牛胸腺提取的一種胸腺因子 1980年在意大利上市 爾后在歐美注冊和臨床 生產(chǎn)廠家已超過百余家 國家食品藥品監(jiān)督管理局 SFDA 已核準下發(fā)了389個注射劑生產(chǎn)批文 有8家企業(yè)生產(chǎn)口服制劑 胸腺肽的主要劑型有 凍干粉針劑 注射液 腸溶片 腸溶膠囊和胸腺肽氯化鈉注射液5種 2 胸腺激素類免疫調(diào)節(jié)劑發(fā)展 胸腺肽 但由于胸腺肽有效成分不明確 含量低 含致敏大分子蛋白 不符合WHO對免疫調(diào)節(jié)劑的五項標準 1 化學成分明確 2 易于降解 3 刺激適中 4 不致癌 致畸變 5 無累積毒性 無不良反應及后繼作用 因而療效低 安全性差 不良反應尤其是嚴重過敏反應頻繁發(fā)生 由此引發(fā)了國家藥品不良反應監(jiān)測中心對該類藥品進行通報 3 胸腺激素類免疫調(diào)節(jié)劑發(fā)展 胸腺五肽 在對胸腺素類藥物的研制中 科學家通過化學合成的方法制造出了胸腺生成素 并在此基礎(chǔ)上進一步開發(fā)了胸腺五肽 1985年 胸腺五肽在意大利以商品名 Timunox 上市 1997年 我國研發(fā)合成胸腺五肽 隨后四川源基制藥 北京雙鷺藥業(yè) 丹東醫(yī)創(chuàng)藥業(yè)等企業(yè)的產(chǎn)品也獲準生產(chǎn) 截至2006年6月 SFDA已核準36家企業(yè)生產(chǎn)胸腺五肽原料藥及其注射劑 胸腺五肽的主要劑型有 凍干粉針劑 注射液 4 胸腺激素類免疫調(diào)節(jié)劑發(fā)展 胸腺肽 1 T 1 在上世紀末 意大利賽生公司的產(chǎn)品 胸腺肽 1 已進入我國市場 而且在國外也已在30多個國家獲得批準上市 2002年底 SFDA批準成都地奧九泓 海南雙成藥業(yè) 海南中和藥業(yè)生產(chǎn)原料藥及注射劑 胸腺肽 1 T 1 的主要劑型有 粉針劑 5 胸腺類制劑的發(fā)展 普通胸腺肽安全性大大提高胸腺五肽安全性和療效都實現(xiàn)了質(zhì)的飛躍胸腺肽 1 被2010版藥典收載 安全 有效 質(zhì)量可控 6 胸腺肽 1受到高度認可 被2010版中國藥典收載胸腺肽 胸腺五肽未被收入進入 國家基本醫(yī)療保險 工傷保險和生育保險藥品目錄 2009年版 胸腺肽 胸腺五肽 亮菌甲素 香菇多糖 免疫核糖核酸等均未進入進入 中國國家處方集 收錄于腫瘤項下 7 神經(jīng) 內(nèi)分泌系統(tǒng)主要通過神經(jīng)纖維 神經(jīng)遞質(zhì)和激素調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)功能 免疫系統(tǒng)則通過分泌多種細胞因子 反饋信息 調(diào)節(jié)神經(jīng) 內(nèi)分泌系統(tǒng) 8 胸腺肽類激素種類及功能 9 一 氨基酸的結(jié)構(gòu)通式 天然氨基酸在結(jié)構(gòu)上的共同特點為 1 與羧基相鄰的 碳原子上都有一個氨基 因而稱為 氨基酸 2 除甘氨酸外 其它所有氨基酸分子中的 碳原子都為不對稱碳原子 所以 A 氨基酸都具有旋光性 B 每一種氨基酸都具有D 型和L 型兩種立體異構(gòu)體 目前已知的天然蛋白質(zhì)中氨基酸都為L 型 10 氨基酸的構(gòu)型和存在形式 構(gòu)型 用D L表示 氨基酸通式 除甘氨酸 天然 氨基酸都是有旋光的 而且都是L型的 L型 氨基酸 D型 氨基酸 L 甘油醛 11 甘氨酰甘氨酸 肽鍵 二 肽 肽鍵是由一個氨基酸的 羧基與另一個氨基酸的 氨基脫水縮合而形成的化學鍵 12 蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)包括一級結(jié)構(gòu) primarystructure 二級結(jié)構(gòu) secondarystructure 三級結(jié)構(gòu) tertiarystructure 