凝集反應(yīng)課件

1、凝集反應(yīng),第五章 凝集反應(yīng),凝集反應(yīng),第一節(jié) 凝集反應(yīng)的特點(diǎn),凝集反應(yīng)定義 細(xì)菌、螺旋體、紅細(xì)胞或細(xì)胞性抗原等顆粒性抗原，或可溶性抗原（或抗體）與載體顆粒結(jié)合成致敏顆粒后，它們與相應(yīng)抗體（或抗原）發(fā)生特異性反應(yīng)，在適當(dāng)電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象,凝集反應(yīng),反應(yīng)階段： 抗原抗體的特異性結(jié)合 出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象 反應(yīng)特點(diǎn)： IgM的作用比IgG大數(shù)百倍 IgG與抗原結(jié)合后，常不出現(xiàn)凝集反應(yīng)，稱不完全抗體,凝集反應(yīng),定性 半定量 效價(jià)（滴度）：將標(biāo)本進(jìn)行一系列對(duì)比稀釋后反應(yīng)，以出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)的最高稀釋 度為效價(jià)（滴度,凝集反應(yīng),凝集反應(yīng),可見(jiàn)反應(yīng)形成,凝集反應(yīng),第二節(jié) 直接凝集反應(yīng),直接

2、凝集反應(yīng)(direct agglutination)： 顆粒性抗原直接與抗體結(jié)合，在電解質(zhì)的參與下可直接與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象。 凝集原(agglutinogen)：凝集反應(yīng)中的抗原。 凝集素(agglutinin)：凝集參與反應(yīng)的抗體,凝集反應(yīng),一、玻片凝集試驗(yàn)(slideagglutination test,原理：通常以已知抗體作為診斷血清，與待測(cè)顆?？乖谟须娊赓|(zhì)存在下，作用一定時(shí)間，通過(guò)凝集與否，進(jìn)行細(xì)菌或紅細(xì)胞定性（或定型,凝集反應(yīng),方法評(píng)價(jià)： 定性試驗(yàn)、 簡(jiǎn)便、快速、 敏感度低 臨床應(yīng)用 菌種鑒定 血清學(xué)分型血型鑒定,凝集反應(yīng),二、試管凝集試驗(yàn)(tube agglut

3、ination test,原理：是細(xì)菌或紅細(xì)胞等顆粒性抗原與相應(yīng)抗體在試管中直接凝集，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象。 多用以測(cè)定抗體,凝集反應(yīng),0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,棄掉0.5,試管凝集試驗(yàn)原理,結(jié)果,1 2 3 4 5 6 7,菌液,凝集反應(yīng),試管凝集試驗(yàn),凝集反應(yīng),方法評(píng)價(jià)： 半定量試驗(yàn)、簡(jiǎn)便、快速 敏感度低、可有假陽(yáng)性 臨床應(yīng)用： Widal reaction Weil-felix reaction Wright test:布魯菌病 交叉配血試驗(yàn),凝集反應(yīng),第三節(jié) 間接凝集反應(yīng),間接凝集反應(yīng)(indirect agglutination): 將可溶性抗原或抗體吸附于顆粒性載體

4、表面，然后與相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng)，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象，或稱為被動(dòng)凝集反應(yīng)(passive agglutination) 適用于各種抗體和可溶性抗原的檢測(cè),凝集反應(yīng),載體(carrier)：試驗(yàn)體系中與免疫無(wú)關(guān)的顆粒。 致敏：抗原(或抗體)偶聯(lián)于顆粒表面的過(guò)程。 致敏顆粒（sensitized particle):吸附有已知抗原或抗體的顆粒,凝集反應(yīng),載體種類及其處理方法,紅細(xì)胞： 新鮮紅細(xì)胞吸附蛋白質(zhì)的能力差。一般先醛化后應(yīng)用。 聚苯乙烯膠乳顆粒： 可物理吸附蛋白質(zhì)；常制備帶有化學(xué)活性基團(tuán)（羧基）的顆粒 金黃色葡萄球菌蛋白A（SPA）: 具有與IgG Fc段結(jié)合的特性,凝

5、集反應(yīng),載體,可溶性抗原,致敏,致敏顆粒,NS,凝集顆粒,間接凝集試驗(yàn)示意圖,間接凝集試驗(yàn)示意圖,凝集反應(yīng),一、間接凝集反應(yīng)類型,根據(jù)致敏用的試劑和反應(yīng)方式分為,正向間接凝集試驗(yàn) 反向間接凝集試驗(yàn) 間接凝集抑制試驗(yàn) 協(xié)同凝集試驗(yàn),凝集反應(yīng),載體,可溶性抗原,致敏,致敏顆粒,NS,凝集顆粒,正向）間接凝集試驗(yàn),用特異性抗原致敏載體，檢測(cè)標(biāo)本中的相應(yīng)抗體的方法,待測(cè)抗體,凝集反應(yīng),反向間接凝集試驗(yàn),用特異性抗體致敏載體，檢測(cè)標(biāo)本中的相應(yīng)抗原的方法,載體,已知抗體,致敏,致敏顆粒,NS,凝集顆粒,待測(cè)抗原,凝集反應(yīng),間接凝集抑制試驗(yàn),待測(cè)抗原,已知抗體,特異結(jié)合,抗原抗體復(fù)合物,NS,致敏顆粒,用抗

