腦心同治理論與丹紅注射液研究

1、 萬(wàn)海同 二級(jí)教授 首席教授 博導(dǎo) 所長(zhǎng) 院長(zhǎng) n 國(guó)家百千萬(wàn)人才工程專(zhuān)家國(guó)家百千萬(wàn)人才工程專(zhuān)家 n 享受?chē)?guó)務(wù)院政府津貼人員享受?chē)?guó)務(wù)院政府津貼人員 n 國(guó)家中醫(yī)藥管理局國(guó)家中醫(yī)藥管理局“十二五十二五”重點(diǎn)學(xué)科（中醫(yī)工程學(xué)）重點(diǎn)學(xué)科（中醫(yī)工程學(xué)） 帶頭人帶頭人 n 國(guó)家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)臨床基礎(chǔ)重點(diǎn)學(xué)科國(guó)家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)臨床基礎(chǔ)重點(diǎn)學(xué)科 帶頭人帶頭人 n 浙江省高校腦血管病創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)浙江省高校腦血管病創(chuàng)新團(tuán)隊(duì) 負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)人 n 浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)腦心同治專(zhuān)業(yè)委員會(huì)浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)腦心同治專(zhuān)業(yè)委員會(huì) 主任委員主任委員 n 浙江省中西醫(yī)結(jié)合腦病重點(diǎn)學(xué)科浙江省中西醫(yī)結(jié)合腦病重點(diǎn)學(xué)科 負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)人

2、n 浙江中醫(yī)藥大學(xué)心腦血管疾病研究所浙江中醫(yī)藥大學(xué)心腦血管疾病研究所 所長(zhǎng)所長(zhǎng) n 浙江中醫(yī)藥大學(xué)生物工程學(xué)院浙江中醫(yī)藥大學(xué)生物工程學(xué)院 院長(zhǎng)院長(zhǎng) n 浙江省中醫(yī)藥重點(diǎn)學(xué)科（中藥藥物代謝動(dòng)力學(xué)）浙江省中醫(yī)藥重點(diǎn)學(xué)科（中藥藥物代謝動(dòng)力學(xué)） 帶頭人帶頭人 n 中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)中藥制劑分會(huì)中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)中藥制劑分會(huì) 副主任副主任 n 主要內(nèi)容 三三 二二 一一 心腦血管疾病的防治現(xiàn)狀心腦血管疾病的防治現(xiàn)狀 心腦血管疾病的防治現(xiàn)狀心腦血管疾病的防治現(xiàn)狀 一、心一、心腦血管病是一復(fù)雜、難治性疾病，對(duì)人類(lèi)危害嚴(yán)重腦血管病是一復(fù)雜、難治性疾病，對(duì)人類(lèi)危害嚴(yán)重 防治腦病已成為社會(huì)和醫(yī)學(xué)界廣泛關(guān)注的重要課題防治腦

3、病已成為社會(huì)和醫(yī)學(xué)界廣泛關(guān)注的重要課題 死亡率居高不下死亡率居高不下 世界范圍世界范圍： 死于心腦血管病死于心腦血管病 1500萬(wàn)人萬(wàn)人/年；年； 占全球死亡人數(shù)的占全球死亡人數(shù)的 三分之一至二分之一；三分之一至二分之一； 是危害人類(lèi)最大疾病是危害人類(lèi)最大疾病。 中國(guó)：中國(guó)： 死于心腦血管病死于心腦血管病 每天有每天有7000人，人， 每每12秒鐘就有秒鐘就有1人；人； 首次發(fā)年齡，首次發(fā)年齡，30%以以 上在上在60歲之前。歲之前。 我國(guó)心腦血管疾病患者已經(jīng)超過(guò)2.7億人！ 我國(guó)每年死于心腦血管疾病300萬(wàn)人！ n幸存下來(lái)的患者：幸存下來(lái)的患者： n75%75%不同程度不同程度喪失喪失 勞動(dòng)

4、能力；勞動(dòng)能力； n50%50%以上的以上的腦血管腦血管 意外意外幸存者生活不幸存者生活不 能完全自理；能完全自理； n40%40%重殘。重殘。 n我國(guó)我國(guó)腦中風(fēng)腦中風(fēng)病人出院病人出院 后第一年的復(fù)發(fā)率是后第一年的復(fù)發(fā)率是 30%，第五年的復(fù)發(fā)，第五年的復(fù)發(fā) 率高達(dá)率高達(dá)59%； n而二級(jí)預(yù)防做得較好而二級(jí)預(yù)防做得較好 的的美國(guó)僅為美國(guó)僅為10%。 各種危險(xiǎn)因素居高不下各種危險(xiǎn)因素居高不下 中國(guó)目前總共有：中國(guó)目前總共有： 1.6億高血壓患者；億高血壓患者； 6000萬(wàn)糖尿病患者；萬(wàn)糖尿病患者； 1.6億人群血脂異常；億人群血脂異常； 2億人體重超標(biāo)；億人體重超標(biāo)； 6000萬(wàn)人肥胖；萬(wàn)人肥胖

5、； 還有大量煙民、酒客還有大量煙民、酒客 更令人憂慮：更令人憂慮： 城鄉(xiāng)差別不大；城鄉(xiāng)差別不大； 中年人與老年人中年人與老年人 患病率接近；患病率接近； 中風(fēng)與心肌梗塞、中風(fēng)與心肌梗塞、 心力衰竭常伴隨發(fā)心力衰竭常伴隨發(fā) 生。生。 二、抗血栓治療成為西醫(yī)學(xué)治療動(dòng)脈粥 樣硬化、冠心病、腦梗死治療的重要基石 n 隨著心腦缺血性血管疾病發(fā)生率增加，越來(lái)越多患者需要長(zhǎng)期應(yīng)用隨著心腦缺血性血管疾病發(fā)生率增加，越來(lái)越多患者需要長(zhǎng)期應(yīng)用 抗血栓藥物，臨床常用抗凝藥物為華法林，抗血栓藥物多為氯吡格雷抗血栓藥物，臨床常用抗凝藥物為華法林，抗血栓藥物多為氯吡格雷 及阿司匹林等。及阿司匹林等。 n 尤其是抗血小板聚

6、集藥已成為心腦血管疾病常規(guī)治療。尤其是抗血小板聚集藥已成為心腦血管疾病常規(guī)治療。 三、西醫(yī)學(xué)對(duì)腦梗死內(nèi)科治療仍是抗栓、溶栓等，有一定療效 ，但也有并發(fā)癥等 溶栓溶栓 降纖降纖 血栓、栓子血栓、栓子 血管堵塞血管堵塞 缺血損傷缺血損傷 抗血栓抗血栓 迅速?gòu)?fù)流迅速?gòu)?fù)流 腦保護(hù)腦保護(hù) 減慢缺血級(jí)聯(lián)反應(yīng)減慢缺血級(jí)聯(lián)反應(yīng) 限制再損傷限制再損傷 易致易致出血性梗死出血性梗死 并發(fā)癥并發(fā)癥 再閉塞再閉塞 不足之處不足之處 不能改善不能改善 半暗區(qū)血供半暗區(qū)血供 抗血小板藥物作用機(jī)制圖 偱證醫(yī)學(xué)新證據(jù)表明： 抗血栓西藥療效欠佳，并認(rèn)為抗血小板西藥是一把雙刃劍：在降低心抗血栓西藥療效欠佳，并認(rèn)為抗血小板西藥是一

