花粉生活力萌發(fā)試驗(yàn)[沐風(fēng)書(shū)屋]

1、實(shí)驗(yàn)二 花粉生活力的測(cè)定懸滴培養(yǎng)法一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模赫莆樟私饣ǚ凵盍y(cè)定的意義和方法。二、 實(shí)驗(yàn)材料：二月蘭花粉三、 實(shí)驗(yàn)儀器及藥品：凹玻片、蓋玻片、解剖針、鑷子、紗布、標(biāo)簽、鉛筆、顯微鏡、恒溫箱、蔗糖、蒸餾水、硼酸、凡士林。四、 實(shí)驗(yàn)原理：花粉是植物自然授粉和人工雜交的主要物質(zhì)基礎(chǔ)，花粉生活力的大小是保證雜交成功的關(guān)鍵。在有性雜交育種中，常因父母本花期的不同，作為父本的花粉必須經(jīng)過(guò)貯藏直到母本植株開(kāi)花時(shí)再用于授粉（花粉在低溫02、干燥、黑暗等條件下代謝強(qiáng)度降低?；ǚ圪A藏的原理就是創(chuàng)造代謝強(qiáng)度低的環(huán)境，以延長(zhǎng)花粉的壽命）；或者雙親不在同一個(gè)地方，必須由外地郵寄花粉供應(yīng)。經(jīng)過(guò)貯藏或外地郵寄的花粉

2、是否已經(jīng)喪失生活力，必須經(jīng)過(guò)測(cè)定才能確定。 鑒定花粉生活力的方法主要有四種：一是將待測(cè)花粉直接授粉，然后統(tǒng)計(jì)結(jié)實(shí)率和結(jié)子數(shù)。此法的缺點(diǎn)是需要的時(shí)間較長(zhǎng)，且實(shí)驗(yàn)的結(jié)果易受氣候條件的影響。二是將待測(cè)花粉授到柱頭上，隔一定時(shí)間切下柱頭，在顯微鏡下檢查花粉的萌發(fā)情況。根據(jù)萌發(fā)率的高低來(lái)鑒定花粉的生活力。三是在培養(yǎng)基上進(jìn)行花粉的人工萌發(fā)，檢查待測(cè)花粉萌發(fā)率的高低。后兩種方法都是根據(jù)花粉的萌發(fā)率來(lái)反映生活力的高低，有一定的參考價(jià)值。但是萌發(fā)的不一定都能受精，特別是人工萌發(fā)還受許多條件的限制，所以也只有相對(duì)的可靠性。四是用染色方法來(lái)鑒定花粉的生活力。其原理是在活的花粉內(nèi)有過(guò)氧化氫酶的存在，它可以促進(jìn)過(guò)氧化物

3、（如H2O2）放氧分解。這些剛被放出的活性氧很容易使還原劑氧化，常用無(wú)色聯(lián)苯胺、萘酚等還原劑做指示劑，這些還原劑被氧化后表現(xiàn)紅色或玫瑰紅色。如果花粉是活的，那么會(huì)很快被染成紅色或玫瑰紅色，如果花粉是死的，則這一反應(yīng)遲遲不能進(jìn)行，花粉保持原色。此法優(yōu)點(diǎn)是比較快捷，但是比較間接。本試驗(yàn)采用懸滴培養(yǎng)法鑒定花粉生活力。五、 實(shí)驗(yàn)步驟：1. 配培養(yǎng)液：用蒸餾水和蔗糖分別配成5、10%、15的蔗糖溶液，并在各培養(yǎng)液中加少量硼酸。2. 取盛開(kāi)的正在散粉的二月蘭花朵。3. 播花粉：在凹玻片的凹點(diǎn)滴一滴清水。在蓋玻片中央滴一滴培養(yǎng)液，用鑷子輕輕夾取二月蘭的花藥，在培養(yǎng)液中央輕輕蘸一下，使花粉均勻的分散在培養(yǎng)液的