6、原致敏載體及相應(yīng)抗體作為診斷試劑，用于檢測(cè)標(biāo)本中是否存在與致敏載體相同的抗原,無(wú)凝集顆粒為陽(yáng)性,凝集反應(yīng),間接凝集抑制試驗(yàn),待測(cè)抗原,已知抗體,無(wú)結(jié)合,抗原抗體分散,NS,致敏顆粒,有凝集顆粒為陰性,凝集反應(yīng),協(xié)同凝集試驗(yàn)(coagglutination test,原理：SPA能與血清中的IgG類抗體的Fc段非特異性結(jié)合，而兩個(gè)Fab段暴露在葡萄球菌菌體表面，仍然保持正常的抗體活性，與特異性抗原相遇時(shí)，能出現(xiàn)特異的凝集現(xiàn)象。 應(yīng)用：微生物的快速診斷、定種及定型；以協(xié)助傳染病的早期診斷,凝集反應(yīng),原理圖,IgG,SPA,SPA- IgG,待測(cè)抗原,SPA- IgG-待測(cè)抗原凝集顆粒,混合,加入,

7、凝集反應(yīng),二、間接血凝試驗(yàn)(被動(dòng)血凝試驗(yàn)) （indirect hemagglutination test,原理：將可溶性抗原(或抗體）吸附人的“O”型血紅細(xì)胞或綿羊或家兔的紅細(xì)胞，制成致敏血紅細(xì)胞,與相應(yīng)抗體（或抗原）作用，在適宜電解質(zhì)參與下，出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。 方法評(píng)價(jià)： 敏感性較強(qiáng)、簡(jiǎn)便、快速、成本低廉,凝集反應(yīng),紅細(xì)胞,抗原,致敏,致敏紅細(xì)胞,NS,紅細(xì)胞凝集,間接血凝試驗(yàn),間接血凝試驗(yàn)原理,待測(cè)抗體,凝集反應(yīng),反向間接血凝試驗(yàn),凝集反應(yīng),血凝試驗(yàn)強(qiáng)度,凝集反應(yīng),三、膠乳凝集試驗(yàn)(latex agglutination test,LAT,原理:將可溶性抗原(或抗體）與膠乳結(jié)合后，直接

8、與待測(cè)標(biāo)本中相應(yīng)抗體（或抗原）發(fā)生凝集反應(yīng)。 方法評(píng)價(jià)： 1.膠乳顆粒的性能比RBC穩(wěn)定、均一性好 2.與抗原結(jié)合的能力及凝集性能不如RBC,凝集反應(yīng),凝集反應(yīng),凝集反應(yīng),四、明膠凝集試驗(yàn)（gelatin agglutination test, GAT,原理：將病毒抗原或重組抗原吸附于粉紅色明膠顆粒上，當(dāng)致敏顆粒與樣品血清作用時(shí)，若血清含有抗病毒抗體則可形成肉眼可見(jiàn)的粉紅色凝集,凝集反應(yīng),五、間接凝集試驗(yàn)的應(yīng)用,1. 抗體的檢測(cè) 檢測(cè)細(xì)菌、病毒寄生蟲(chóng)感染后產(chǎn)生的抗體 自身免疫病患者的抗體的檢測(cè) 變態(tài)反應(yīng)患者的抗體的檢測(cè) 2. 抗原的檢測(cè) 反向間接凝集試驗(yàn)可用于檢測(cè)病原體的可溶性抗原， 也可用于

9、檢測(cè)各種蛋白質(zhì)成分,凝集反應(yīng),第四節(jié) 自身紅細(xì)胞凝集試驗(yàn),未經(jīng)致敏的受檢者新鮮紅細(xì)胞 試劑：抗人O型紅細(xì)胞的單克隆抗體 可檢測(cè)抗原、抗體 標(biāo)本：全血 臨床應(yīng)用：HIV檢測(cè)、HBV檢測(cè),凝集反應(yīng),自身紅細(xì)胞凝集試驗(yàn),凝集反應(yīng),第五節(jié) 抗球蛋白試驗(yàn)(Coombs試驗(yàn)) (antiglobulin test,凝集反應(yīng),原理：機(jī)體受某些抗原刺激后產(chǎn)生“不完全抗體”，其與相應(yīng)抗原結(jié)合后不出現(xiàn)可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象，但能封閉抗原決定簇，使其不能再與完全抗體結(jié)合。 不完全抗體：多為7S的IgG類抗體,凝集反應(yīng),方法：將人球蛋白，注入異種動(dòng)物，獲得抗球蛋白。此種抗體加入表面結(jié)合有不完全抗體的紅細(xì)胞的復(fù)合物中，就能出現(xiàn)

10、可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象。 類型 直接法 間接法,凝集反應(yīng),一）直接Coombs試驗(yàn),不完全抗體,檢測(cè)紅細(xì)胞上抗體,凝集反應(yīng),二）間接Coombs試驗(yàn),檢測(cè)血清中的抗紅細(xì)胞抗體,凝集反應(yīng),直接法,作用：檢測(cè)紅細(xì)胞表面結(jié)合的不完全抗體。 臨床意義：新生兒溶血癥和自身免疫性溶血性貧血的診斷,RBC為Rh,7S的IgG,體內(nèi)發(fā)生,抗IgG,體外測(cè)試,抽血,凝集反應(yīng),間接法,作用：檢測(cè)游離在血清中的不完全抗體。 臨床意義：輸血前的交叉配血、不相溶輸血后的抗體檢測(cè)。檢測(cè)母體 Rh（D）抗體有助于及早發(fā)現(xiàn)及避免新生兒溶血癥,RBC為Rh,不完全抗 體試劑,抗IgG,體外測(cè)試,凝集反應(yīng),小結(jié),凝集反應(yīng)是指細(xì)菌和紅細(xì)胞等顆粒性抗原或表面包被抗原的顆粒性載體與相應(yīng)抗體結(jié)合后，可出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象。 可以分為直接凝集反應(yīng)和間接凝集反應(yīng)。 在臨床檢驗(yàn)中最常用的為間接血凝試驗(yàn)、膠乳凝集試驗(yàn)和明膠試驗(yàn)。 抗