7、把雙刃劍：在降低心 腦血管不良事件的同時(shí)，許多抗血小板聚集西藥也帶來(lái)了出血并發(fā)癥。腦血管不良事件的同時(shí)，許多抗血小板聚集西藥也帶來(lái)了出血并發(fā)癥。 抗血栓藥物主要分：抗血小板聚集藥、抗凝血藥、溶 血栓藥 主要副作用： 口服抗血栓藥物引起顱內(nèi)出血的發(fā) 生率在9-13，死亡率超過(guò)50 抗凝溶栓對(duì)已形成血栓無(wú)直接溶栓 作用，且溶栓易致出血性梗死(腦出血 6.4%-19.8%，腦死亡率50%）和再閉 塞等危險(xiǎn) 阿司匹林藥物抵抗率達(dá)5.5%-61% 目前臨床上還缺少療效滿意的西藥目前臨床上還缺少療效滿意的西藥, 通常采用中西醫(yī)結(jié)合的方法通常采用中西醫(yī)結(jié)合的方法 三、步長(zhǎng)腦心通膠囊、丹紅注射液等三、步長(zhǎng)腦心

8、通膠囊、丹紅注射液等 活血化瘀、或益氣活血中藥已廣泛用于心活血化瘀、或益氣活血中藥已廣泛用于心 腦血管疾病，如缺血性心臟病、缺血性中腦血管疾病，如缺血性心臟病、缺血性中 風(fēng)等）及血栓性疾病等，具有較好療效。風(fēng)等）及血栓性疾病等，具有較好療效。 n “天人合一天人合一”的的整體觀整體觀 n “因時(shí)因地因人因時(shí)因地因人”辨證施治辨證施治 n 激發(fā)人體自身激發(fā)人體自身抗御疾病抗御疾病的特點(diǎn)的特點(diǎn) 中醫(yī)藥優(yōu)勢(shì)中醫(yī)藥優(yōu)勢(shì) 二、腦心同治理論的依據(jù) 中風(fēng)（腦卒中）胸痹（冠心?。?氣虛血瘀證 證屬 益氣活血 化瘀通絡(luò) 治則 證同治則同 異病同治 趙步長(zhǎng)教授認(rèn)為 腦心同治理論對(duì)中風(fēng)、胸痹的認(rèn)識(shí)腦心同治理論對(duì)中風(fēng)

9、、胸痹的認(rèn)識(shí)腦心同治理論的機(jī)制研究腦心同治理論的機(jī)制研究 氣虛、血瘀、痰濁、絡(luò)阻 病機(jī) 益氣、活血、化痰、通絡(luò) 治則 探討氣、血、痰（及瘀）、絡(luò)的相互關(guān)系 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)證據(jù) 腦心同治理論核心： 從整體觀角度來(lái)詮釋心腦血管?。ㄖ酗L(fēng)、胸痹）的證屬與病機(jī)、治則 （一）中醫(yī)角度 （二）中醫(yī)腦心同治理論與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)識(shí)的相關(guān)性 中風(fēng)（腦卒中）胸痹（冠心?。?氣虛血瘀證 證屬 益氣活血益氣活血 化瘀通絡(luò)化瘀通絡(luò) 治則 證同治則同 異病同治 趙步長(zhǎng)教授認(rèn)為 宏觀準(zhǔn)確性宏觀準(zhǔn)確性 微觀精確性微觀精確性 腦心同治理論對(duì)中風(fēng)胸痹認(rèn)識(shí)腦心同治理論對(duì)中風(fēng)胸痹認(rèn)識(shí)：現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)心、腦血管病認(rèn)識(shí)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)心、腦血管病認(rèn)識(shí)：

10、內(nèi)皮損傷 血小板凝集、 活化、血栓形成 血漿成分通 透性增強(qiáng) 單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞被激活 VEGF，淋巴循環(huán)泡沫細(xì)胞 平滑肌細(xì)胞 移行、增生 脂蛋白變性 纖維肌性內(nèi)膜增厚 膠原蛋白彈性應(yīng)蛋白 防御結(jié)構(gòu)的障礙 （HDL）異常 粥樣硬化灶粥樣硬化灶 動(dòng)脈狹窄、阻塞或痙攣動(dòng)脈狹窄、阻塞或痙攣 臨床發(fā)作冠心病、腦梗塞等臨床發(fā)作冠心病、腦梗塞等 PDGF 高脂血癥、高血壓、吸煙高脂血癥、高血壓、吸煙等等 動(dòng)脈粥樣瘢塊形成及其后果 瘢塊開(kāi)始形成穩(wěn)定瘢塊 不穩(wěn)定瘢塊瘢塊破裂 危險(xiǎn)因素危險(xiǎn)因素: 高血壓、血脂異常高血壓、血脂異常 糖尿病、吸煙、糖尿病、吸煙、 肥胖（中心型）肥胖（中心型） 動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)脈粥樣硬

11、化 左室肥厚左室肥厚 冠脈病變冠脈病變 心肌缺血心肌缺血 冠脈栓塞冠脈栓塞 心肌、腦梗死心肌、腦梗死 心腦血管病事件鏈(continuum) 神經(jīng)體液激活神經(jīng)體液激活 心律失常心律失常 心肌損失心肌損失 心性猝死心性猝死 心臟重構(gòu)心臟重構(gòu) 心室擴(kuò)大心室擴(kuò)大 心衰心衰 心臟病終末期心臟病終末期 無(wú)癥狀無(wú)癥狀 自然消退自然消退 或增大或增大 復(fù)原復(fù)原 功能不良功能不良 短期死亡短期死亡 （28天）天） 晚期復(fù)發(fā)晚期復(fù)發(fā) （28天）天） 晚期死亡晚期死亡 （28天）天） 疾病疾病 狀態(tài)狀態(tài) 血管內(nèi)粥血管內(nèi)粥 樣瘢塊不樣瘢塊不 斷發(fā)展斷發(fā)展 瘢塊或血瘢塊或血 栓的表面栓的表面 破裂破裂 癥狀性缺血癥狀

12、性缺血 猝死猝死 動(dòng)脈硬化性心腦血管病自然進(jìn)程 基礎(chǔ)病變 促發(fā)因素 急性事件 中期和晚期發(fā)展 （幾年至幾十年） （幾秒鐘或幾小時(shí)） （幾秒鐘或幾小時(shí)） （幾天至幾年） 時(shí)間時(shí)間 順序順序 三、中醫(yī)藥防治心腦血管病常用藥 益益 氣氣 藥：藥：黃芪、太子參等黃芪、太子參等 活血化瘀藥：活血化瘀藥：水蛭、蜈蚣、地龍、全蝎水蛭、蜈蚣、地龍、全蝎 當(dāng)歸、川芎、丹參、紅花、當(dāng)歸、川芎、丹參、紅花、 赤芍、桃仁、雞血藤、牛膝等赤芍、桃仁、雞血藤、牛膝等 理氣、通陽(yáng)藥：理氣、通陽(yáng)藥：乳香、乳香、 沒(méi)藥、桂枝沒(méi)藥、桂枝 n 配伍用藥 是中藥復(fù)方（或方劑）發(fā)揮藥效的關(guān) 鍵，是中醫(yī)處 方用藥的核心 n 方劑配伍基本