4、球面上。在蓋玻片的四角涂抹少量的凡士林，用鑷子夾住蓋玻片在上提的過(guò)程中迅速把它翻轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)，小心放在凹玻片上，使培養(yǎng)液處在蓋玻片和凹點(diǎn)形成的小密室中。每個(gè)凹玻片分別做蔗糖溶液的三個(gè)濃度，并用蒸餾水做對(duì)照。4. 培養(yǎng)：做好的凹玻片上貼好標(biāo)簽，注明花粉種類、培養(yǎng)液的濃度以及時(shí)間，然后小心放到鋪有濕潤(rùn)濾紙的培養(yǎng)皿中，放到2224的恒溫箱中培養(yǎng)5h。5. 觀察：從恒溫箱中取出凹玻片，在低倍鏡下隨機(jī)觀察三個(gè)視野，計(jì)算花粉的萌發(fā)率。以花粉管長(zhǎng)度達(dá)到花粉粒徑的2倍及以上視為萌發(fā)。六、 結(jié)果分析1. 分析花粉萌發(fā)率高或低的原因。2. 本實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵性步驟總結(jié)及實(shí)驗(yàn)中所存在問(wèn)題的討論。七、 作業(yè)1. 繪制一幅花粉粒萌發(fā)

5、形態(tài)圖。2. 花粉生活力測(cè)定在雜交育種中的重要意義？測(cè)定花粉生活力的方法有哪些？ 一般 2核花粉粒較3核花粉粒高，對(duì)不適宜環(huán)境 （溫度、濕度、輻射化學(xué)處理）抵抗力強(qiáng)。 原因：1、營(yíng)養(yǎng)消耗 2、代謝旺盛 3、外壁薄等 花粉生活力的研究對(duì)于農(nóng)業(yè)、林業(yè)來(lái)說(shuō)，具有很重要的理論及生產(chǎn)實(shí)踐意義。它為植物的育種、培育、栽培，為進(jìn)行人工授粉和雜交授粉，提供理論依據(jù)。 一般來(lái)講，花粉生活力的長(zhǎng)短，即決定于植物的遺傳性，又受環(huán)境因素的影響。 一般情況下，花粉生活力的長(zhǎng)短依種而異，大多數(shù)植物的花粉只能活幾個(gè)小時(shí)、幾天或幾個(gè)星期。 一般來(lái)看：木本植物草本植物 2胞花粉3胞花粉 影響花粉生活力的主要環(huán)境因素有：溫度、濕

6、度及空氣。 現(xiàn)在延長(zhǎng)花粉生活力的措施主要有：超低溫（-192的液態(tài)空氣，-196的液態(tài)氮）、真空、降低氧分壓、快速冷凍干燥等方法貯存。 影響花粉粒生活的因素主要一般低溫（ 150c），低濕（相對(duì)濕度20/100-50/100）低氧。正常情況，液態(tài)氮進(jìn)行超低溫保存，如：水稻10 0C，85/100的濕度 24小時(shí)；玉米50C 90/100的濕度89天。但禾本科要求高濕。研究花粉儲(chǔ)藏對(duì)解決花期不遇問(wèn)題相當(dāng)重要。：()植物盛花期采集發(fā)育良好的花粉；()將花粉干燥至適宜貯藏的含水量，封裝在耐低溫容器內(nèi)；()經(jīng)預(yù)冷處理或直接置于低溫、超低溫條件下貯藏；()根據(jù)需要，隨時(shí)取出封存花粉的容器進(jìn)行緩慢或快速升

7、溫解凍，使花粉復(fù)蘇；()采用花粉染色法、萌發(fā)法、授粉結(jié)實(shí)法鑒定花粉生活力；()具有生活力的花粉用于育種。實(shí)驗(yàn)十七 花粉活力的測(cè)定在作物雜交育種、作物結(jié)實(shí)機(jī)理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力的鑒定。掌握花粉活力快速測(cè)定的方法，是進(jìn)行雄性不育株的選育、雜交技術(shù)的改良以及揭示內(nèi)外因素對(duì)花粉育性和結(jié)實(shí)率影響的基礎(chǔ)。一、花粉萌發(fā)測(cè)定法【原理】正常的成熟花粉具有較強(qiáng)的活力，在適宜的培養(yǎng)條件下便能萌發(fā)和生長(zhǎng)，在顯微鏡下可直接觀察計(jì)算其萌發(fā)率，以確定其活力?！酒鞑呐c用具】載玻片；顯微鏡；玻棒；恒溫箱；培養(yǎng)皿；濾紙?！驹噭颗囵B(yǎng)基(10蔗糖，10MgL硼酸，05的瓊脂)：稱10g蔗糖、1Mg硼酸、05g瓊脂與