四級結(jié)構(gòu) quaternarystructure 13 蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)指多肽鏈中氨基酸的排列順序 一 蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu) Primarystructure 主要的化學鍵肽鍵 有些蛋白質(zhì)還包括二硫鍵 14 15 20 25 28 Ala Asp Ala Ala Val Asp Thr Ser Ser Glu Thr Thr Lys Asp Leu Lys Lys Glu Val Val Glu Glu Ala Glu Asn Ile Lys Glu OH Ac 胸腺肽 1 化學合成的28個氨基酸組成的多肽 純度 99 8 正常人血清濃度為400 1000pg ml 10 5 15 二 蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu) 主要的化學鍵 氫鍵 16 二 主鏈構(gòu)象的分子模型 螺旋 helix 折疊 pleatedsheet 轉(zhuǎn)角 turn 無規(guī)卷曲 randomcoil 17 1 螺旋 左手和右手螺旋 18 2 折疊 在 折疊中 碳原子總是處于折疊的角上 氨基酸的R基團處于折疊的棱角上并與棱角垂直 兩個氨基酸之間的軸心距為0 35nm 折疊結(jié)構(gòu)的氫鍵主要是由兩條肽鏈之間形成的 也可以在同一肽鏈的不同部分之間形成 幾乎所有肽鍵都參與鏈內(nèi)氫鍵的交聯(lián) 氫鍵與鏈的長軸接近垂直 折疊有兩種類型 一種為平行式 即所有肽鏈的N 端都在同一邊 另一種為反平行式 即相鄰兩條肽鏈的方向相反 19 3 轉(zhuǎn)角 轉(zhuǎn)角 在 轉(zhuǎn)角部分 由四個氨基酸殘基組成 四個形成轉(zhuǎn)角的殘基中 第三個一般均為甘氨酸殘基 彎曲處的第一個氨基酸殘基的 C O和第四個殘基的 N H之間形成氫鍵 形成一個不很穩(wěn)定的環(huán)狀結(jié)構(gòu) 這類結(jié)構(gòu)主要存在于球狀蛋白分子中 20 超二級結(jié)構(gòu) 三 超二級結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)域 21 三 蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu) 整條肽鏈中全部氨基酸殘基的三維空間的排布位置 四 蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu) 蛋白質(zhì)分子中各亞基的空間排布及亞基接觸部位的布局和相互作用 稱為蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu) 22 一級結(jié)構(gòu) 二級結(jié)構(gòu) 三級結(jié)構(gòu) 亞基 四級結(jié)構(gòu) 總結(jié) 蛋白質(zhì)分子從一級結(jié)構(gòu)到高級結(jié)構(gòu) 23 24 胸腺肽 1與普通胸腺肽的比較 注 胸腺肽實際有效成分就是胸腺肽 1 但含量極低 不到0 6 25 從工藝上說 普通胸腺肽以動物胸腺為原料 經(jīng)過搗碎 提取 離心 過濾 分裝 普通胸腺肽所標示的20mg 50mg等 實際上是總蛋白含量 也就是含氮物質(zhì)總量 在新的試行標準中 為提高質(zhì)量 規(guī)定必須含有一定比例的胸腺肽 1 這實際上從另一方面證明普通胸腺肽中實際真正起作用的是胸腺肽 1 但可惜的是普通胸腺肽中胸腺肽 1的含量只有0 6 左右 26 胸腺肽 1與胸腺五肽的比較 注 胸腺五肽給藥方式和劑量國內(nèi)外相差極大 缺少循證醫(yī)學證據(jù)支持 27 胸腺肽 1與胸腺五肽最大的不同在于胸腺肽 1是人體內(nèi)源性物質(zhì) 與體內(nèi)的胸腺肽 