GB 23748-2016 食品安全國家標準 輻照食品鑒定 篩選法

中華人民共和國國家標準016食品安全國家標準輻照食品鑒定 篩選法2016016 前 言本標準代替237482009輻照食品的鑒定 選法、22142012輻照食品鑒定 光釋光法和011出口輻照食品的鑒別方法 第2部分:單細胞凝膠電泳法。本標準與237482009相比,主要變化如下:標準名稱修改為“食品安全國家標準 輻照食品鑒定 篩選法”;增加了兩種篩選方法:光釋光法和微生物學篩選法;增加了0161 食品安全國家標準輻照食品鑒定 篩選法1 范圍本標準規(guī)定了三種快速篩選食品是否接受過輻照的鑒定方法:光釋光法、標準中的光釋光法適用于甲殼類、香辛料和調味品類產品的輻照鑒定;物、堅果、果蔬的輻照鑒定;微生物學篩選法適用于冷凍畜禽肉和水產品等各類生鮮食品的輻照鑒定。第一法 光釋光法2 釋光(含硅酸鹽類樣品俘獲的輻射能量經一定波長的光激發(fā)后,以光的形式釋放出來的現象。品經光激發(fā)后檢測到的發(fā)光量,以光子計數率表示。查品初次測量的正查一樣品用已知劑量輻照后測量的值(篩查模式下,用于判定樣品輻照與否的括一個低閾值(一個高閾值(性疑性0162 白對照(光刺激時,對空樣品容器獲得的光子計數率。性對照(參考光源(比如裝有14于樣品容器中得到的光子計數率。3 原理富含硅酸鹽類物質的樣品能夠儲存射線能量。通過一定波長的光再次激發(fā)照射,樣品中儲存的能量可以釋放,產生光釋放光信號。利用光釋放光檢測儀測試光信號的強度,比較不同光信號強度的大小,判定樣品是否經過輻照。4 釋光測量系統(tǒng):包括樣品容器、光激發(fā)源、脈沖刺激儀和同步光子計數系統(tǒng)。量盤:直徑5離輻射源:對電離輻射源的使用和管理按25306的規(guī)定。5 分析步驟注:樣品在測量前避光放置。測量時使用一次性測量盤。辛料和調味品的樣品制備準備雙份樣品,均勻鋪在測量盤底部,分別檢測。如果兩次檢測結果與判定閾值相比不一致,則將樣品4等分后重新進行檢測,取其中最高的兩個檢測值作為結果進行判定,依此類推。殼類動物的樣品制備將帶殼或去殼樣品放入測量盤中,樣品中帶有動物腸子時有利于光釋光信號的檢測。如個體較大,可對樣品切割;也可取腸子(不少于6根)放入測量盤中進行測量。器設置設定輻照食品篩查系統(tǒng)的個體測量參數。檢查空白對照和陽性對照。注:應當定期或者當測量出現陽性結果后,對容器進行空樣品檢測,檢查儀器是否受到污染。查測量進行樣品檢測并記錄結果。正測量篩查測量后的樣品加蓋保存,防止樣品損失或污染。對這些樣品再輻照特定劑量(香辛料和貝類食物輻照1輻照后室溫(甲殼類動物和其他易腐爛樣品應冷藏)避光保存12h,進行校正測量。0163 6 值設定香料和調味品的閾值設定為:002=5000殼類動物的閾值設定為:0002=4000果判斷根據與閾值的比較,樣品測量結果可分為陰性、可疑、陽性三種情況,分別進行判定。查判定樣品未經輻照。正樣品不能被判定為輻照食品。若要進一步確認樣品是否接受過輻照,應采用輻照食品鑒定的其他確證方法。校正篩查明測量系統(tǒng)有錯誤,應當取新鮮的原始樣品重新測量。查能直接判定樣品是否接受過輻照。正定樣品接受過輻照。校正查明樣品可能是低敏感性未輻照食品。若要進一步確認樣品是否接受過輻照,應采用輻照食品鑒定的其他確證方法。校正查明測量有誤。校正查明樣品可能接受過高于校正劑量的輻照。應當重新測量樣品進行判定。查判定樣品接受過輻照。正定樣品接受過輻照。校正遠高于陰性或可疑結果的篩查明樣品可能未經輻照。校正校正差1到2個數量級),表明測量有誤,需要重新進行測量。0164 第二法 理細胞包埋在瓊脂中,用裂解試劑溶解細胞膜,然后在一定的電壓下進行電泳。受損的成尾狀分布。染色后,受輻射的細胞圖譜接近圓形或者輕微拖尾。