13、內(nèi)容：“七情合和”與“君 臣佐使”理論 “君臣佐使君臣佐使”則表明中藥配伍中藥組分有主有次。 主藥在治病中發(fā)揮主導(dǎo)作用，輔藥在治療中促使主藥 藥力得以充分發(fā)揮，同時(shí)抑制主藥的毒副作用。 中醫(yī)重視復(fù)方用藥及其中藥配伍理論 丹紅注射液、腦心通膠囊等中藥制劑相對(duì) 于西藥抗血小板作用機(jī)制單一，具有多組分 、多靶點(diǎn)作用特點(diǎn)。 意味著本品可能有更少耐藥性和更少副作 用。 中藥具有多組分、多靶點(diǎn)的作用特征 四、中藥目前面臨的困惑“？” 中藥在醫(yī)學(xué)科學(xué)領(lǐng)域的作用逐漸被國(guó)內(nèi)外同行認(rèn)可和關(guān)注。中藥在醫(yī)學(xué)科學(xué)領(lǐng)域的作用逐漸被國(guó)內(nèi)外同行認(rèn)可和關(guān)注。困惑：困惑： n 中藥如何發(fā)揮作用？中藥如何發(fā)揮作用？ n 這些作用如

14、何科學(xué)表達(dá)？這些作用如何科學(xué)表達(dá)？ n 中醫(yī)藥如何合理使用？中醫(yī)藥如何合理使用？ n 如何達(dá)到中藥清楚定位并做到如何達(dá)到中藥清楚定位并做到“精準(zhǔn)用藥精準(zhǔn)用藥”？ n 目前這些問(wèn)題尚不十分清楚目前這些問(wèn)題尚不十分清楚 n 國(guó)內(nèi)外同行基本一致認(rèn)同是：國(guó)內(nèi)外同行基本一致認(rèn)同是： n 中藥作用物質(zhì)基礎(chǔ)說(shuō)不清中藥作用物質(zhì)基礎(chǔ)說(shuō)不清 n 中藥作用機(jī)理說(shuō)不清中藥作用機(jī)理說(shuō)不清 n 中藥（組分）相互作用說(shuō)不清中藥（組分）相互作用說(shuō)不清 n 質(zhì)量控制、安全問(wèn)題說(shuō)不清質(zhì)量控制、安全問(wèn)題說(shuō)不清 n 中醫(yī)藥應(yīng)該在臨床有效的基礎(chǔ)上，更須多關(guān)注這些尚未能解決的中醫(yī)中醫(yī)藥應(yīng)該在臨床有效的基礎(chǔ)上，更須多關(guān)注這些尚未能解決的中

15、醫(yī) 藥臨床應(yīng)用的疑難問(wèn)題，以便更好地為中醫(yī)臨床應(yīng)用服務(wù)。藥臨床應(yīng)用的疑難問(wèn)題，以便更好地為中醫(yī)臨床應(yīng)用服務(wù)。 n 換言之換言之: 中醫(yī)藥在這些方面的問(wèn)題得到解決，將會(huì)有力推動(dòng)中醫(yī)藥學(xué)中醫(yī)藥在這些方面的問(wèn)題得到解決，將會(huì)有力推動(dòng)中醫(yī)藥學(xué) 科的快速發(fā)展，也會(huì)得到國(guó)際國(guó)內(nèi)同行和社會(huì)對(duì)中醫(yī)藥更為廣泛認(rèn)同科的快速發(fā)展，也會(huì)得到國(guó)際國(guó)內(nèi)同行和社會(huì)對(duì)中醫(yī)藥更為廣泛認(rèn)同 的效果。的效果。 開(kāi)展了丹紅注射液、腦心通膠囊發(fā)揮治 療冠心病、缺血性中風(fēng)等血瘀病證的系統(tǒng)研究 n 如：丹紅注射液如何發(fā)揮組分相互作用，組分體內(nèi)過(guò)程如何，哪些是如：丹紅注射液如何發(fā)揮組分相互作用，組分體內(nèi)過(guò)程如何，哪些是 具有生物活性的代謝產(chǎn)

16、物，最終通過(guò)哪些環(huán)節(jié)、途徑發(fā)揮活血化瘀效具有生物活性的代謝產(chǎn)物，最終通過(guò)哪些環(huán)節(jié)、途徑發(fā)揮活血化瘀效 應(yīng)最終實(shí)現(xiàn)整合調(diào)節(jié)治療冠心病、缺血性中風(fēng)等問(wèn)題。應(yīng)最終實(shí)現(xiàn)整合調(diào)節(jié)治療冠心病、缺血性中風(fēng)等問(wèn)題。 1丹紅注射液的主要適用病證丹紅注射液的主要適用病證 2 2 丹紅注射液中化學(xué)成分及代謝產(chǎn)物研究丹紅注射液中化學(xué)成分及代謝產(chǎn)物研究 4 丹紅注射液對(duì)腦缺血性損傷的保護(hù)作用丹紅注射液對(duì)腦缺血性損傷的保護(hù)作用 5 5 丹紅注射液抗腦缺血性損傷的機(jī)制研究丹紅注射液抗腦缺血性損傷的機(jī)制研究 6 6科研項(xiàng)目、論文、專(zhuān)利情況科研項(xiàng)目、論文、專(zhuān)利情況 3 丹紅配伍的理論依據(jù)丹紅配伍的理論依據(jù) 一、丹紅注射液的主要

17、主要適用病證 丹紅注射液丹紅注射液（國(guó)藥準(zhǔn)字（國(guó)藥準(zhǔn)字Z20026866），），是臨床上常用的、有效的中藥 制劑。是銷(xiāo)售額最高的中藥制劑之一，近年，年銷(xiāo)售超過(guò)10億元。 具有活血化瘀、通脈舒絡(luò)功效。 用于用于瘀血瘀血閉阻所致的胸痹及閉阻所致的胸痹及中風(fēng)中風(fēng)， 證見(jiàn)：證見(jiàn)：胸痛胸痛，胸悶胸悶，心悸心悸，口眼歪，口眼歪 斜，言語(yǔ)蹇澀，斜，言語(yǔ)蹇澀，肢體麻木肢體麻木，活動(dòng)不，活動(dòng)不 利等癥。利等癥。 治療治療冠心病冠心病、心絞痛心絞痛、心肌梗塞，、心肌梗塞， 缺血性腦病、缺血性腦病、腦血栓腦血栓及肺心病所瘀及肺心病所瘀 諸癥。諸癥。 運(yùn)動(dòng)是一箭多雕的 成本效價(jià)比最高的 預(yù)防心血管病的措施 高血壓 高