1結(jié)構(gòu)和活性都完全一致 都是28肽 而胸腺五肽卻不是人體內(nèi)源性物質(zhì) 只是胸腺生成素II的一個片段 胸腺生成素II是49肽 五肽卻是只有5個氨基酸的寡肽 連蛋白質(zhì)的3級結(jié)構(gòu)都不具有 很難說其具有胸腺生成素II的全部活性 可能正因為如此 五肽僅在中國和意大利被批準上市 28 15 20 25 28 Ala Asp Ala Ala Val Asp Thr Ser Ser Glu Thr Thr Lys Asp Leu Lys Lys Glu Val Val Glu Glu Ala Glu Asn Ile Lys Glu OH Ac ZADAXIN 胸腺肽 1 注射液 化學合成的28個氨基酸組成的多肽 純度 99 8 正常人血清濃度為400 1000pg ml 10 5 29 T 1 在活體外的免疫調(diào)節(jié)功能 細胞因子及受體方面 T細胞的增生及分化方面 白介素2 IL 2 的濃度 干擾素 IFN 的濃度高親和力IL 2受體的表達 干擾素 IFN 的濃度 CD3 CD4 及CD8 細胞的增生由地塞大米松誘發(fā)的胸腺細胞凋亡激活NK細胞活性CFU的前體細胞數(shù)目 30 31 32 胸腺肽 1增加Th1亞型 Andreoneetal 2001 JournalofViralHepatitis8 194 201 p 0 05 CD4 Th1細胞分泌IL 2 INFg Th2細胞分泌IL 4 IL 1 HCV陽性病人的外周單核細胞經(jīng)胸腺肽 1培育 Th1在抗肝炎治療中是清除病毒所必需 33 34 胸腺肽 1增加NFkB轉(zhuǎn)錄因子表達 35 胸腺肽 1 胸腺肽 1 啟動人體免疫機制來抗病毒 抗癌 增加靶細胞MHC I類抗原的表達直接抑制病毒的復制直接抑制腫瘤細胞生長的作用 增產(chǎn)NK CD4 CD8 Th1 增加IL 2 INF IL 2R 胸腺肽 1的雙重作用機制 免疫調(diào)節(jié)機制 直接抗病毒 腫瘤機制 36 STEMCELL NKCELL 胸腺肽 1作用機制 靶細胞 靶細胞 CD4 T CELL CD8 T CELL IL 2 INF Th1 CTL 間接作用促進T細胞的增生和分化促進細胞因子的表達 IL 2 INF IL2R 直接作用增強MHC I類抗原表達直接抑制病毒的復制增強谷胱苷肽的水平 37 胸腺肽 1的作用機制 38 胸腺肽 1的臨床應用 1 在慢性病毒性肝炎治療中的應用2 在腫瘤治療中的應用3 在免疫功能低下人群中作為疫苗增強劑的應用4 在其他領(lǐng)域中的應用各種免疫功能缺陷和異常患者往往伴隨有免疫功能低下 因此胸腺素 1在臨床上已開始被應用于治療重癥感染 慢性腎炎 紅斑狼瘡 風濕或類風濕性關(guān)節(jié)炎及艾滋病等疾病的治療中 且均表現(xiàn)出不同程度的臨床療效 39 胸腺肽a1的合成工藝 胸腺肽a1是一條由28個氨基酸構(gòu)成的肽鏈 人工合成時 是將首個氨基酸固定于固體樹脂上 通過28步反應 含末端乙酰化一步 將其他27個氨基酸一個個分別按序列接上 然后將整條肽鏈自樹脂上 切割 下來 得到的粗品再進入純化階段 經(jīng)多級次色譜柱分離 最終得到純度極高的胸腺肽a1單體 以上是對采用固相多肽合成技術(shù)生產(chǎn)胸腺肽a1的最簡單描述 首先 任何化學反應均受化學平衡常數(shù)的制約 每一步反應收率均 100 假設肽合成反應的每一步收率均達到90 則連續(xù)28步反應之后終產(chǎn)品收率僅5 0 9的28次方 其次 在經(jīng)歷如此多步合成反應之后 終產(chǎn)品中混雜的各步反應中間體種類近乎天文數(shù)字 為得到高純度胸腺肽a1單體 勢必進行多級多次純化 每次純化過程又都涉及產(chǎn)品收率問題 目標肽分子在純化過程中的損失在所難免 40 磁共振成像 MRI 證實一 在氨基酸5 8間有 樣折疊結(jié)構(gòu) 進口胸腺肽 1具有獨特的二維空間結(jié)構(gòu) 41 磁共振成像 