8 試劑除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為6682規(guī)定的三級水。甲基亞砜(2化鈉(化鉀(酸氫二鈉(2酸二氫鉀(二胺四乙酸二鈉(10氧化鈉(羥甲基氨基甲烷(4酸(二烷基磺酸鈉(12啶橙(化乙錠(氯乙酸(2酸鋅(油(酸鈉(酸銨(酸銀(硅酸(i(醛(乙酸(化吡啶(脂糖。熔點瓊脂糖。9 試劑配制試驗中所用的試劑配制見附錄A。0165 10 平電泳槽。子天平:加熱磁力攪拌器。波爐?？诪V膜:孔徑100m、200m、500m。微鏡載玻片:766磨砂邊。光顯微鏡:100倍400倍;藍色激發(fā)波長46085于吖啶橙染色觀察;綠色激發(fā)波長51560于磺化吡啶或溴化乙錠染色觀察。11 髓樣品制備切開骨頭,稱取約50入3玻璃棒攪拌,將細胞懸起,用100集濾液并將濾液置于冰盒上,備用(細胞懸液可置于冰上放置,時間不超過10加入5%10%的胞可置于存26h)。肉組織樣品制備用解剖刀將肌肉組織切成薄片(不能有可見脂肪)。稱取1入5該燒杯置于冰盒中,玻璃棒攪拌5次用500集濾液并在冰盒上放置5用。糧、研缽碾碎,置于小燒杯中,加入3該燒杯置于冰盒中,用玻璃棒攪拌5次用500集濾液并在冰盒上放置150用。研缽碾碎,置于小燒杯中,加入3該燒杯置于冰盒中,用玻璃棒攪拌5次用500集濾液并在冰盒上放置150用。菜(不包括食用菌)將蔬菜的可食部分用解剖刀切成薄片,取4g,加入5研缽碾碎,置于小燒杯中,加入3該小燒杯置于冰盒中,玻璃棒攪拌5次用500集濾液并在冰盒上放置150用。0166 涂載玻片涂布前,應將載玻片用甲醇浸泡以除去表面油脂。風干后,滴一滴(約50L)涂層瓊脂糖溶液于載玻片上,立即取另一個載玻片蓋在瓊脂糖上,使瓊脂糖溶液散開,取下上層載玻片,風干30用。埋凝膠取100后取100即蓋上蓋玻片使凝膠鋪展均勻,注意不可產生氣泡。將載玻片置于冰盒上5后用解剖刀尖將蓋玻片從瓊脂糖上剝離。物細胞5物細胞15使細胞溶解,溶解過程不要碰觸瓊脂糖。濕將載玻片浸入電泳緩沖液中,時間5泳將載玻片并排放入水平電泳槽,磨砂邊緣朝向陰極。電泳槽中加入電泳緩沖液沒過載玻片2溫下電泳20壓2V/閉電源后,將載玻片放入水中5溫下風干1h。啶橙、磺化吡啶或溴化乙錠染色將載玻片浸入染色液(吖啶橙染色液、磺化吡啶染色液或溴化乙錠染色液)3干載玻片下多余的水分,熒光顯微鏡觀察。酸銀染色將載玻片置于混合液洗1050恒溫干燥箱干燥1后將載玻片浸入混合液0復該步驟1次2次,染色時間50至載玻片呈現棕色。水洗1停止液水洗1后將載玻片室溫放置,自然風干。染色后的載玻片不會褪色,可長期保存觀察。注:熒光染料易淬滅,染色要迅速;染色液有毒,試驗結束后,應對廢液進行凈化處理再行棄置。光觀察吖啶橙染色的載玻片應用熒光顯微鏡(46085光激發(fā))觀察,染色化吡啶或溴化乙錠染色的載玻片應用熒光顯微鏡(51560色激發(fā))配合590色光觀察硝酸銀染色的載玻片可使用普通顯微鏡觀察。0167 12 果表述通過顯微鏡觀察,輻照過的樣品幾乎沒有完整細胞,全部是彗星圖像(未受損的細胞不拖尾或者有輕拖尾(定結果出現彗星圖像時,結果報告為陽性,樣品可能經過輻照。未出現彗星圖像時,結果報告為陰性,樣品未經輻照。13 限制性說明實際上不同樣品產生的彗星形狀會有明顯差異,而且其他處理過程也可能影響給輻照食品的判定帶來困難。故終確定食品是否接受了輻照,需要配合其他輻照食品確證方法進行檢測。第三法 微生物學篩選法14 術語和定義內毒素(蘭氏陰性菌的菌體中存在的毒性物質的總稱,是細菌細胞壁上的特有成分,其毒性成分主要為類脂質A。只有在細菌裂解后,內毒素才會釋放出來,可引起宿主發(fā)熱和內毒素休克等癥狀。15 原理在適宜條件下,細菌內毒素可激活鱟試劑中的凝固酶原,使鱟試劑產生凝集反應形成凝膠。內毒素與革蘭氏陰性菌含量呈正相關,所以可根據內毒素的含量測定革蘭氏陰性菌的含量。