不同藍(lán)莓品種莖段初代培養(yǎng)及增殖能力比較

1、不同藍(lán)莓品種莖段初代培養(yǎng)及增殖能力比較藍(lán)莓( Blueberry)學(xué)名越橘，屬杜鵑花科越桔屬漿果類灌木，是具有較高經(jīng)濟(jì)價(jià)值和廣闊開發(fā)前景的新興樹種。藍(lán)莓果實(shí)具有防止腦神經(jīng)衰老、增強(qiáng)心臟功能、明目及抗癌等獨(dú)特功效，被國(guó)際糧農(nóng)組織列為人類五大健康食品之一。正是由于藍(lán)莓獨(dú)特的風(fēng)味及營(yíng)養(yǎng)保健價(jià)值，其果實(shí)及產(chǎn)品風(fēng)靡世界，供不應(yīng)求，在國(guó)際市場(chǎng)上售價(jià)昂貴。2010年，我國(guó)國(guó)栽培藍(lán)莓面積5 000 hm2，產(chǎn)量1 000 t，主要分布在吉林、山東、江蘇、浙江、上海、貴州等省，經(jīng)濟(jì)效益顯著，開創(chuàng)了一條特色高效農(nóng)業(yè)發(fā)展之路。湖北省藍(lán)莓商業(yè)化種植剛剛起步，但是本省地處我國(guó)中部，地理和氣候資源豐富多樣，適宜藍(lán)莓種植的

2、面積大。湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹茶葉研究所2001年開始藍(lán)莓引種研究，從國(guó)內(nèi)科研院校以及美國(guó)引進(jìn)北高叢藍(lán)莓、南高叢藍(lán)莓、兔眼藍(lán)莓等品種50余份，為品種篩選和新品種培育提供了豐富資源。植物離體快繁是植物組織培養(yǎng)在生產(chǎn)上應(yīng)用最廣泛、產(chǎn)生較大經(jīng)濟(jì)效益的一項(xiàng)技術(shù)。離體快繁具有繁殖系數(shù)大、周年生產(chǎn)、繁殖速度快、苗木整齊一致等優(yōu)點(diǎn)，能使新品種在短時(shí)間內(nèi)繁育出大量?jī)?yōu)質(zhì)苗木，并保持品種的優(yōu)良特性，加速優(yōu)良品種在生產(chǎn)上的推廣應(yīng)用。本研究利用組織培養(yǎng)技術(shù)對(duì)引進(jìn)的藍(lán)莓品種進(jìn)行離體培養(yǎng)及快速繁殖研究，為藍(lán)莓在湖北省的推廣應(yīng)用提供技術(shù)支持。1材料與方法1.1材料供試材料為湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹茶葉研究所藍(lán)莓品種圃3年生藍(lán)莓的

3、一年生枝條，所有品種均從美國(guó)奧本大學(xué)引進(jìn)。1.2方法試驗(yàn)于2012年4-12月在湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹茶葉研究所實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。1.2.1莖段初代培養(yǎng)選取生長(zhǎng)健壯、無病蟲害的枝條，剪取枝條上部7-8 cm。枝條取回后，去葉片，流水沖洗lh。在超凈臺(tái)上先用70%酒精浸泡30 s，0.1% HgC12消毒6-8 min,無菌水沖洗5次，每次5 min，剪成單芽莖段后，接種到初代培養(yǎng)基上，黑暗培養(yǎng)2-3 d。所用基本培養(yǎng)基為改良WPM培養(yǎng)基，ZT 2 mg/L，瓊脂7.0 g/L，蔗糖30.0 g/L，pH 5.4，121滅菌20 min25%下每天光照14 h，光強(qiáng)1 900 lx，繼代周期40 d。1

4、.2.2繼代增殖培養(yǎng)初代培養(yǎng)的不定梢長(zhǎng)到34 cm時(shí)，剪成1-2 cm莖段接在繼代培養(yǎng)基上。繼代4次后，調(diào)查不同藍(lán)莓品種的生長(zhǎng)及增殖情況。培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件同初代培養(yǎng)。1.3調(diào)查內(nèi)容和方法外植體莖段接種40 d后，統(tǒng)計(jì)芽誘導(dǎo)率并記載初代幼苗生長(zhǎng)情況。繼代培養(yǎng)45 d后統(tǒng)計(jì)增殖率及幼苗生長(zhǎng)情況。芽誘導(dǎo)率=萌芽莖段數(shù)妾種莖段數(shù)100%增殖率=生成不定芽的數(shù)量接種莖段數(shù)2結(jié)果與分析2.1不同藍(lán)莓品種莖段芽誘導(dǎo)情況無菌培養(yǎng)體系的建立是藍(lán)莓組織培養(yǎng)的基礎(chǔ)。由于藍(lán)莓初代培養(yǎng)莖段均從田間獲得，藍(lán)莓成年莖段培養(yǎng)體系的不成熟，制約著相關(guān)生物技術(shù)在藍(lán)莓生產(chǎn)上的應(yīng)用，而進(jìn)行莖段培養(yǎng)的第一步就是取得大量的無菌材料。4-

