串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)在新生兒篩查上的應(yīng)用.ppt

串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)在新生兒篩查方面的應(yīng)用,新生兒篩查的必要性,遺傳代謝病多是罕見病，種類繁多，約4000種，常見的500種以上，單一病種發(fā)病率低,總體發(fā)病率1/3000-5000新生兒篩查：及早治療可預(yù)防疾病的發(fā)作，減輕癥狀提高患兒生存質(zhì)量，減少傷殘產(chǎn)前診斷：預(yù)防殘疾兒童的出生，提高出生人口素質(zhì)臨床篩查及診斷：明確診斷，減輕癥狀，挽救生命，減少醫(yī)療糾紛,串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)的優(yōu)勢,特異性：檢測分子量，內(nèi)標定量顯著降低假陽性率敏感性：明顯降低假陰性率高通量：一次可以檢測幾十種小分子物質(zhì)（30-50多種疾?。?，一臺儀器每天檢測500600個樣品，每個標本2-3分鐘采血簡單，可以寄送,串聯(lián)質(zhì)譜能篩查哪些疾病,氨基酸氨基酸障礙疾病酰基肉堿有機酸及脂肪酸代謝障礙疾病溶酶體病及腦白質(zhì)營養(yǎng)不良SCID（重癥聯(lián)合免疫缺陷）比較成熟臨床應(yīng)用范圍不斷擴大半乳糖血癥、糖原累積癥、Wilson病及線粒體腦肌病等等不能篩查,測定方法,目前使用LCMSMS技術(shù)主要檢測的氨基酸及酰基肉堿，可分別作為氨基酸代謝異常、脂肪酸代謝異常和有機酸代謝異常等疾病的判斷指征,前處理方法一般LCMSMS新生兒篩查血片的前處理方法可根據(jù)是否進行衍生化反應(yīng)分為衍生化法和非衍生化法兩大類，兩種前處理方法在各實驗室或檢測機構(gòu)均有使用，具體操作細節(jié)可能有所不同，其大致流程如下衍生化法,原材料采購與初加工部門,生產(chǎn)產(chǎn)品的車間,動力供應(yīng)部門,4,2,3,非衍生化法,衍生化法比較精確，但步驟繁瑣，且目標化合物易分解；非衍生化法步驟簡單，成本低，適合檢測大量樣本，但不夠精確。,液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的檢測原理,新生兒串聯(lián)質(zhì)譜篩查使用四極桿質(zhì)譜，該類串聯(lián)質(zhì)譜由四極桿質(zhì)量分析器、碰撞室、四極桿質(zhì)量分析器組成。待測化合物離子化后產(chǎn)生相應(yīng)前體離子，前體離子經(jīng)碰撞室發(fā)生誘導(dǎo)碰撞解離產(chǎn)生產(chǎn)物離子碎片，導(dǎo)入檢測器產(chǎn)生強度信號。,LC-MS/MS檢測到的離子流圖,島津液相串聯(lián)質(zhì)譜,島津公司針對新生兒篩查工作專門開發(fā)了NeonatalSolution新生兒篩查軟件，配合強大的LabSolutions工作站，為新生兒篩查工作提供完整的方法建立、數(shù)據(jù)采集、數(shù)據(jù)分析及自動準確度管理工具，可便捷、高效處理、分析、管理大批量新生兒篩查數(shù)據(jù)。,經(jīng)過NeonatalSolution的處理，自動得到各組分的計算結(jié)果，根據(jù)預(yù)設(shè)的限值，自動使用各種顏色標注超出限值的結(jié)果。,利用MALDI-TOF-MS檢測嬰兒遺傳疾病,利用飛行時間質(zhì)譜檢測基因是近年來的新技術(shù)，它對某些基因突變型遺傳疾病檢出率較高，與傳統(tǒng)常用基因檢測方法相比，具有檢測位點多、覆蓋率高、高通量等特點，能夠滿足臨床要求，為患兒未來的婚育、用藥及提早干預(yù)提供了積極有效的遺傳指導(dǎo)意義。,什么是MALDI-TOF-MS,MALDI-TOF-MSMatrix-AssistedLaserDesorptionIonizationTimeofFlightMassSpectrometry基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜,這項技術(shù)是由是由島津制作所的田中耕一先生和美國科學(xué)家約翰芬恩一起發(fā)明的，二人也因此項發(fā)明贏得了2002年的諾貝爾化學(xué)獎,原理,sampleplate,sampleplate,Laser,sampleplate,+,+,MALDI與其他的電離方式不同，樣本在基質(zhì)的保護下幾乎不受傷害?；|(zhì)在激光的照射下吸收了激光的能量，電離氣化，樣本接受了基質(zhì)電離放出的質(zhì)子從而帶電，這樣樣本分子在基質(zhì)氣相的包裹下，進入下一步驟。使用MALDI電離出的生物大分子是真正“活”著的生物大分子。,應(yīng)用,因MALTI-TOF-MS具有的檢測位點多、覆蓋率高、高通量等特點，無錫市婦幼保健醫(yī)院已經(jīng)為新生兒篩查應(yīng)用此技術(shù)做出了試驗。醫(yī)院選擇了2796例新生兒為研究對象，采集足跟血并提取基因組DNA，針對中國人群特點，進行4個基因(GJB2，CJB3，SLC26A4和12srRNA)20個突變位點的基因突變檢測，先通過PCR擴增出目的基因片段，然后通過飛行時間質(zhì)譜檢測，檢出耳聾基因突變新生兒158例，攜帶率為565。由此可證明MALDITOFMS對非綜合征型耳聾患者的突變檢出率較高。,雖然該技術(shù)具有高效、快速、判讀簡易和準確性高的檢測特點，有望成為一種極具潛力的耳聾基因診斷和篩查工具，但成本相對較高，且不能檢測到其他未知突變，所以有所局限，但在其他領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用，如質(zhì)量檢測方向的蛋白、肽鏈的檢測，還有DNA探針、引物的鑒定，檢測。,引用文章,無錫地區(qū)新生兒耳聾基因的MALDITOFMS篩查分析-中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志2015年2月基于質(zhì)譜的DNA序列測定進展-