食品經過一定劑量的輻照后,食品中的革蘭氏陰性細菌基本上被殺死,但殘留的內毒素不會因輻照處理而消失。因此可通過內毒素濃度測定,計算被輻照食品中死亡和存活革蘭氏陰性細菌的總數,同時對食品中存活的革蘭氏陰性細菌進行培養(yǎng)計數,通過兩者的差異,可判斷食品是否經過輻照。若兩個數值的差異明顯,表明樣品可能接受過輻照。16 試劑:射用無熱源生理鹽水。白胨溶液(0168 養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(奶瓊脂培養(yǎng)基(晶紫溶液(霉素溶液(蘭氏陰性細菌選擇性培養(yǎng)基(準品內毒素標準樣品(50,純度99%。準溶液配制內毒素標準液:取內毒素標準樣品,加入1解為50EU/7 調溫水浴鍋。壓滅菌鍋。子天平:溫干燥箱。旋振蕩器。熱恒溫培養(yǎng)箱。質器:8000r/0000r/8 分析步驟注:樣品應在4保存,24不能立即檢驗,應置于存,最長保存時間不超過30d。樣無菌條件下,在樣品的不同部位取樣,共取10g。將樣品置于無菌塑料容器中,用一次性針筒加入90000r/成濃度為10保存?zhèn)溆?最長保存時間不超過24h。養(yǎng)基制備制備蛋白胨溶液、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、革蘭氏陰性菌選擇性培養(yǎng)基(見附錄C),傾注平板前將融化的培養(yǎng)基于451水浴保溫。據樣品污染情況,對樣品溶液(10進一步的稀釋,用蛋白胨溶液對樣品稀釋液按照9到濃度為100溫下,正面向上靜置90個稀釋度做2個平板。個平板覆蓋10平放置,使瓊脂凝固。倒置平板于0169 211培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h1h。擇菌落數為15300的2個連續(xù)稀釋度平板計數(每克樣品中的革蘭氏陰性菌數按式(1)計算:N=cV.1) d(1)式中:N每克樣品中革蘭氏陰性細菌數,單位為菌落形成單位每克(g);c長有15個300個菌落的2個連續(xù)稀釋度平板的菌落之和;V每個平板接種的菌液體積,單位為毫升(第一個稀釋度的計數平板數;第二個稀釋度的計數平板數;d計數有效平板的第一個稀釋度。若只有一個稀釋度的平板長有15個300個菌落時,則若所有稀釋度的平板菌落數均小于15時,則以菌落數最多的平板的菌落數作為若所有稀釋度的平板菌落均未長菌時,結果表示為未檢測到革蘭氏陰性菌,試劑溶解與分裝按試劑標示量,加入無熱源生理鹽水溶解,混勻,品稀釋使用96孔板稀釋樣品。每一個樣品稀釋孔中加入650300合均勻,到10將300續(xù)稀釋,直到最后一個稀釋倍數的樣品內毒素檢測為陰性(最終的稀釋倍數視樣品情況而定。試劑檢測反應在96孔板中進行。以內毒素標準品溶液作為陽性對照,無熱源生理鹽水作為陰性對照。勻。蓋上96孔板蓋子,置于37浴中反應1h。果計數當試劑發(fā)生完全凝集時記為“+”,部分凝集時記為“+/-”,未凝集時記為“-”。毒素定量根據不同稀釋倍數內毒素標準品溶液的檢測情況確定檢測鱟試劑的靈敏度。以發(fā)生凝固的最后一01610 個樣品稀釋溶液的滴度用于計算,如果完全凝固時,以實際滴度用于計算(如果為部分凝固“+/-”時,每克樣品中內毒素含量按式(2)計算:c10t1010T(2)式中:每克樣品中內毒素含量,單位為內毒素單位每克(EU/g);c標準品中內毒素含量,單位為內毒素單位每毫升(EU/t樣品的滴度值;T標準品稀釋倍數。19 算 時,表示樣品經檢測含有較高的內毒素含量,但經培養(yǎng)的革蘭氏陰性菌數目較少或者未檢測出有可培養(yǎng)的革蘭氏陰性菌。 ,表示樣品經檢測含有較高的內毒素含量,且培養(yǎng)的革蘭氏陰性菌數目較多。 定該樣品可能