MRI 證實二 在氨基酸17 24間形成的 樣螺旋形結(jié)構(gòu) 進口胸腺肽 1具有獨特的二維空間結(jié)構(gòu) 42 相互作用后可引發(fā)產(chǎn)生一連串的生物學效應 1 增強淋巴細胞分泌白介素 IL 2 及 干擾素 2 增強淋巴細胞表膜IL 2受體的表達作用 3 增強NK細胞的驀集及殺傷能力 4 增強混合性淋巴細胞的反應 二維空間結(jié)構(gòu)是與淋巴細胞膜結(jié)合首要條件 43 胸腺肽 1中所有氨基酸均為左旋形式 44 胸腺肽 1與仿制品的區(qū)別 45 胸腺肽 1與胸腺五肽的區(qū)別 46 HBV的治療選擇 胸腺肽 1 核苷酸類似物 TH TS 干擾素 NK TC 拉米夫定Lamivudine RegevA SchiffER DrugtherapyforhepatitisB AdvInternMed2001 46 107 35 47 乙肝病毒本身并不引起明顯的肝細胞損傷 肝細胞的損傷主要是由免疫病理引起的 也就是機體的免疫反應在清除HBV的過程中造成了肝細胞的損傷 48 胸腺肽 1顯著誘導PBMC細胞2 5 寡腺甘酸合成酶 2 5OAS 的增加 聯(lián)合二者更有相乘的作用 2 5OA是一種抗病毒蛋白 mmol ml p 0 05 p 0 05 p 0 01 2 5OAS 胸腺肽 1通過增加Th1 降低Th2免疫反應治療慢乙肝 胸腺肽 1顯著誘導2 5OAS的增加 A Gramenzietal Hepatology Vol42 No 4 suppl 1 2005 49 干擾素a誘導PBMC細胞分泌IL 4 胸腺肽 1顯著降低IL 4水平 而干擾素誘導IL 4分泌增加 與控制組比較 與干擾素組比較 pg ml IL 4 10 U ml 10ug ml p 0 05 p 0 01 A Gramenzietal Hepatology Vol42 No 4 suppl 1 2005 胸腺肽 1通過增加Th1 降低Th2免疫反應治療慢乙肝 胸腺肽 1顯著降低IL 4的生成 50 單用治療慢乙肝 薈萃分析 治療結(jié)束隨訪6 12月時評估 完全反應 ALT復常 DNA陰轉(zhuǎn)或HbeAg DNA 51 慢乙肝的聯(lián)合治療 52 胸腺肽 1與拉米夫定聯(lián)合治療慢性乙型肝炎近期療效研究 p 0 3780 p 0 3780 p 0 4000 p 0 0012 p 0 0344 p 0 0119 中山醫(yī)科大學附屬第三醫(yī)院傳染科 林炳亮黃桂梅楊紹基等 53 胸腺肽 1與干擾素的持續(xù)反應率比較 本研究再次證實胸腺肽 1停藥后的持續(xù)反應率增加 31 48 46 27 胸腺肽 1 干擾素 胸腺肽 1治療e抗原陽性慢乙肝的中國報告 停藥6個月后胸腺肽 1持續(xù)應答率仍保持良好 YouJ etalWorldJGastroenterol 2006Nov7 41 6715 21 54 小結(jié) 內(nèi)毒素 炎性介質(zhì) 細菌感染 肝細胞損傷 T 1 微循環(huán)障礙 55 胸腺肽 1治療重癥肝炎的免疫調(diào)節(jié)研究 黃自存等 N 18T 11 6mg隔天或BIW 1月 200018001600140012001000800 302010 0 0 125 0 026 8 9 11 2 8 8 23 8 18 7 21 7 813 2004 1208 治療前后有顯著差異 所有指標P 0 01 g ml 56 57 58 胸腺肽 1聯(lián)合干擾素治療慢丙肝 薈萃分析 對INF無應答或復發(fā)病人 不能耐受INF副作用者 單用T 1 為期一年 59 胸腺肽 1適用于下列感染人群 細菌引起的高熱持續(xù)不退病人免疫低下創(chuàng)口難愈病人有嚴重感染史者年老體弱的患者欲行重大手術(shù)者 60 胸腺肽 1增加巨噬細胞及中性粒細胞吞噬及殺菌能力 取自無感染的小鼠支氣管肺泡巨噬細胞和外周中性細胞 預先用T 1培養(yǎng) 后暴露于孢子 測定吞噬能力和殺孢子能力 T