18、血脂 糖尿病 肥胖 丹紅注射液丹紅注射液一箭多雕一箭多雕 預(yù)防心腦血管病機(jī)理？預(yù)防心腦血管病機(jī)理？ 腦梗死 冠心病 丹紅注射液（國(guó)藥準(zhǔn)字 Z20026866），為臨床上常用 的、有效的中藥制劑。是銷(xiāo)售 額最高的中藥制劑之一。 丹紅注射液處方用量配比丹紅注射液處方用量配比 : : 丹參丹參750g750g，紅花，紅花250g250g。 二、丹紅配伍的理論依據(jù)二、丹紅配伍的理論依據(jù) 丹參：丹參： 味苦，性微寒味苦，性微寒，歸心、肝經(jīng)， 功效活血化瘀、涼血消腫、寧心安神。 紅花：紅花： 味辛，性溫，味辛，性溫，歸心、肝經(jīng)，辛 散溫通，入血分，能活血祛瘀化滯、通調(diào)經(jīng)脈。 二藥共奏活血化瘀、通經(jīng)活絡(luò)活血

19、化瘀、通經(jīng)活絡(luò)之功 （一）（一）HPLC-DADHPLC-DAD測(cè)定丹紅注射液中的有效成分測(cè)定丹紅注射液中的有效成分 6種有效成分紫外檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 250300350400450500550600650 A 波長(zhǎng)/nm 6種對(duì)照品混合溶液的濃度 250300350400450500550600650 B 波長(zhǎng)/nm 2503003504004 5 0 500550600650 C 波長(zhǎng)/nm 吸光度（A) 250300350400450500550600650 D 波長(zhǎng)/nm 250300350400450500550600650 E 波長(zhǎng)/nm 吸光度（A) 250300350400450

20、500550600650 F 波長(zhǎng)/nm A.丹參素鈉；B.原兒茶醛；C.咖啡酸；D.迷迭香酸；E.丹酚酸B；F.丹酚酸A 名稱丹參素鈉 原兒茶醛 咖啡酸 迷迭香酸 丹酚酸 丹酚酸 濃度（mgmL-1） 1.310 0.101 0.0041 0.109 0.219 3.360 結(jié)果表明： 丹參素、原兒茶醛、丹酚酸B、丹酚酸A 檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm； 咖啡酸、迷迭香酸檢測(cè) 波長(zhǎng)為330 nm。 三、丹紅注射液中化學(xué)成分及代謝產(chǎn)物研究三、丹紅注射液中化學(xué)成分及代謝產(chǎn)物研究 混合對(duì)照品溶液混合對(duì)照品溶液HPLCHPLC色譜圖色譜圖 0510152025303540 1 2 5 6 t/min A

21、0510152025303540 3 4 B t/min 0510152025303540 1 5 6 t/min C 0510152025303540 0 3 t/min D 1.丹參素；2.原兒茶醛；3.咖啡酸；4.迷迭香酸；5.丹酚酸B；6.丹酚酸A A.對(duì)照品溶液(280 nm)；B.對(duì)照品溶液(330 nm)；C.供試品溶液(NO. 110934 280 nm)；D.供試品溶液(NO. 110934 330nm) 色譜條件： 色譜柱：Eclipse XDB-C18 (4.6150 mm ，5m) ； 流動(dòng)相：A為乙腈，B為0.1%磷酸水溶液； 柱溫為30； 流速為1.0 mLmin-

22、1. 時(shí)間 06 min616 min1630 min3040 min 濃度5%A5%A5%A15%A15%A 26%A26%A27%A 流動(dòng)相梯度洗脫程序 結(jié)果表明： 該色譜條件下，樣品液中6種成 分與其他共存峰得到很好的分 離。 10批丹紅注射液中6種成分及總黃酮含量(n=3) 批號(hào) 丹參素 gmL-1 原兒茶醛 gmL-1 咖啡酸 gmL-1 迷迭香酸 gmL-1 丹酚酸B gmL-1 丹酚酸A gmL-1 總黃酮 gmL-1 111050 110934 110928 110937 111042 111033 110858 110926 110927 110950 平均 1 464.98

23、 1 238.03 1 391.21 1 363.29 1 378.93 1 308.49 1 346.36 1 570.80 1 390.56 1 309.61 1 376.23 300.54 369.17 445.82 345.23 235.84 268.05 260.56 412.30 364.07 367.06 336.86 5.40 4.68 7.98 5.39 4.97 5.52 5.05 5.43 6.13 5.49 5.60 262.17 215.75 236.16 286.24 237.06 246.85 163.51 300.25 233.68 259.71 244.13

24、573.65 270.41 297.53 396.47 517.43 441.90 305.84 399.65 310.21 402.57 391.57 4 650.41 4 220.46 4 067.06 5 634.77 5 083.91 4 458.79 3 845.14 5 083.64 4 711.88 4 851.21 4660.72 10 197 10 470 9 277 11 628 9 686 9 839 9 583 11 799 10 418 11 663 10456 丹紅注射液丹紅注射液樣品樣品中有效成分含量的中有效成分含量的HPLC-DADHPLC-DAD測(cè)定測(cè)定 丹紅

25、注射液中6種成分的含量 結(jié)果表明： 色譜條件下，樣 品液6種成分中 丹酚酸A含量最高 ，咖啡酸含量最 低，含量高低依 次是丹酚酸A、丹 參素、丹酚酸B、 原兒茶醛、迷迭 香酸、咖啡酸。 min010203040506070 mAU 0 20 40 60 80 100 120 *DAD1 E, Sig=280,16 Ref=400,100 (ZHF20130508ZHF000011.D) *DAD1 E, Sig=280,16 Ref=400,100 (ZHF20130508ZHF000012.D) *DAD1 E, Sig=280,16 Ref=400,100 (ZHF20130508ZHF0

26、00014.D) *DAD1 E, Sig=280,16 Ref=400,100 (ZHF20130508ZHF000015.D) *DAD1 E, Sig=280,16 Ref=400,100 (ZHF20130508ZHF000017.D) *DAD1 E, Sig=280,16 Ref=400,100 (ZHF20130508ZHF000018.D) *DAD1 E, Sig=280,16 Ref=400,100 (ZHF20130508ZHF000019.D) （二）對(duì)（二）對(duì)7 7批丹紅注射液進(jìn)行指紋圖譜檢測(cè)批丹紅注射液進(jìn)行指紋圖譜檢測(cè) 1. 標(biāo)定了28個(gè)共有峰，7批丹紅注射液指紋圖

27、譜相似度均大 于0.980，表明工藝較穩(wěn)定、質(zhì)量可控。 7批丹紅注射液指紋圖譜與對(duì)照指紋圖譜 min010203040506070 mAU 0 10 20 30 40 *DAD1 E, Sig=280,16 Ref=400,100 (SMC2013-7-19DH000015.D) *DAD1 E, Sig=280,16 Ref=400,100 (SMC2013-7-19DH000016.D) *DAD1 E, Sig=280,16 Ref=400,100 (SMC2013-7-19DH000020.D) *DAD1 E, Sig=280,16 Ref=400,100 (SMC2013-7-19

28、DH000025.D) *DAD1 E, Sig=280,16 Ref=400,100 (SMC2013-7-19DH000040.D) *DAD1 E, Sig=280,16 Ref=400,100 (SMC2013-7-23DH000014.D) *DAD1 E, Sig=280,16 Ref=400,100 (SMC2013-7-23DH000015.D) min010203040506070 mAU 0 50 100 150 200 250 300 350 *DAD1 E, Sig=280,16 Ref=400,100 (SMC2013-7-15DH000005.D) *DAD1 E,

