液相色譜柱的選擇和方法開發(fā)

1、液相色譜柱的選擇和方法開發(fā),天津博納艾杰爾科技/agela technologies （us）,內(nèi)容概要,色譜基本概念回顧 色譜柱類型、選擇和方法開發(fā) 制備液相 混合固定相-優(yōu)化復(fù)雜樣品分離的一個(gè)新策略 如何改善強(qiáng)水溶性化合物的保留和分離,色譜基本概念回顧,色譜（chromatography）,色譜原理 色譜分類：氣相/液相和高效液相（hplc）；反相/正相/離子交換/hilic/混合固定相 色譜功能：分析（種類/定量），純化 液相色譜儀器結(jié)構(gòu)及功能：泵，脫氣機(jī)，混合器，進(jìn)樣器（閥），色譜柱，柱溫箱，檢測(cè)器（流通池）,幻燈片制作：wsy18,分離度,rs - resolution n theo

2、retical plate number selectivity k retention factor 拖尾,腐蝕是金屬和周圍環(huán)境發(fā)生化學(xué)或電化學(xué)反應(yīng)而導(dǎo)致的一種破壞性侵蝕。腐蝕是一種化學(xué)過程，而且大多都是電化學(xué)過程，伴隨著氧化-還原反應(yīng)的發(fā)生。 金屬的化學(xué)腐蝕：金屬跟接觸到的物質(zhì)直接發(fā)生化學(xué)反應(yīng)而引起的腐蝕。 金屬的電化學(xué)腐蝕 ：不純的金屬或合金與電解質(zhì)溶液接觸，會(huì)發(fā)生原電池反應(yīng)，比較活潑的金屬失電子被氧化的腐蝕。 腐蝕的本質(zhì)：金屬發(fā)生氧化-還原反應(yīng)。,金屬?gòu)牡V石（金屬氧化物）中提煉出來需要很大的能量，使其處于一個(gè)高能級(jí)狀態(tài)。 熱力學(xué)的一個(gè)規(guī)律是：材料總是趨向于以最低能量狀態(tài)存在。 因此，多

3、數(shù)的金屬處于熱力學(xué)不穩(wěn)定狀態(tài)，具有尋求低能量狀態(tài)的傾向，如形成氧化物或其他化合物。 金屬轉(zhuǎn)化成低能量氧化物的過程就是腐蝕。,幻燈片制作：wsy18,1.separation of compounds a and b,靈敏度,：limit of detection ：limit of quantification 柱效 峰形（拖尾因子）,重現(xiàn)性,分離度（） 保留時(shí)間（，） 選擇性（ ） 柱效（） 靈敏度,色譜柱類型、選擇和方法開發(fā),色譜柱與色譜條件對(duì)色譜性能的影響,分離度 - 選擇性 鍵合類型，基質(zhì)表面特性；流動(dòng)相、溫度 - 柱效 保留體積，粒徑，柱長(zhǎng)，基質(zhì)表面特性；流動(dòng)相， 溫度，上樣量，流速

4、 峰對(duì)稱性 基質(zhì)表面特性，鍵合類型，流動(dòng)相，溫度 保留體積 柱長(zhǎng)，孔隙率，比表面積，基質(zhì)表面特性，鍵合類型；流動(dòng)相，溫度 靈敏度 粒徑，基質(zhì)表面特性，鍵合類型；流動(dòng)相，溫度 穩(wěn)定性和重現(xiàn)性 基質(zhì)表面特性，鍵合類型；流動(dòng)相，溫度 流動(dòng)相 ph，緩沖鹽種類，溶劑；,影響色譜柱性能的主要因素,1、 色譜柱的構(gòu)型 色譜柱內(nèi)徑 色譜柱長(zhǎng)度 2、 固定相柱填料 粒徑 比表面積 孔徑 孔隙率 基質(zhì)表面特性： - 表面活性：硅膠純度、硅羥基的酸性、均勻性和數(shù)量 - 耐堿性 鍵合類型 - 官能團(tuán)、是否封尾 - 鍵合相的保留行為、耐酸性,色譜柱的構(gòu)型對(duì)色譜柱性能的影響,色譜柱的構(gòu)型對(duì)色譜柱性能的影響：長(zhǎng)度和直徑,

