冰凍切片技術(shù)原理

1、冷凍切片制作技術(shù),一、冷凍切片的意義 二、恒溫冷凍切片機(jī)的結(jié)構(gòu)與功能 三、冷凍切片組織的取材 四、冷凍切片的制作方法 五、冷凍切片的固定和染色 六、冷凍切片的標(biāo)準(zhǔn)及染色的注意事項(xiàng) 七、冷凍切片機(jī)的使用注意事項(xiàng)及日常維護(hù),一、冷凍切片的意義,1.快速診斷：冷凍切片可稱之為病理科的急診工作，常用于臨床手術(shù)科室快速組織學(xué)診斷，特別是在手術(shù)進(jìn)行當(dāng)中取出病變組織，要求病理醫(yī)師在很短的時(shí)間內(nèi)做出良、惡性的正確的診斷，為臨床醫(yī)師下一步的手術(shù)方案及治療提供指導(dǎo)。 2.顯示組織中脂質(zhì) 脂肪染色和神經(jīng)組織髓鞘的染色等 3.顯示酶活性 主要應(yīng)用于肌肉活檢的檢查 4.免疫熒光的研究,二、恒溫冷凍切片機(jī)的結(jié)構(gòu)與功能,1

2、.結(jié)構(gòu)：恒溫冷凍切片機(jī)主要由冷箱體及切片機(jī)構(gòu)成，具有快速雙重制冷、自動(dòng)除霜、自動(dòng)消毒、負(fù)壓等功能。 2.功能：利用物理降溫的方法將新鮮組織標(biāo)本冷凍使其產(chǎn)生一定的硬度進(jìn)行切片，與石蠟切片相比，冷凍切片不需要脫水處理，因此制片速度快，是為術(shù)中提供快速病理診斷的良好方法。 LEICA CM1850,三、冷凍切片組織的取材,1.標(biāo)本必須新鮮無固定，無液體浸泡； 2.組織塊大小厚薄適宜； 3.組織塊未受擠壓； 4.盡量保持組織的原有形態(tài)； 5.選擇好組織切面； 6.保持組織的清潔； 7.切除不需要的部分，遇有脂肪組織要剔除； 8.組織內(nèi)有異物一定要清除,四、冷凍切片的制作方法,冷凍切片的重要環(huán)節(jié)是溫度。

3、 1.冷凍前將恒溫冷凍切片機(jī)的速凍頭溫度和箱內(nèi)溫度調(diào)整到適宜的切片溫度，一般情況下為-25-18。 2.在標(biāo)本托上涂一層冷凍包埋劑OCT，然后將取材后的新鮮標(biāo)本安放在標(biāo)本冷凍托上并用OCT包埋劑覆蓋標(biāo)本。 3.組織較小或較薄，可先將OCT滴加在標(biāo)本托上，凍成一個(gè)小冷臺(tái)，將組織放在小冷臺(tái)上，再覆蓋OCT冷凍，并用冷凍錘輕輕壓平。 4.標(biāo)本冷凍完成后將標(biāo)本托固定在切片機(jī)的機(jī)頭上，調(diào)整機(jī)頭的位置使其恰好位于切片刀的后方,四、冷凍切片的制作方法,5.以粗切削的方式進(jìn)行標(biāo)本的粗切削至暴露標(biāo)本的最大平面，用毛筆清除機(jī)頭、標(biāo)本托及刀片上的組織碎屑。 6.確認(rèn)切片的厚度，一般610um不等，根據(jù)組織的不同可適

4、當(dāng)調(diào)整切片的厚薄。 7.放下放卷板使其位置恰好與刀片的刀刃完全平行并略突出刀刃。 8.以轉(zhuǎn)動(dòng)大輪推進(jìn)的方式進(jìn)行切片，良好的切片將在放卷板下方形成一張完整平坦無褶的薄片，若切片略有彎曲可用小毛筆輕輕展平。 9.打開放卷板，用載玻片平穩(wěn)的輕壓組織，使其平整的吸附到載玻片上,四、冷凍切片的制作方法,10.也可不使用放卷板，用毛筆輕帶組織下方的白邊（OCT），隨機(jī)器的慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)，用毛筆輕輕從上至下展開組織，使其平坦，組織齊全滿意時(shí)，用毛筆輕輕壓住切片的下方，右手拿載玻片輕輕平穩(wěn)地壓組織，使其平整地吸附在載玻片上，迅速放入固定液，進(jìn)入染色程序。 11.正確地調(diào)整使用冷凍切片機(jī)的放卷板是獲得平展完整冷凍切片

5、的重要手段，放卷板的正確位置是，與切片刀的刀刃平行并略微突出于刀刃,五、冷凍切片的固定和染色,一、冷凍切片的固定、固定液的選擇 1.丙酮液 2.10%中性福爾馬林緩沖液 3.95%酒精 4.乙醚、純酒精等量混合固定液 5.AF液 6.AFA液 可根據(jù)工作要求選擇適合于本單位的固定液,五、冷凍切片的固定和染色,二、冷凍切片染色 1.冷凍切片應(yīng)立即放入固定液中。 2.固定1min左右，水洗。 3.入蘇木精染色2min，水洗。 4.1%鹽酸酒精分化數(shù)秒，水洗。（0.5%氫氧化銨水溶液返藍(lán)數(shù)秒，水洗） 5.伊紅染液20s-1min，水洗。 6.70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇逐級脫水。 7.無水乙醇

6、脫水2次。 8.二甲苯透明兩次。 9.中性樹膠封固,六、冷凍切片的標(biāo)準(zhǔn)及染色的注意事項(xiàng),一、冷凍切片的標(biāo)準(zhǔn) 1.操作正確 2.切片完整 3.厚薄均勻 4.無褶無刀痕 5.組織內(nèi)無冰晶 6.核質(zhì)分明，染色適度 7.組織結(jié)構(gòu)清晰 8.脫水透明潔凈 9.封裱美觀 10.時(shí)間迅速,六、冷凍切片的標(biāo)準(zhǔn)及染色的注意事項(xiàng),二、冷凍切片染色的注意事項(xiàng) 1.提倡使用新鮮蘇木精染液，每天過濾，防止沉渣及結(jié)晶的形成，保證高質(zhì)量的冷凍切片以利診斷。 2.室溫過低時(shí)，影響著色，可適當(dāng)加溫促進(jìn)染色。 3.鹽酸酒精分化應(yīng)適度，顯微鏡下控制，否則易造成核著色不佳，染色質(zhì)不清晰，影響診斷,七、冷凍切片機(jī)的使用注意事項(xiàng)及日常維護(hù),1.切片前，厚度應(yīng)預(yù)先調(diào)制好，刀具提前安放好。 2.刀的角度調(diào)好位置，并多備幾個(gè)冷凍托，以供速凍組織塊使用。 3.切片時(shí)，觀察窗不可打開過大，以防溫度升高