5、5月份，在3年生藍(lán)莓樹上取材，污染率及褐死率較低，采用改良WPM培養(yǎng)基，不同藍(lán)莓品種莖段均成功誘導(dǎo)出不定芽，品種芽誘導(dǎo)率及萌發(fā)情況存在較大差異。北高叢藍(lán)莓莖段接種后7d，已有部分品種芽萌出，其中伯克利、藍(lán)豐、公爵、北陸萌芽早，且萌芽率較高，萌芽率分別為91.6%、83.3%、85.0%、90.0%，伯克利帶芽莖段部分誘導(dǎo)出叢生芽，公爵、北陸不定芽生長(zhǎng)粗壯。莖段誘導(dǎo)率較低的為澤西和藍(lán)鳥，芽誘導(dǎo)率分別為51.7%、43.3%。南高叢藍(lán)莓的布萊登萌芽率較高，莖段接種后7 d開始萌芽。兔眼藍(lán)莓莖段接種后10-14 d，不定芽萌出，燦爛、頂峰、圓藍(lán)、巨豐、巴爾德溫萌芽率較高，分別為88.3%、91.7%

6、、88.3%、80.0%、93.3%，不定芽生長(zhǎng)健壯，葉片較大。莖段誘導(dǎo)率較低的為愛麗絲藍(lán)，僅48.3%。2.2不同藍(lán)莓品種的增殖情況在改良WPM培養(yǎng)基+2 mg/L ZT的增殖培養(yǎng)基中，不同種群藍(lán)莓品種在生長(zhǎng)及增殖過程中表現(xiàn)出較大的差異。部分品種在繼代增殖培養(yǎng)的第1代就表現(xiàn)出良好的增殖性，易形成叢生芽，部分品種需經(jīng)過2-3次繼代，才能增殖。表2中為繼代4次不同藍(lán)莓品種的生長(zhǎng)及增殖情況。在北高叢藍(lán)莓中，伯克利、公爵、北陸的增殖率較高，分別為7.6、6.7和6.5，澤西增殖率低為2.2：南高叢藍(lán)莓中，布萊登增殖率高為7.0，奧尼爾增殖率較低為3.2。在兔眼藍(lán)莓中，頂峰、巨豐和巴爾德溫的增殖率較高

7、，分別為5.7、5.5、6.4，杰兔、梯芙藍(lán)增殖率低，分別為3.3、2.8。北高叢藍(lán)莓組培苗長(zhǎng)勢(shì)中庸或健壯，生長(zhǎng)直立：兔眼藍(lán)莓植株較粗壯、部分存在分枝，葉片大，色綠，節(jié)間短。南高叢藍(lán)莓長(zhǎng)勢(shì)較粗壯、直立。3討論植物離體培養(yǎng)中，外植體的基因型和生理狀態(tài)、培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件等是影響離體形態(tài)發(fā)生的主要因素。不同物種和同一物種的不同基因型，其形態(tài)發(fā)生能力往往有巨大差異。如柑橘類中，甜橙的離體胚胎發(fā)生能力強(qiáng)，而寬皮橘次之，柚類則比較困難。曹霞以翠冠、雪青和西子綠三個(gè)砂梨品種的葉片為外植體誘導(dǎo)不定梢，翠冠的最高再生率是33%，雪青6.25%，西子綠未誘導(dǎo)出不定梢。Yuji等研究了100個(gè)甘藍(lán)型油菜品種子葉外植體對(duì)芽再生的影響，發(fā)現(xiàn)其再生頻率與基因型密切相關(guān)，不同基因型子葉外植體不定芽再生頻率變化為0-97%。Zhang等對(duì)123個(gè)大白菜品種進(jìn)行了比較，除了8個(gè)品種未能得到再生植株外，其余115個(gè)品種都能以不定芽發(fā)生的方式再生植株，再生頻率為2.5%-95%，甘藍(lán)型及其變種較白菜易再生。植物離體培養(yǎng)的基因型依賴性是一個(gè)非常突出的問題。對(duì)于再生能力差的基因型，應(yīng)根據(jù)其具體代謝上的特點(diǎn)來確定相應(yīng)的培養(yǎng)條件。遺傳上或親緣上越相近的培養(yǎng)材料，其形態(tài)發(fā)生的條件要求也越類似。本研究以20個(gè)藍(lán)莓品種為試材，在改良WPM+