5、色譜柱尺寸 對(duì)色譜分離的影響： 短柱 (15-100mm) - 運(yùn)行時(shí)間短, 柱壓低 長(zhǎng)柱 (150-250mm) - 分辨率高, 運(yùn)行時(shí)間長(zhǎng) 窄徑柱 ( 2.1mm) 滿足檢測(cè)器和樣品量限制 寬徑柱 (3-7.8 mm) - 載樣量高，抗污染，壽命 制備柱 (內(nèi)徑 10 mm) 用于純化制備,柱填料對(duì)色譜柱性能的影響,柱填料對(duì)c18色譜柱性能的影響：粒徑,硅膠粒徑和類型對(duì)柱效的影響,d,硅膠粒徑和類型對(duì)壓力的影響,柱填料對(duì)c18色譜柱性能的影響：粒徑ii,目前市場(chǎng)主要可供選擇的填料粒徑 1.7m，1.8m，2.2m 快速液相色譜柱：匹配快速色譜儀 2.7m 多孔殼層：在常規(guī)液相色譜儀上實(shí)現(xiàn)快

6、速分離(halo) 3.0m，3.5m 普通快速分析 5.0m 常規(guī)分析,顆粒越小，柱效越高, 但是耐污染性能下降，柱壓升高.,柱填料對(duì)c18色譜柱性能的影響：比表面積,每克填料的表面積，與粒度，孔徑有關(guān) 比表面積大，保留增加，載樣量增加，平衡時(shí)間增加(梯度洗脫尤為注意) 根據(jù)需要選擇合適的比表面積,柱填料對(duì)c18色譜柱性能的影響：孔徑i,多孔材料的95%以上表面在孔內(nèi)部 樣品分子直徑小于平均孔徑，才能進(jìn)入微粒內(nèi)部 孔徑至少是樣品流體學(xué)直徑的4倍 300孔徑用于：超過50個(gè)氨基酸的肽或25個(gè)殘基的低聚寡核苷酸,樣品分子直徑小于平均孔徑，才能進(jìn)入微粒內(nèi)部,柱填料對(duì)c18色譜柱性能的影響：孔徑ii

7、,由于小孔徑填料比表面積大，小分子的保留值在小孔徑填料通常更大,條件：c8色譜柱，4.6150mm，3.5um， a溶劑，0.1%tfa水溶液； b溶劑，0.1%tfa于80%乙腈水中； 20min梯度，1030%b；60c，1.5ml/min,柱填料對(duì)c18色譜柱性能的影響：硅膠純度i,2.3-二羥基萘,2.7-二羥基萘,tf=1.31,brand w, aq column 5m, 4.6mm150mm,brand z,c18 column 5m, 4.6mm150mm,venusil mp c18 5m, 4.6mm150mm,brand h, c18 column 5m, 4.6mm15

8、0mm,brand u,c18 column 5m, 4.6mm150mm,！,tf=1.42,tf=1.39,tf=1.69,tf=？,流動(dòng)相： 甲醇：水=65：35 流速： 1 ml/min 溫度： 35 檢測(cè)波長(zhǎng)： 230 nm 進(jìn)樣量： 20 l,硅膠純度金屬含量,硅膠基質(zhì)類型及發(fā)展史,type a：原料來源：水玻璃；高金屬含量，高活性，極性化合物容易形成拖尾和死吸附 type b：原料來源：有機(jī)硅烷（四乙氧基硅烷）水解/燒結(jié)/酸洗 雜化及表面雜化 整體柱 殼層柱,柱填料對(duì)c18色譜柱性能的影響：硅膠純度ii,硅膠純度金屬含量,d,固定相對(duì)色譜柱性能的影響：硅羥基的影響,殘余硅羥基的影

