臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的建立參考PPT

1、臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的建立,2013.10.21,1,From,福建省臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室 規(guī)范化培訓(xùn)暨技術(shù)人員培訓(xùn)班 衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心 李金明,2,Contents,PCR技術(shù)介紹； 質(zhì)量管理體系的建立； 質(zhì)量保證； 質(zhì)控規(guī)則,3,PCR技術(shù),高溫,Target Sequence,Target Sequence,較低溫度,Target Sequence,最適溫度,1,2,3,4,實(shí)時(shí)熒光定量PCR,模板起始濃度越高，熒光信號(hào)強(qiáng)度達(dá)到域值所需的循環(huán)數(shù)越少，即Ct值越小,模板起始濃度的常用對(duì)數(shù)與Ct值呈負(fù)線性關(guān)系,5,無(wú)基因無(wú)核酸的重要性,嚴(yán)格分區(qū)（一區(qū)二區(qū)三區(qū)）； 開(kāi)窗通風(fēng)； 用

2、次氯酸鈉擦洗地面和臺(tái)面，甚至墻面； 增長(zhǎng)紫外照射的時(shí)間； 用75%乙醇空中噴霧； 實(shí)驗(yàn)前的處理程序和實(shí)驗(yàn)后的處理程序,6,核酸污染的來(lái)源,臨床標(biāo)本中存在的大量待測(cè)微生物 科研中得到的質(zhì)?？寺?以前分析研究的特定微生物 大量存在于實(shí)驗(yàn)環(huán)境中的特定微生物 以前擴(kuò)增產(chǎn)物的殘留污染。這也是PCR實(shí)驗(yàn)室最容易產(chǎn)生的，將造成假陽(yáng)性的“污染,Next,7,質(zhì)量體系文件的編寫(xiě),基本原則：最有效+符合實(shí)際； 三大特性： 法規(guī)性：一旦批準(zhǔn)必須認(rèn)真執(zhí)行； 唯一性：一個(gè)檢驗(yàn)活動(dòng)只能有唯一的操作程序； 適用性：要符合實(shí)際，具有可操作性； SOP包含的內(nèi)容：5W+1H； SOP呈現(xiàn)方式：圖片+文字,8,PCR實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量

3、體系文件,檢測(cè)項(xiàng)目的性能驗(yàn)證； 項(xiàng)目檢測(cè)的SOP; 儀器和設(shè)備的操作SOP； 儀器和設(shè)備的維護(hù)SOP； 人員的技術(shù)檔案； 各種記錄表格,9,表格記錄,10,11,12,13,儀器設(shè)備的維護(hù)校準(zhǔn)SOP,日維護(hù) 周維護(hù) 定期維護(hù) 劑量單位校準(zhǔn) 廠家校準(zhǔn),14,人員的技術(shù)檔案記錄,一人一個(gè)檔案； 個(gè)人基本情況； 培訓(xùn)證和上崗證； 論文、著作、成果等； 培訓(xùn)考核記錄等,15,儀器設(shè)備的技術(shù)檔案,一臺(tái)儀器一個(gè)檔案； 儀器的基本情況； 儀器的使用說(shuō)明書(shū)； 儀器校準(zhǔn)的記錄； 維修維護(hù)的記錄等,Next,16,室內(nèi)質(zhì)量控制,由實(shí)驗(yàn)室工作人員采取一定的方法和步驟，連續(xù)評(píng)價(jià)本實(shí)驗(yàn)室工作的可靠性程度；旨在監(jiān)測(cè)和控制

4、本實(shí)驗(yàn)室工作的精密度，提高本實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作中批內(nèi)和批間樣本檢驗(yàn)的一致性，以確定測(cè)定工作的結(jié)果是否可靠、可否發(fā)出報(bào)告的一項(xiàng)工作； 改善測(cè)定精密度的措施必須首先著重在最不精密的步驟上，即對(duì)試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本采集、核酸提取、測(cè)定方法和儀器操作寫(xiě)出并嚴(yán)格執(zhí)行“標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP,17,室內(nèi)質(zhì)量控制,標(biāo)本采集、運(yùn)送和保存中的關(guān)鍵點(diǎn): 容器密閉、一次性、無(wú)菌、無(wú)核酸酶及擴(kuò)增抑制物； 采集方法人員訓(xùn)練有素、防污染、保存時(shí)間和溫度； 合格標(biāo)本容器完整、量夠、時(shí)間符合要求、外觀符合要求、要猜到病原體等,18,第49-51頁(yè),19,20,21,為客觀比較一個(gè)實(shí)驗(yàn)室的測(cè)定結(jié)果與靶值的差異，由外單位機(jī)構(gòu)，采取一定的辦法

5、，連續(xù)和客觀地評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室的測(cè)定結(jié)果，發(fā)現(xiàn)誤差并校正結(jié)果，使各實(shí)驗(yàn)室之間的結(jié)果具有可比性，這是對(duì)實(shí)驗(yàn)室操作和實(shí)驗(yàn)方法的回顧性評(píng)價(jià)，而不是用來(lái)決定在實(shí)時(shí)的測(cè)定結(jié)果的可接受性,室間質(zhì)量評(píng)價(jià),22,23,24,室間質(zhì)評(píng)的檔案袋,申請(qǐng)表； 接收記錄； 保存記錄； 實(shí)驗(yàn)記錄； 結(jié)果上報(bào)表； 結(jié)果匯報(bào)表； 分析和改進(jìn)內(nèi)容,Next,25,質(zhì)控規(guī)則,質(zhì)控規(guī)則的功能：判斷測(cè)定批的失控還是在控； 失控處理： 查出原因； 采取措施； 保證消除； 不再出現(xiàn)； 納入標(biāo)準(zhǔn),防止同樣的問(wèn)題出現(xiàn)第二次是質(zhì)量管理的“精髓,26,符 號(hào) 定 義 12S 一個(gè)質(zhì)控測(cè)定值超出2s控制限。 13S 一個(gè)質(zhì)控測(cè)定值超出3s控制限。 22

6、S 兩個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測(cè)定值同時(shí)超出+2s或2s控制限。 R4S 同一批測(cè)定中，兩個(gè)不同濃度質(zhì)控物的測(cè)定值之間的 差值超出4s控制限。 41S 四個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測(cè)定值同時(shí)超出+1s或1s控制限。 7T 七個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測(cè)定值呈現(xiàn)一個(gè)向上或向下的趨勢(shì)變 化。 10X 十個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測(cè)定值同時(shí)處于均值的同一側(cè),質(zhì)控規(guī)則的符號(hào)及其定義,27,即刻法”和Levey-Jennings質(zhì)控圖法 “即刻法” 的實(shí)質(zhì)是一種統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，即Grubs異常值取舍法 ；只要有3個(gè)以上的數(shù)據(jù)即可決定是否有異常值的存在。 Levey-Jennings質(zhì)控圖法：穩(wěn)定條件下，20個(gè)室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果不應(yīng)有多于1個(gè)結(jié)果超過(guò)2SD限度；在1000個(gè)測(cè)定結(jié)果中超過(guò)3SD的結(jié)果不多于3個(gè),質(zhì)控方法,28,即刻法,在剛開(kāi)始進(jìn)行質(zhì)控時(shí)，可以采用“即刻法”進(jìn)行質(zhì)控，當(dāng)日常有效測(cè)定次數(shù)超