29、 Sig=280,16 Ref=400,100 (SMC2013-7-15DH000006.D) *DAD1 E, Sig=280,16 Ref=400,100 (SMC2013-7-15DH000007.D) *DAD1 E, Sig=280,16 Ref=400,100 (SMC2013-7-24DH000007.D) *DAD1 E, Sig=280,16 Ref=400,100 (SMC2013-7-24DH000008.D) *DAD1 E, Sig=280,16 Ref=400,100 (SMC2013-7-24DH000028.D) *DAD1 E, Sig=280,16 Ref

30、=400,100 (SMC2013-7-24DH000029.D) 2. 72. 7批血漿、腦、肝臟組織樣品特征圖譜相似度均在批血漿、腦、肝臟組織樣品特征圖譜相似度均在0.920.92以上，說(shuō)明特征指以上，說(shuō)明特征指 紋圖譜相對(duì)穩(wěn)定、準(zhǔn)確，可用于體內(nèi)成分定性分析紋圖譜相對(duì)穩(wěn)定、準(zhǔn)確，可用于體內(nèi)成分定性分析 7批丹紅注射液15min血液中指紋圖譜 對(duì)照指紋圖譜 7批丹紅注射液60 min腦中指紋圖譜 對(duì)照指紋圖譜 min010203040506070 mAU 0 200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 *DAD1 E, Sig=280,16 Ref=40

31、0,100 (SMC2013-7-25DH000001.D) *DAD1 E, Sig=280,16 Ref=400,100 (SMC2013-7-25DH000002.D) *DAD1 E, Sig=280,16 Ref=400,100 (SMC2013-7-25DH000003.D) *DAD1 E, Sig=280,16 Ref=400,100 (SMC2013-7-25DH000004.D) *DAD1 E, Sig=280,16 Ref=400,100 (SMC2013-7-25DH000005.D) *DAD1 E, Sig=280,16 Ref=400,100 (SMC2013-

32、7-25DH000006.D) *DAD1 E, Sig=280,16 Ref=400,100 (SMC2013-7-16DH000014.D) 7批丹紅注射液60 min肝中指紋圖譜 對(duì)照指紋圖譜 3. LC-MS（QTrap 4500）質(zhì)譜分析丹紅注射液成分及其體內(nèi)代謝物 4.EMS-IDA-EPI4.EMS-IDA-EPI掃描模式：所有色譜峰可掃描到掃描模式：所有色譜峰可掃描到EPIEPI譜圖，譜圖， EMS EMS展示展示107107個(gè)掃描到最高峰化合物個(gè)掃描到最高峰化合物 丹紅注射液主要有效成分列表 丹參素提取離子流圖(XIC, m/z 197)及MS2 通過(guò)丹參素特征碎片離子m/z

33、179掃描可以找到結(jié)構(gòu)類(lèi)似物 原兒茶醛提取離子流圖(XIC , m/z 137)及MS2 羥基紅花黃色素A提取離子流圖(XIC , m/z 611491)及MS2 丹酚酸B提取離子流圖(XIC , m/z 717)及MS2 MS3掃描：丹酚酸A：RT10.4min，判斷二級(jí)碎片來(lái)源，比如二級(jí)碎片m/z159及m/z185來(lái)源 小結(jié)：丹紅注射液中有效成分主要是水溶性的酚酸類(lèi)組分，極性較大。 5. 丹紅注射液代謝產(chǎn)物分析丹紅注射液代謝產(chǎn)物分析 丹紅注射液中水溶性酚酸類(lèi)有效成分較多，極性較大；體內(nèi)I相代謝反應(yīng)，通過(guò)氧 化、 還原、水解等途徑引入極性，使原藥極性增大，利于排泄。 主要以丹參素，迷迭香酸

34、，原兒茶醛，原兒茶酸為目標(biāo)組分，尋找相應(yīng)代謝物.， 丹紅注射液代謝產(chǎn)物列表 丹參素(Danshensu, DSS)代謝物提取離子流圖及二級(jí)質(zhì)譜 原兒茶酸原兒茶酸(Protocatechuic acid, DBA)代謝物提取離子流圖及二級(jí)質(zhì)譜代謝物提取離子流圖及二級(jí)質(zhì)譜 原兒茶醛(Protocaterchuic aldehyde, PA)代謝物提取離子流圖及二級(jí)質(zhì)譜 迷迭香酸(Rosmarinic acid, RA)代謝物提取離子流圖及二級(jí)質(zhì)譜 特征II相代謝物含量隨給藥時(shí)間變化的趨勢(shì)(Area：MRM) 小結(jié)：EMS-IDA-EPI， MRM-IDA-EPI, Pre/NL-IDA-EPI等多

35、種掃描模式結(jié)合，發(fā)現(xiàn)注射液中 含量較高的有效成分丹參素，原兒茶酸，原兒茶醛，迷迭香酸的II相代謝物，主要是甲基化， 硫酸化，甲基化后硫酸化，葡萄糖醛酸化等一系列代謝物。 各時(shí)間點(diǎn)代謝樣品中丹參素與迷迭香酸原形在代謝樣品未檢測(cè)到，僅檢測(cè)到代謝物。初步鑒 定丹紅注射液中有效成分32個(gè)，同時(shí)鑒定了主要有效成分的代謝產(chǎn)物。 Combinations Parameters Com1Com2Com3Com4Com5Com6Com7Com8Com9 Emax(U/ml) 0.7310.6430.4750.4780.7550.70.6920.7420.701 EC50(g/ml) 0.1551.4230.31

36、0.120.270.60.240.880.452 6. 羥基紅花黃色素A與MDA相關(guān)的藥效動(dòng)力學(xué)參數(shù) 9個(gè)組方時(shí)間-羥A藥物濃度-MDA三維動(dòng)態(tài)模型 （1 1）丹紅注射液對(duì)神經(jīng)功能缺損癥狀的影響）丹紅注射液對(duì)神經(jīng)功能缺損癥狀的影響 四、丹紅注射液對(duì)腦缺血性損傷的保護(hù)作用四、丹紅注射液對(duì)腦缺血性損傷的保護(hù)作用 Day0 Day3 Day7 Day10 Day14 Neurological assessment Neurological assessment Neurological assessment Neurological assessment MCAO 大腦中動(dòng)脈栓塞模型（MCAO）示意

37、圖 在MCAO模型再灌之后的1d、3d、7d、10d和14d進(jìn)行神 經(jīng)功能評(píng)分: 1.自主活動(dòng)(0-3) 2. 四肢運(yùn)動(dòng)的對(duì)稱性(0-3) 3. 前肢外伸(0-3) 4. 爬動(dòng)(1-3) 5.身體觸覺(jué)(1-3) 6.震動(dòng)覺(jué)(1-3) 其中3分最差，18分正常 Garcia et al. Stroke, 1995. 26(4): 627-634 Day1 Day3 Day7 Day10 Day14 Neurological assessment Neurological assessment Neurological assessment Neurological assessment Neur