9、響 普通硅膠當(dāng)流動(dòng)相的 ph 值大于 4.5-5.0 時(shí)，表面的硅羥基會(huì)帶負(fù)電荷，堿性化合物拖尾。 解決方法 封尾 雙層表面修飾 表面雜化,固定相對(duì)色譜柱性能的影響：殘余硅羥基的影響,封尾 鍵合填料與小硅烷進(jìn)行后續(xù)反應(yīng)，如三甲基氯硅烷，反應(yīng)掉部分殘余硅羥基，以增加表面覆蓋率。 缺點(diǎn)： 不能完全反應(yīng)（仍有50%的硅羥基未被反應(yīng)） 在ph3時(shí)，tms易流失，耐用性，穩(wěn)定性不好,tms,固定相對(duì)色譜柱性能的影響：殘余硅羥基的影響,不同長(zhǎng)度和體積的鍵合相對(duì)表面覆蓋率的影響,固定相對(duì)色譜柱性能的影響：殘余硅羥基的影響,雙層表面修飾 降低表面硅羥基活性，硅膠表面更加均勻,固定相對(duì)色譜柱性能的影響：殘余硅羥

10、基的影響,硅膠雙層表面修飾后 新增加表面層硅羥基活性更低新硅羥基ph=5.2， 普通硅羥基ph約為3.5 更對(duì)稱的峰型，提高柱效，提高靈敏度 硅膠表面更均勻硅膠微晶形成過程中的不光滑表面被覆蓋 重現(xiàn)性更好 表面純度更高硅膠金屬雜質(zhì)被覆蓋 極性化合物保留和分離更好,鍵性化合物峰形對(duì)比,test conditions: column dimension: 4.6 mm x 150mm sample: doxepin, nortriptyline, trimipramine amitriptyline mobile phase: acetonitrile/0.01m sodium phosphate

11、 (ph=6) = 70/30 temperature: 30 oc flow: 1 ml/min detection: uv 254 nm,brand a c18( non-endcapped, ),c18 (non-endcapped, twin-layer,asb c18,zorbax sb c18,saponins extract,4.6x150 mm column, 1% formic acid/meoh= 80/20,固定相對(duì)色譜柱性能的影響：殘余硅羥基的影響,雙層表面修飾 代表產(chǎn)品： venusil mp c18，venusil asb c18，venusil hilic,0.0

12、1 ng/ml pseudoephedrine,agela venusil asb c18, 2.150mm, 5m,brand a c18 2.150mm, 5m,phenomenex luna c18, 2.050mm, 5m,固定相對(duì)色譜柱性能的影響：鍵合類型,a 縱向交聯(lián)：保留和選擇不穩(wěn)定 b 橫向交聯(lián)：寬ph適用，durashell，gemini c 單體鍵合：重現(xiàn)性好，柱效高 d 單體（空間保護(hù)）：低ph穩(wěn)定（zorbax sb，venusil asb） 極性官能團(tuán)嵌合反相固定相 ( zorbax bonus rp, venusil hlp),固定相對(duì)色譜柱性能的影響：基質(zhì)表面特性

13、+鍵合類型 反相鍵合相的保留行為,同一廠家相同硅膠基質(zhì)的反相柱： 保留值隨含碳量的增加而增加 比表面積越大，保留值越大 鍵合碳鏈越長(zhǎng)，保留越大 c18 c8c3c1，長(zhǎng)鏈之間差別不大,反相鍵合相的保留行為,不同廠家色譜柱的 保留值，選擇性與峰型 色譜柱：4.6*150mm，流動(dòng)相：乙腈0.05m磷酸鉀緩沖液，ph3.2(65:35);流速：1ml/min，,拖尾峰,t0（尿嘧啶）,p: 吡啶 l: 苯酚 n: n,n-二甲基苯胺b: 4-丁基苯甲酸 j: 甲苯,固定相對(duì)色譜柱性能的影響： 基質(zhì)表面特性+鍵合類型 鍵合相的穩(wěn)定性,鍵合相的穩(wěn)定性 低ph值，鍵合相流失 高ph值，硅膠溶解 影響色譜