8、90Ml水放入燒杯中，在100水浴中溶化，冷卻后加水至100Ml備用?！痉椒ā?.將培養(yǎng)基熔化后，用玻棒蘸少許，涂布在載玻片上，放入墊有濕潤(rùn)試紙的培養(yǎng)皿中，保濕備用。2.采集絲瓜、南瓜或其他葫蘆科植物剛開(kāi)放或?qū)⒁_(kāi)放的成熟花朵，將花粉灑落在涂有培養(yǎng)基的載玻片上，然后將載玻片放置于墊有濕濾紙的培養(yǎng)皿中，在25左右的恒溫箱(或室溫20條件下)中孵育，510Min后在顯微鏡下檢查5個(gè)視野，統(tǒng)計(jì)其萌發(fā)率?！咀⒁馐马?xiàng)】1.不同種類植物的花粉萌發(fā)所需溫度、蔗糖和硼酸濃度不同，應(yīng)依植物種類而改變培養(yǎng)條件。2.此法也可用于觀察花粉管在培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)速度以及不同蔗糖濃度、離體時(shí)間、環(huán)境條件等因素對(duì)花粉活力的影響

9、。3.不是所有植物的花粉都能在此培養(yǎng)基上萌發(fā)，本法適用于易于萌發(fā)的葫蘆科等植物花粉活力的測(cè)定。二、碘碘化鉀染色測(cè)定法【原理】多數(shù)植物正常的成熟花粉粒呈球形，積累較多的淀粉，I2-KI溶液可將其染成藍(lán)色。發(fā)育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或積累淀粉較少，I2-KI溶液染色呈黃褐色。因此，可用I2-KI溶液染色來(lái)測(cè)定花粉活力。【器材與用具】顯微鏡；載玻片與蓋玻片；鑷子；棕色試劑瓶；燒杯；量筒；天平?！驹噭縄2-KI溶液：取2gKI溶于510Ml蒸餾水中，加入1g I2，待完全溶解后，再加蒸餾水300Ml。貯于棕色瓶中備用?！痉椒ā坎杉?、小麥或玉米可育和不育植株的成熟花藥，取一花藥于載玻片上

10、，加1滴蒸餾水，用鑷子將花藥搗碎，使花粉粒釋放，再加12滴I2-KI溶液，蓋上蓋玻片，在顯微鏡下觀察。凡是被染成藍(lán)色的為含有淀粉的活力較強(qiáng)的花粉粒，呈黃褐色的為發(fā)育不良的花粉粒。觀察23張片子，每片取5個(gè)視野，統(tǒng)計(jì)花粉的染色率，以染色率表示花粉的育性?！咀⒁馐马?xiàng)】此法不能準(zhǔn)確表示花粉的活力，也不適用于研究某一處理對(duì)花粉活力的影響。因?yàn)槿似谕嘶幕ǚ垡延械矸鄯e累，遇碘呈藍(lán)色反應(yīng)。另外，含有淀粉而被殺死的花粉粒遇I2-KI也呈藍(lán)色。三、氯化三苯基四氮唑(TTC)法【原理】具有活力的花粉呼吸作用較強(qiáng)，其產(chǎn)生的NADH2或NADPH2可將無(wú)色的TTC(2，3，5-氯化三苯基四氮唑)還原成紅色的TT（三苯基甲）而使其本身著色，無(wú)活力的花粉呼吸作用較弱，TTC的顏色變化不明顯，故可根據(jù)花粉吸收TTC后的顏色變化判斷花粉的生活力?！酒鞑呐c用具】顯微鏡；載玻片與蓋玻片；鑷子；恒溫箱；棕色試劑瓶；燒杯；量筒；天平?！驹噭?5TTC溶液：稱05g TTC放入燒杯中，加入少許95酒精使其溶解，然后用蒸餾水稀釋至100Ml。溶液避光保存，若發(fā)紅時(shí)，則不能再用?！痉椒ā坎杉魏沃参锏幕ǚ?，取少許放在干潔的載玻