38、ological assessment 注：*P 0.01 vs Sham，P 0.05 vs IRU，#P 0.01 vs DHI-1 各組在大鼠腦缺血后不同時(shí)間點(diǎn)的神經(jīng)功能缺損評(píng)分 變 化 曲 線 1 1 （2 2）丹紅注射液對(duì)大鼠腦缺血后腦梗死體積的影響）丹紅注射液對(duì)大鼠腦缺血后腦梗死體積的影響 A 假手術(shù)組 B 模型組 C 丹紅注射液 0.5 ml/kg D 丹紅注射液 1.0 ml/kg E丹紅注射液 2.0 ml/kg MCAO法制作大腦中動(dòng)脈局灶性栓死模型 丹紅注射液對(duì)大鼠腦缺血后腦梗死體積的影響 組別劑量（ml/kg）n總梗死體積（mm3） 假手術(shù)組NS10 0 0 模型組NS

39、10 213.5 72.4* 丹紅低劑量組0.510152.7 53.8# 丹紅中劑量組1.010 116.5 47.6# 丹紅高劑量組2.010 103.2 54.2# 注：* P0.05，* P0.01, 與對(duì)照組比較，F(xiàn)檢驗(yàn)；# P0.05,#P0.01， 與模型組比較，F(xiàn)檢驗(yàn)。P0.05，與低劑量組比較，F(xiàn)檢驗(yàn)。 丹紅注射液對(duì)大鼠腦缺血后腦梗死的影響 結(jié)果可見(jiàn)：結(jié)果可見(jiàn)： 丹紅注射液可使梗死總體積減少丹紅注射液可使梗死總體積減少 , , 與模型組相比具有顯著性差異與模型組相比具有顯著性差異 五、丹紅注射液抗腦缺血性損傷的機(jī)制研究五、丹紅注射液抗腦缺血性損傷的機(jī)制研究 自由基過(guò)度形成自由

40、基過(guò)度形成 炎癥反應(yīng)炎癥反應(yīng)纖溶系統(tǒng)受損纖溶系統(tǒng)受損 興奮性氨基酸毒性興奮性氨基酸毒性細(xì)胞凋亡細(xì)胞凋亡 神經(jīng)系統(tǒng)損傷神經(jīng)系統(tǒng)損傷 （1 1）丹紅注射液對(duì)腦缺血再灌注大鼠腦皮質(zhì)）丹紅注射液對(duì)腦缺血再灌注大鼠腦皮質(zhì)SODSOD活力和活力和MDAMDA含量影響含量影響 丹紅注射液對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠腦皮質(zhì)SOD活力和MDA含量的影響(XSD) 組別劑量（ml/kg）n SOD （NU/ mg） MDA（nmol/mg.） 假手術(shù)組NS10 541.848.5 411.636.5 模型組NS10272.435.1*947.286.4* 丹紅低劑量組0.510312.242.21858.393.9 丹

41、紅中劑量組1.010364.545.89#782.395.4 丹紅高劑量組2.010397.150.61# 689.395.4 # 注：* P0.05，* P0.01, 與對(duì)照組比較，F(xiàn)檢驗(yàn)；# P0.05，#P0.01，與模型組比較，F(xiàn)檢驗(yàn)； P0.05，與低劑量組組比較，F(xiàn)檢驗(yàn)。 丹紅注射液對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠腦皮質(zhì)SOD活力的影響 丹紅注射液對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠腦皮質(zhì)MDA含量的影響 結(jié)果表明：結(jié)果表明： （1 1）腦缺血再灌注組與假手術(shù)組相比，）腦缺血再灌注組與假手術(shù)組相比， SODSOD活力、活力、MDAMDA含量均具有顯著差異。含量均具有顯著差異。 （2 2）丹紅注射液可顯著提

42、高腦缺血再灌注）丹紅注射液可顯著提高腦缺血再灌注 損傷大鼠腦皮質(zhì)損傷大鼠腦皮質(zhì)SODSOD活力，高劑量組顯著降活力，高劑量組顯著降 低腦缺血再灌注大鼠腦皮質(zhì)低腦缺血再灌注大鼠腦皮質(zhì)MDAMDA含量。含量。 （2 2）丹紅注射液對(duì)腦缺血再灌注大鼠腦皮質(zhì)）丹紅注射液對(duì)腦缺血再灌注大鼠腦皮質(zhì)6-Keto-PGF6-Keto-PGFl l含量的影響 含量的影響 丹紅注射液對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠腦6-Keto-PGFl含量的影響(XSD) 組別劑量（ml/kg）n6-Keto-PGFl 假手術(shù)組NS10 86.318.31 模型組NS1034.075.23* 丹紅低劑量組0.51051.116.81 #

43、 丹紅中劑量組1.01059.237.83# 丹紅高劑量組2.010 65.367.52# 注：* P0.05，* P0.01, 與對(duì)照組比較，F(xiàn)檢驗(yàn)；# P0.05，#P0.01， 與模型組比較，F(xiàn)檢驗(yàn)；P0.05，與低劑量組組比較，F(xiàn)檢驗(yàn)。 結(jié)果表明：結(jié)果表明： （1 1）腦缺血再灌注組與假手術(shù)）腦缺血再灌注組與假手術(shù) 組相比具有顯著差異；組相比具有顯著差異； （2 2）丹紅注射液各組能顯著提）丹紅注射液各組能顯著提 高腦缺血再灌注損傷大鼠腦皮質(zhì)高腦缺血再灌注損傷大鼠腦皮質(zhì) 6-Keto-PGF6-Keto-PGF1 1的含量； 的含量； （3 3）丹紅注射液中、高劑量與）丹紅注射液中、高

44、劑量與 低劑量相比具有顯著差異。低劑量相比具有顯著差異。 丹紅注射液對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠腦6-Keto-PGFl含量的影響 （3 3）丹紅注射液對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠血漿）丹紅注射液對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠血漿t-PAt-PA活性和活性和PAIPAI活性的影響活性的影響 丹紅注射液對(duì)腦缺血再灌注大鼠血漿t-PA活性和PAI活性的影響 (XSD) 組別劑量（ml/kg）nt-PA（IU/ ml）PAI（IU/ml）PAI / t-PA 假手術(shù)組NS10 0.9120.073 0.6520.049 0.715 模型組NS100.5110.079*0.9210.065*1.802 丹紅低劑量組0.5

45、100.6320.072#0.8910.0751.410 丹紅中劑量組1.0100.6890.082#0.8420.0711.222 丹紅高劑量組2.0100.6970.083#0.7620.068#1.093 注：* P0.05，* P0.01, 與對(duì)照組比較，F(xiàn)檢驗(yàn)；# P0.05，與模型組比較，F(xiàn)檢驗(yàn)。 t-PA：組織型纖溶酶原激活物；PAI：纖溶酶原激活物抑制因子 結(jié)果表明：結(jié)果表明： （1 1）腦缺血再灌注組與假手術(shù)組相比均）腦缺血再灌注組與假手術(shù)組相比均 具有顯著差異；具有顯著差異； （2 2）丹紅注射液各組與腦缺血再灌注組）丹紅注射液各組與腦缺血再灌注組 相比，可顯著提高相比，可