14、柱壽命，方法不重現(xiàn),鍵合類型對(duì)鍵合相穩(wěn)定性影響,低ph值，鍵合相流失,鍵合類型對(duì)鍵合相穩(wěn)定性影響（ii）,空間位阻保護(hù)，延緩鍵合相流失,空間位阻鍵合代表產(chǎn)品： venusil asb c18 zorbax sb c18,固定相對(duì)色譜柱性能的影響： 鍵合硅膠的穩(wěn)定性,高ph值，硅膠基質(zhì)溶解,ph9時(shí)，色譜柱的穩(wěn)定性,固定相對(duì)色譜柱性能的影響： 鍵合硅膠的穩(wěn)定性,碳雜化，延硅膠緩高ph值水解,表面碳雜化 agela durashell rp phenomenex gemini,雜化顆粒： waters xterra,表面碳雜化示意圖,ph=12 條件下的穩(wěn)定性,4 amines, acn/ 1%

15、ammonia aqueous= 25%:75%, 40oc, 4.6 x 150 mm, 5um,1h,200 h,總結(jié)：如何選擇色譜柱和相應(yīng)的色譜條件,了解目標(biāo)化合物的性質(zhì)：結(jié)構(gòu)（官能團(tuán)）、pka、分子量、濃度范圍、溶解度、極性 了解色譜柱的性質(zhì) 粒徑，孔徑，比表面積 保留強(qiáng)度和柱效；抗污染性 基質(zhì)表面特性，鍵合類型保留強(qiáng)度，選擇性，柱效，對(duì)稱性，靈敏度，穩(wěn)定性和重現(xiàn)性 選擇相應(yīng)的色譜條件,色譜柱選擇（）,替代：粒徑，比表面，基質(zhì)表面特性，鍵合類型相似 新方法開發(fā)： 粒徑：2um vs 3um vs 5um （分析時(shí)間，靈敏度，儀器，價(jià)格，壽命） 內(nèi)徑柱長(zhǎng)：內(nèi)徑3mm vs 4.6 vs

16、7.8（對(duì)分離影響不大，成本）；柱長(zhǎng)與粒徑相關(guān) 比表面：（低比表面耐污染，高比表面利于分離） 孔徑：在滿足比表面前提下大孔徑較好 硅膠基質(zhì)表面特性：）盡可能使用高純硅膠；）盡可能使用低酸性硅膠；）當(dāng)流動(dòng)相盡可能使用表面雜化；）使用多硅羥基殘留，可加強(qiáng)對(duì)于極性化合物保留或削弱對(duì)于非極性化合物保留 鍵合類型：取決于選擇性和流動(dòng)相要求；具有一定極性的（）可以作為首選嘗試；耐酸：選擇；耐堿：durashell 封尾與不封尾：封尾削弱硅羥基影響；不封尾：提高硅羥基影響，增強(qiáng)極性物質(zhì)保留，降低柱流失。,乙腈水,乙腈水,乙腈水,kh2po4 ph=4.2,混合固定相-優(yōu)化復(fù)雜樣品分離的一個(gè)新策略,混合固定相

