肺炎病原學(xué)診斷

1、社區(qū)獲得性肺炎病原學(xué)診斷,社區(qū)獲得性肺炎病原學(xué),病毒病原 合胞病毒、腺病毒 流感病毒A和B 副流感病毒1、2、3 偏肺病毒、鼻病毒 細菌病原 肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌 金黃色葡萄球菌 軍團菌屬、結(jié)核桿菌等,社區(qū)獲得性肺炎病原學(xué),非典型性病原 肺炎支原體 肺炎衣原體 沙眼衣原體 病毒感染為25 % 35%，細菌感染為2154 % ,非典型病原如支原體、衣原體感染為7 % ,兩種以上病原混合11,不同年齡組兒童的常見微生物病原,不同年齡組兒童的常見微生物病原,不同年齡組兒童的常見微生物病原,兒童CAP 病原學(xué)診斷方法,病原菌分離培養(yǎng) 免疫學(xué)方法檢測病原的特異性抗原抗體 分子生物學(xué)診斷方法,病原培養(yǎng)

2、分離,標(biāo)本種類 血液 胸水 支氣管肺泡灌洗 痰液，咽、鼻分泌物,血液培養(yǎng),肺炎伴發(fā)菌血癥機會510，重癥和免疫抑制患者則較高。 血標(biāo)本采集方便、安全，且污染機會少、特異性高，它們在病原學(xué)診斷上具有特殊意義。 重癥特別是免疫抑制宿主肺炎，應(yīng)盡早、多次采血作細菌和真菌培養(yǎng),血液培養(yǎng),血培養(yǎng)標(biāo)本要求 采集必須在使用抗菌藥物之前 采用全自動血培養(yǎng)儀配備的兒童專用血培養(yǎng)瓶 每次2瓶，在不同部位采血 采血量，兒童3-5ml，嬰幼兒1-2ml。 采集后的血培養(yǎng)瓶應(yīng)立即送往實驗室,采血份數(shù)與陽性率之間的關(guān)系,采血量與陽性率的關(guān)系,胸水,對大多數(shù)伴有胸腔積液的肺炎，無論確診與否，應(yīng)該行胸腔穿刺術(shù)采集標(biāo)本。胸腔積

3、液或膿胸均應(yīng)做厭氧培養(yǎng)。 胸水是無污染標(biāo)本，不論被檢測出的微生物數(shù)量多少，都被認為是病原體。 細胞計數(shù)和pH測定，腺苷脫氨酶（ADA）測定對鑒別結(jié)核胸膜炎具有較好價值。 胸水的抗原檢測用于疾病診斷，如流感嗜血桿菌b型、肺炎鏈球菌、軍團菌或新型隱球菌,痰標(biāo)本,痰培養(yǎng)結(jié)果應(yīng)結(jié)合臨床表現(xiàn)、直接鏡檢、細胞學(xué)篩選、定量或半定量培養(yǎng)以及所發(fā)現(xiàn)的微生物的致病力等加以解釋。 可用于普通細菌、分枝桿菌、真菌的檢測，但不適于檢測厭氧菌。 在無菌條件下，用負壓吸引法吸取患兒會咽部以下的下呼吸道的分泌物，置滅菌三通管內(nèi),痰標(biāo)本,痰涂片鏡檢每低倍鏡視野25個中性粒細胞。 痰標(biāo)本也可以用直接免疫熒光法快速檢測出下呼吸道的

4、病毒感染,支氣管肺泡灌洗液,對于不能咳出或誘導(dǎo)出足夠的痰液患者，支氣管肺泡灌洗液可作為獲取標(biāo)本進行病原菌培養(yǎng)的一種方法。 支氣管肺泡灌洗液在檢測需氧菌、真菌、軍團菌和分枝桿菌等感染時可提高陽性檢出率。有研究表明特異性高達89100%。 支氣管肺泡灌洗液經(jīng)低速在玻片上制成細胞標(biāo)本涂片，可以用直接免疫熒光法快速檢測出下呼吸道的病毒感染的8種病毒。 鱗狀上皮細胞1中性粒細胞80為合格標(biāo)本,標(biāo)本采集和送檢,痰和支氣管肺泡灌洗液 必須在使用抗菌藥物之前或停藥1天后留取標(biāo)本。 標(biāo)本采集后1h內(nèi)必須立即進行實驗室處理。 室溫下延擱2h會降低肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等苛養(yǎng)菌的分離率，銅綠假單胞菌等革蘭陰性桿菌

5、則過度生長,我院呼吸道分離的主要細菌（2008-2009,肺炎鏈球菌869株（14 % ） 金黃色葡萄球菌692株（11%） 流感嗜血桿菌662株（10%） 肺炎支原體878株（16.3,細菌培養(yǎng)菌落形態(tài),肺炎鏈球菌 、金黃色葡萄球菌,細菌培養(yǎng)菌落形態(tài),MP培養(yǎng),MP培養(yǎng),MFA檢測呼吸道病毒,MFA法檢測呼吸道病毒,病原微生物的抗體檢測,血清學(xué)檢查通常用于檢測非典型病原體如肺炎支原體（MP）、肺炎衣原體（CP）、軍團菌。 常用方法有間接免疫熒光試驗（IFA）、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、放射免疫法（RIA）、顆粒凝集試驗（PA）等,MP血清學(xué)檢查,ELISA法 檢測MP-IgM、 MP-

6、IgG 定性或定量 PA法 檢測MP-IgM 確診MP急性感染則應(yīng)強調(diào)雙份血清(間隔2周)恢復(fù)期抗體滴度上升4倍或下降至原來的1/4或抗體滴度持續(xù)1:160,CP血清學(xué)檢查,微量免疫熒光法(MIF)、酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA) 抗體檢測3種：IgM,IgG和IgA 初次感染(原發(fā)感染)時，IgM于發(fā)病后3周出現(xiàn)，IgG于發(fā)病后6一8周出現(xiàn)，而IgA反應(yīng)較弱或不出現(xiàn)。 再次感染(重復(fù)感染)時，IgG常在1一2周內(nèi)出現(xiàn)，且效價可以很高，但往往沒有IgM出現(xiàn)或其效價很低,軍團菌血清抗體檢測,尿軍團菌抗原檢測：酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測病人痰或尿液的嗜肺軍團菌抗原。 血清學(xué)檢查: 間接免疫熒光法或酶聯(lián)免

7、疫吸附試驗檢測特異性IgM抗體，如效價1：128或雙份血清效價呈4倍以上升高可做出確定診斷,軍團菌檢測,IFA檢測呼吸道病原抗體,分子生物學(xué)技術(shù),優(yōu)點 直接從臨床標(biāo)本中快速、準(zhǔn)確地檢測出包括苛養(yǎng)菌在內(nèi)的細菌. 檢測耐藥基因 對耐藥菌進行流行病學(xué)研究PCR方法 方法 隨機擴增DNA多態(tài)性分析 限制性片段長度多態(tài)性分析PCR 多重PCR PFGE,MP分子生物學(xué)檢測,PCR檢測MPP1粘附蛋白：根據(jù)肺炎支原體P1粘附蛋白設(shè)計PCR引物： P1: 5-GCCACCCTCGGGGGCAGTCAG-3 P2: 5-GAGTCGGGATTCCCCGCGGAGG-3 擴增產(chǎn)物209bp,雙重PCR簡便、快速檢測軍團菌,根據(jù)軍團菌16SrRNA基因和mip基因序列設(shè)計合成引物，可以擴增 38 6bp 16SrRNA基因和 206b