46、顯著提高t-PAt-PA活性，降低活性，降低PAIPAI活活 性，具有增強(qiáng)機(jī)體的纖溶功能、促進(jìn)血性，具有增強(qiáng)機(jī)體的纖溶功能、促進(jìn)血 栓溶解的作用。栓溶解的作用。 （4 4）丹紅注射液對(duì)大鼠腦缺血再灌注后）丹紅注射液對(duì)大鼠腦缺血再灌注后 Bcl-2 Bcl-2、BaxBax蛋白表達(dá)的作用蛋白表達(dá)的作用 各組缺血側(cè)大腦皮層Bcl-2 、Bax免疫組化陽(yáng)性細(xì)胞數(shù) 組別劑量（ml/kg）nBcl-2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)Bax陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)Bcl-2/Bax 假手術(shù)組NS10 55.9 12.7 32.39.7 1.73 模型組NS1084.4 15.6*86.815.2*0.97 丹紅注射液1.010126.1 1

47、8.2 #47.312.9#2.66 注：* P0.05，* P0.01與假手術(shù)組比較；# P0.05，#P0.01，與模型組比較，F(xiàn)檢驗(yàn)。 A Bcl-2假手術(shù)組，B Bcl-2 模型組，C Bcl-2丹紅注射液組， D Bax組， E Bax-假手術(shù)組，F(xiàn) Bax-丹紅注射液組 結(jié)果表明： （1）假手術(shù)與模型組相比， 模型組缺血側(cè)大腦皮層Bcl-2 免疫組化陽(yáng)性反映細(xì)胞數(shù)顯著 增多。 （2）丹紅注射液組與腦缺血 再灌注模型組相比Bcl-2陽(yáng)性 細(xì)胞數(shù)顯著增多。 （3）丹紅注射液與模型組相 比，可使Bax蛋白的表達(dá)降低 。 （4）丹紅注射液具有顯著調(diào) 節(jié)Bcl-2/Bax蛋白的表達(dá)，抑 制神

48、經(jīng)元凋亡，保護(hù)腦組織的 作用。 圖圖 2 2 微透析套管埋植微透析套管埋植 Mi n u t e s 051 01 52 02 53 0 mVolts - 5 0 0 0 5 0 0 mVolts - 5 0 0 0 5 0 0 Mi nut es 051 01 52 02 53 0 mVolts - 5 0 0 0 5 0 0 mVolts - 500 0 500 Mi n u t e s 051 01 52 02 53 0 mVolts - 5 0 0 0 5 0 0 mVolts - 5 0 0 0 5 0 0 1 1 2 2 3 3 1 1 2 2 3 3 混合對(duì)照品溶液 和透析液的H

49、PLC 圖 注： 1.天門(mén)冬氨酸； 2.谷氨酸； 3.-氨基丁酸； A.人工腦脊液溶 液 B.對(duì)照品溶液； C.空白大鼠頭部 透析液 圖圖 1 1大腦中動(dòng)脈阻塞模型（大腦中動(dòng)脈阻塞模型（MCAOMCAO） 0 100 200 300 400 500 600 700 800 900 -50050100150200 模型組 丹紅組 丹紅注射液對(duì)腦缺血大鼠腦海馬區(qū)Asp釋放的影響 0 50 100 150 200 250 300 350 400 -50050100150200 模型組 丹紅注射液對(duì)腦缺血大鼠腦海馬區(qū)Glu釋放的影響 min 丹紅組 0 2000 4000 6000 8000 1000

50、0 12000 14000 -50050100150200 模型組 丹紅組 丹紅注射液對(duì)腦缺血大鼠腦海馬區(qū)GABA釋放的影響 （5 5）丹紅注射液對(duì)腦部微透析液氨基酸遞質(zhì)釋放的影響）丹紅注射液對(duì)腦部微透析液氨基酸遞質(zhì)釋放的影響 丹紅注射液通過(guò)調(diào)節(jié)腦內(nèi)氨基酸遞質(zhì)的含丹紅注射液通過(guò)調(diào)節(jié)腦內(nèi)氨基酸遞質(zhì)的含 量，對(duì)腦缺血起到一定的保護(hù)作用。量，對(duì)腦缺血起到一定的保護(hù)作用。 丹紅注射液抑制炎癥因子丹紅注射液抑制炎癥因子TNF-TNF-、IL-1IL-1的表達(dá)的表達(dá)，丹紅注射，丹紅注射 液對(duì)炎癥的抑制在腦缺血后恢復(fù)的過(guò)程中起著重要的作用。液對(duì)炎癥的抑制在腦缺血后恢復(fù)的過(guò)程中起著重要的作用。 開(kāi)展的部分相關(guān)

51、研究?jī)?nèi)容開(kāi)展的部分相關(guān)研究?jī)?nèi)容 （6 6）丹紅注射液對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠丹紅注射液對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠腦組織腦組織TNF-TNF-和和IL-1IL-1炎癥因子的炎癥因子的 影響影響 丹紅注射液對(duì)大鼠腦缺血后腦組織中TNF-和IL-1含量的影響 （7 7）丹紅注射液對(duì)大鼠大）丹紅注射液對(duì)大鼠大腦缺血腦缺血后葡萄糖代謝的影響后葡萄糖代謝的影響 分子影像技術(shù)能夠無(wú)創(chuàng)監(jiān)測(cè)生物分子影像技術(shù)能夠無(wú)創(chuàng)監(jiān)測(cè)生物 體內(nèi)細(xì)胞和分子水平的生化過(guò)程，尤體內(nèi)細(xì)胞和分子水平的生化過(guò)程，尤 其是其是18F-FDG-PET（正電子發(fā)射斷層正電子發(fā)射斷層 掃描掃描技術(shù)技術(shù)）能夠定量地?zé)o創(chuàng)監(jiān)測(cè)葡萄）能夠定量地?zé)o創(chuàng)監(jiān)測(cè)葡萄 糖

52、代謝的變化，被廣泛應(yīng)用于腦血管糖代謝的變化，被廣泛應(yīng)用于腦血管 病療效的評(píng)價(jià)。病療效的評(píng)價(jià)。 MACO Day0 Day3 Day7 Day10 Day14 PET ScanPET ScanPET Scan 利用利用18 18F-FDG-PET F-FDG-PET 來(lái)研究丹紅注射液對(duì)大鼠腦缺血再灌來(lái)研究丹紅注射液對(duì)大鼠腦缺血再灌注注損傷的作用損傷的作用，丹，丹 紅注射液組的紅注射液組的R/NR/N變化值在給藥后變化值在給藥后7d7d、14d14d較模型組顯著增加，較好地促進(jìn)了梗較模型組顯著增加，較好地促進(jìn)了梗 死區(qū)葡萄糖代謝的恢復(fù)死區(qū)葡萄糖代謝的恢復(fù)。 大鼠腦部FDG-PET橫斷切面的圖像 R

53、/N變化值 梗死區(qū)周邊的GFAP（膠質(zhì)纖維酸性蛋白）免疫組化染色分析圖 ( #P 0.01 vs Sham, *P 0.01 vs IRU, P 0.05 vs DHI-1) ShamIRUDHI-2DHI-1DHI-4 GFAP （200 x） （8 8）丹紅注射液對(duì)大鼠）丹紅注射液對(duì)大鼠腦缺血后星形膠質(zhì)細(xì)胞活化腦缺血后星形膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響的影響 丹紅注射液促使腦缺血后星形膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)一步活化，大量表達(dá)丹紅注射液促使腦缺血后星形膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)一步活化，大量表達(dá)GFAPGFAP， 從而從而促進(jìn)腦缺血后神經(jīng)功能的恢復(fù)促進(jìn)腦缺血后神經(jīng)功能的恢復(fù)。 丹紅注射液能夠明顯抑制缺氧誘導(dǎo)的腦內(nèi)丹紅注射液能夠明顯