17、的意義,系統(tǒng)化的改變選擇性，便于優(yōu)化分離度；使難以在同一固定相上分析的強(qiáng)極性和非極性化合物得以解決 降低離子交換柱的保留強(qiáng)度，降低緩沖鹽濃度，從而使離子交換柱可以與質(zhì)譜檢測(cè)器相匹配,混合相比例與保留時(shí)間曲線,a,b,c,色譜條件 acn : 50 mm kh2po4 = 30:70; 1.5ml/min; 240 nm; 5 um, 300 a; 4.6250; 2 ul; room temp.; 樣品： phenol and melamine,通過混合柱改善分離度,scx,scx : asb c8 = 9 : 1 (b0014),hplc conditions： acn : 50 mm kh

18、2po4 = 30 : 70; 1.5 ml/min; 35 ; 20 ul; melamine: 2 ppm; column: 4.6 250 mm;,降低緩沖鹽濃度（倍）以用于,sample melamine (100ppm) lc conditions 1 acn : 50 mm kh2po4 = 30 : 70;1.5ml/min; 240nm; 5ul; 5um, 300a, 4.6250mm lc conditions 2 acn : 10 mm kh2po4 = 80 : 20;1.5ml/min; 240nm; 5ul; 5um, 300a, 4.6250mm fig. a w

19、as tested under conditions 1 fig. b and c were tested under conditions 2,a,b,c,spe procedures fig. a lc condition column: venusil as-t c18 (scx/c18）2.1 150mm; 5 um, 300 mobile phase： acn : buffer = 50:50; buffer:10mm nh4ac, hac adjust ph to 3.0 240nm, 0.2ml/min, 10 ul mass condition esi，5kv; capilla

20、ry temp 300, capillary voltage 15v; n2 flow 35 arb; positive ion detection scan mode: tic (ms), tic (ms/ms); range (m/z) 50140,a,標(biāo)準(zhǔn)曲線,precision: rsd=2.83% (n=5) reproducibility：rsd=4.45% (n=5) lod: 0.002ug/ml loq: 0.01ug/ml recovery: 89.7% rsd=7.3% (n=9),空白樣品,三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品,三聚氰胺添加樣品,如何改善強(qiáng)水溶性化合物的保留和分離,改進(jìn)水溶性

21、化合物的保留和分離,使用極性反相色譜柱，高水相流動(dòng)相；調(diào)整ph值抑制分析物的離子化。 使用離子對(duì)試劑，選擇低比表面、短鏈鍵合相 使用hilic分離技術(shù) 使用離子交換/反相混合固定相,2，-0-甲基-腺嘌呤核苷hplc方法,rt樣品峰=18.902min rt主雜質(zhì)峰=21.024min 主峰與后雜峰 （rt=20.634min）的分離度r=7.81, 主峰后雜峰（rt=20.634min）與主要雜質(zhì)的分離度r=1.70,色譜柱：mp c18 5um 100 4.6*250mm; 波 長(zhǎng)：260nm; 柱 溫：30; 流 速：1.0ml/min 流動(dòng)相：流動(dòng)相a：0.63g甲酸銨溶解于900ml

22、水中，并用甲酸調(diào)ph=3.00，再加水使溶液為1l,過濾即得； 流動(dòng)相b：乙腈 樣 品：流動(dòng)相a溶解，待分離樣品1mg/ml；進(jìn) 樣：5ul 梯度表：,阿奇霉素有關(guān)物質(zhì)檢測(cè),空白,藥典方法,樣品，100%水,次黃嘌呤有關(guān)物質(zhì)分析,色譜柱：mp c18 5um 100 4.6*250mm 流動(dòng)相：0.1%磷酸氫二鈉溶液（磷酸調(diào)節(jié)ph值至7.50） 流 速：1.0ml/min 柱 溫：室溫 波 長(zhǎng)：254nm 樣 品：樣品2.0mg/ml（水溶解），對(duì)照品0.2408mg/ml（客戶原液） 進(jìn) 樣：5ul,venusil hilic (丙酰胺鍵合相）,鍵合相，原理和目的,丙酰胺鍵合硅膠 已腈水流動(dòng)

23、相中主要依靠氫鍵合和電子極化作用，對(duì)于多羥基，多氨基，酰胺類和有機(jī)酸有很好的保留和分離 在弱極性流動(dòng)相中，對(duì)于極性化合物的保留與相似或略低，有利于極性化合物的洗脫 水溶液中穩(wěn)定性明顯優(yōu)于氨基柱或純硅膠柱,正相條件下與氨基柱比較,test in traditional normal phase mode columns: 5um, 4.6 x 150 mm mobile phase: chloroethane/methanol/water=91.8:8:0.2 sample: toluene, nitrobenzene, 4- bromoaniline acetate, 3-nitroanili

24、ne,unisol amide less polar,venusil nh2,分離模式,n-aceto uracil,uracil,column: venusil silica, 5um, 4.6 x150 mm mobile phase: 10 mmol sodium phosphate(ph7.0)/acn= 35/65 temperature: ambient detection: uv 254 nm,分離模式,n-aceto uracil,uracil,column: venusil hilic, 5um, 4.6 x150 mm mobile phase: 10 mmol sodiu

25、m phosphate(ph7.0)/acn= 35/65 temperature: ambient detection: uv 254 nm,venusil hilic (丙酰胺固定相）,n-aceto uracil,ganciclovir,ganciclovir,column: venusil hilic, 5um, 4.6 x150 mm mobile phase: 10 mmol sodium phosphate(ph7.0)/acn= 35/65 temperature: ambient detection: uv 254 nm,水溶性維生素分離,time,samples: vb1,

26、 vb6, vc, vb2 hplc conditions column: venusil hilic 4.6 x 150 mm, 5um mobile phase：0.1%tfa:acn = 90:10 det: 280nm; flow: 1.0ml/min; temp: 30； inj: 2 l, column, 5m, 4.6mm150mm part no.: 951505-0,brand p , nh2 column, 5m, 4.6150mm,brand w silica column, 5m, 4.6150mm,mobile phase:a: 0.1% tfa in water ；

27、b: 0.1% tfa in acetonitrile a:b = 90:10 flow rate:1 ml/min temperature:30 detection:uv280 nm sample: vb1+vb6+vc+vb2,選擇性比較,vb1+vb6+vc+vb2,vc+vb6+vb1+vb2,vb1+vb6+vb2+vc,穩(wěn)定性比較 (aging: ph=7, 20 mm phosphate buffer/meoh=40/60; 100h),100h,venusil hilic,silica,vb1,vb2,vb1,vc,vb2,vb1,vc,vb6,vb2,vb1,vb2,vb6,

28、vb1,vb2,vb1,vb2,35 h,100h,nh2,decitabine and impurity analysis,venusil hilic 4.6150mm，5m，acn： h2o964，1ml/min， uv244nm，room temp.,analysis of acarbose and impurity,acn : kh2po4(4.4 mmol/l) -na2hpo4(2.0 mmol/l) = 70 : 30; 1.5 ml/min; 35 ; 210 nm; venusil hilic，5 um，100 ，4.6 150 mm,separation of shikim

29、ic acid (3,4,5, trihydroxy-1-cyclohexene-1-carboxylic acid,venusil hilic 4.6 x 250 mm, 5um; acn/1% formic acid 90-60% in 20 min, ambient temperature, 1ml/min, uv210 nm,comparison: validamycin,atlantis-c18( aq), 4.6 x 250 mm, tfa 1%,venusil hilic , 4.6 x 250 mm, acn/water 85-40% in 30 min, uv 210nm,博