54、抑制缺氧誘導(dǎo)的腦內(nèi) 皮細(xì)胞早期凋亡進(jìn)程和和皮細(xì)胞早期凋亡進(jìn)程和和G1/SG1/S期阻滯，且呈期阻滯，且呈 劑量依賴性。劑量依賴性。 內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞10100 0兔抗鼠兔抗鼠因子抗體鑒定因子抗體鑒定 * * * * * * * * * * * * 采用采用原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)的的乳鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞乳鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞，建立缺氧損傷模型。，建立缺氧損傷模型。 （9 9）丹紅注射液對(duì)）丹紅注射液對(duì)乳鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞乳鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞缺氧損傷的缺氧損傷的保護(hù)作用保護(hù)作用 正常組正常組 模型組模型組尼莫地平組尼莫地平組 100uL/mL100uL/mL組組 50uL/mL50uL/mL組組 25uL

55、/mL25uL/mL組組 A 正常組 B 模型組 C 丹紅注射液100uL/mL組 丹紅注射液對(duì)缺氧細(xì)胞超顯微結(jié)構(gòu)的影響（6K） 組別 C/(uL.mL1) SOD (U/mg) MDA(nmol/mL) 正常組 85.553.58 4.090.50 模型組 29.351.04 10.181.35 丹紅注射液組25 33.974.20 8.801.00 50 57.264.70* 6.750.55* 100 70.053.38* 5.490.51* 與正常組比較：P0.01；與模型組比較：*P0.05 *P0.01 丹紅注射液對(duì)缺氧損傷的rBMECs SOD活性和MDA水平的影響（xs，n=6

56、） A 正常組 B 模型組C 丹紅注射液100uL/mL組 RT-PCRRT-PCR法檢測(cè)法檢測(cè)P53P53、MMP-9MMP-9、ICAM-1 mRNAICAM-1 mRNA的表達(dá)的表達(dá) 擴(kuò)增曲線圖溶解曲線圖 擴(kuò)增曲線拐點(diǎn)清楚，整體平行性好，基線平而無(wú)上揚(yáng)現(xiàn)象，曲線指數(shù)期斜率與 擴(kuò)增效率成正比，各反應(yīng)管的擴(kuò)增曲線平行性好，表明擴(kuò)增效率良好且相近。 溶解曲線直接表示了引物的特異性，TM值基本都在80-90度之間，三個(gè)引物都 出現(xiàn)單一峰，說(shuō)明特異性擴(kuò)增良好。 下調(diào)下調(diào)P53 mRNA表達(dá)來(lái)抑制表達(dá)來(lái)抑制rBMEC早期早期 凋亡和凋亡和G1/S期阻滯；期阻滯； 下調(diào)下調(diào)ICAM-1 mRNA表達(dá)介

57、導(dǎo)黏附反應(yīng)、表達(dá)介導(dǎo)黏附反應(yīng)、 促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞遷移、降低內(nèi)皮細(xì)胞活性；促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞遷移、降低內(nèi)皮細(xì)胞活性； 下調(diào)下調(diào)MMP-9 mRNA表達(dá)促進(jìn)血管生成。表達(dá)促進(jìn)血管生成。 以正常組為對(duì)照進(jìn)行相對(duì)定量分析，丹紅注射液以正常組為對(duì)照進(jìn)行相對(duì)定量分析，丹紅注射液100、50uL/mL均能明顯均能明顯 降低降低MMP-9、ICAM-1、P53 mRNA的表達(dá)水平。的表達(dá)水平。 橋粒連接 絨毛 電鏡觀察 （Caco-2 21d 200Caco-2 21d 200） 光鏡觀察 藥物通過(guò)小腸上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)途徑示意圖藥物通過(guò)小腸上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)途徑示意圖 體外體外Caco-2Caco-2細(xì)胞模擬體內(nèi)吸收，考察丹紅注

58、射液的主要有效成分配伍細(xì)胞模擬體內(nèi)吸收，考察丹紅注射液的主要有效成分配伍在在口服給藥后的口服給藥后的 吸收效果。吸收效果。 口服給藥口服給藥 吸收吸收 小腸小腸 指導(dǎo)指導(dǎo) 劑型 結(jié)構(gòu)成本 能否 吸收 吸收 機(jī)制 影響 因素 代謝 特點(diǎn) 吸收 效率 轉(zhuǎn)運(yùn)樣品HPLC檢測(cè) （1010）丹紅注射液）丹紅注射液主要有效成分配伍體主要有效成分配伍體外外吸收吸收特性特性 R2X(cum)=0.646 R2Y(cum)=0.75, Q2=0.58（R2Y和Q2 大于0.5時(shí)，說(shuō)明模型較好） 負(fù)負(fù)離子模式下血清的離子模式下血清的PLS-DA得分圖得分圖 (11(11）丹紅注射液調(diào)節(jié)血脂代謝的作用）丹紅注射液調(diào)

59、節(jié)血脂代謝的作用 以高脂血癥大鼠為模型，通過(guò)生化、以高脂血癥大鼠為模型，通過(guò)生化、 分子生物學(xué)及代謝組學(xué)技術(shù)與方法，探分子生物學(xué)及代謝組學(xué)技術(shù)與方法，探 討丹紅注射液在調(diào)節(jié)血脂代謝方面的作討丹紅注射液在調(diào)節(jié)血脂代謝方面的作 用機(jī)理，為其治療脂代謝相關(guān)疾病提供用機(jī)理，為其治療脂代謝相關(guān)疾病提供 科學(xué)理論依據(jù)?？茖W(xué)理論依據(jù)。 六、六、 科科 研研 項(xiàng)項(xiàng) 目目 項(xiàng)項(xiàng) 目目 名名 稱稱來(lái)來(lái) 源源 基于中西藥相互作用的谷紅注射液多組分藥物代謝 與藥效相關(guān)性研究 國(guó)家自然科學(xué)基金 （No.81373898） 基于藥物相互作用的丹紅注射液對(duì)腦缺血性損傷保 護(hù)機(jī)制研究 國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目 （No.81173

60、647） 丹參、川芎（參芎注射液）活性物質(zhì)配伍方的多成 分藥物代謝動(dòng)力學(xué)與對(duì)腦缺血性損傷保護(hù)作用的相 關(guān)性研究 國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目 （No.81274176） 丹參紅花多組分配伍方（丹紅注射液為示范）藥物 體內(nèi)過(guò)程與抗血栓效應(yīng)相關(guān)性研究 國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目 （No.81473587） 基于K+/Glu激活鈣信號(hào)通路的丹紅注射液腦靶向活 性成分篩選及神經(jīng)保護(hù)機(jī)制研究 浙江省自然科學(xué)基金項(xiàng)目 （No.Y13H280035） 中藥（丹紅配伍為例）多成分藥動(dòng)學(xué)與藥效學(xué)相關(guān) 聯(lián)的方法學(xué)研究 浙江省科技廳項(xiàng)目 （No.2013C33244） 已正式發(fā)表已正式發(fā)表20余篇，余篇，待發(fā)表論文待發(fā)表論文15