30、納艾杰爾科技及其產(chǎn)品介紹汪群杰,who is america-gel-asia technologies?,2004成立于美國(guó)特拉華州，開發(fā)和生產(chǎn)液相色譜填料和色譜柱 2005年成立北京艾杰爾科技有限公司，負(fù)責(zé)艾杰爾科技產(chǎn)品的中國(guó)和亞洲市場(chǎng)開發(fā) 2007年在天津?yàn)I海新區(qū)成立博納艾杰爾科技有限公司，投資近2000萬，建立中國(guó)最大色譜分離材料研發(fā)和生產(chǎn)基地；產(chǎn)品擴(kuò)充到5大類，上千個(gè)規(guī)格 2008銷售額3400萬；2009年目標(biāo)5000萬；,核心業(yè)務(wù),分離材料,固相萃取,解決方案,固相萃取和色譜 分離純化設(shè)備,創(chuàng)新成就夢(mèng)想!,全球最大色譜柱研發(fā)團(tuán)隊(duì)之一：歸國(guó)博士4名；碩士12名，本科11名 開發(fā)色譜

31、相關(guān)設(shè)備和材料5大類（液相色譜柱、固相萃取柱、快速純化柱、全自動(dòng)制備色譜儀、固相萃取儀），近百個(gè)系列，上千個(gè)規(guī)格的商業(yè)化產(chǎn)品；申報(bào)專利11個(gè)（其中2個(gè)已獲授權(quán)） 2006年10月成功主標(biāo)科技部十一五重大支撐項(xiàng)目項(xiàng)目中的課題四“高性能色譜填料和色譜柱的研制”；成功參標(biāo)科技部十一五重大項(xiàng)目科研試劑項(xiàng)目中“固相萃取材料的研制與開發(fā)” 入圍天津市2009年15個(gè)自主創(chuàng)新重大專項(xiàng),不斷完善的質(zhì)量保證體系,充分的技術(shù)投入以打造堅(jiān)實(shí)的技術(shù)基礎(chǔ) 質(zhì)量方針：質(zhì)量第一、全員參與；滿足客戶，不斷進(jìn)取 全方位質(zhì)量控制體系：研發(fā)、原材料供應(yīng)、生產(chǎn)工藝、質(zhì)量檢驗(yàn)、跟蹤/反饋 2007年10月成功獲得iso9001質(zhì)量認(rèn)證

32、 - 2007年分別通過美國(guó)第一大和 第二大集成供貨商thermo fisher 和vwr公司的現(xiàn)場(chǎng)考核,全球一體化的研發(fā)、生產(chǎn)、銷售和服務(wù),公司分布： newark, delaware, usa：研發(fā)和銷售中心 天津：2600m2 研發(fā)、生產(chǎn)和物流中心 國(guó)內(nèi)辦事處：北京、上海、廣州、杭州、南京、濟(jì)南、鄭州、沈陽 全球銷售渠道和客戶： - 26 代理商遍布全球五大洲，包括美國(guó)、加拿大、日本、法國(guó)、德國(guó)、印度、韓國(guó)、泰國(guó)、巴西、南非等。 - vwr （全球第二大實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和耗材供應(yīng)商）的6大色譜產(chǎn)品供應(yīng)商之一 - 全球客戶包括著名儀器廠家thermo；著名制藥企業(yè) 默克（默沙東）、莉萊、amge

33、n、sanofi、shering-plough； 著名制藥技術(shù)服務(wù)公司 考文斯、xenobiotek、qps、frontage labs。,客戶評(píng)價(jià)merck,“the asb c18 column outperformed any other column i could get my hands on and i was able to handle the hundreds of comt compounds i was presented with.” mcclain ray t., ph.d merck plates:3224,after column washing and re-

34、equilibrium in 100% water (0.1% formic acid); plates:3045,after 500 sample injections; plates:2810,sample: uridine of calf blood plasm (dilute 20 times with 0.1% formic acid) injection: 1ul column: unisol c18 2.150mm,5m flow:0.3ml/min mobile phase: 0.1% formic acid solution (100% aqueous phase) injection frequency：500 /8min, after 500 injection, wash with methanol /0.1% formic acid solution =50/50 for 30mins，column temperature 40 ; rinse with 95%meoh