革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、革蘭氏染色法的原理摘要：革蘭氏染色反應(yīng)是細(xì)菌重要的鑒別特征，所以學(xué)習(xí)微生物學(xué)，進(jìn)行革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)是很重要的。為保證染色結(jié)果的正確性，采用規(guī)范的的染色操作方法是十分必要。本實(shí)驗(yàn)主要對(duì)大腸桿菌（Escherichia coli）、金黃色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus Rosenbach）、枯草桿菌 （Bacillus subtilis）進(jìn)行革蘭氏染色，觀察它們的染色特征，辨別是革蘭氏陰性還是陽(yáng)性，從而掌握其染色方法。染色方法與過(guò)程很清晰，但實(shí)驗(yàn)結(jié)果中金黃色葡萄球菌(S.aureus Rosenbach）多組呈現(xiàn)假陰性。本實(shí)驗(yàn)的主要目的是熟悉并掌握革蘭氏染色方法及原理，但要想做

2、出很好的染色得多加練習(xí)。本實(shí)驗(yàn)還可以鍛煉顯微鏡操作技術(shù)和無(wú)菌操作技術(shù)。 關(guān)鍵詞：革蘭氏染色 大腸桿菌(E.coli) 金黃色葡萄球菌(S. aureus Rosenbach) 枯草桿菌(B.subtilis)引言革蘭氏染色是微生物學(xué)中最重要的鑒別染色方法，它可以直接將細(xì)菌分為革蘭氏陰性和革蘭氏陽(yáng)性。革蘭氏染色法可將細(xì)菌分為革蘭氏陽(yáng)性（G+）和革蘭氏陰性（G-）兩種類型，這是由這兩種細(xì)菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)組成與結(jié)構(gòu)的差異所決定的。經(jīng)過(guò)一定的染色過(guò)程后，革蘭氏陽(yáng)性的細(xì)菌會(huì)因?yàn)榧?xì)胞壁肽聚糖的含量高，脂質(zhì)含量低而保持第一次染色的藍(lán)紫色。革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的脂質(zhì)含量高，乙醇處理時(shí)脂質(zhì)溶解，藍(lán)色被洗脫，復(fù)染后變

3、為紅色。革蘭氏染色原理很簡(jiǎn)單，染色時(shí)需注意要注意使用處在活躍生長(zhǎng)期的細(xì)菌，涂片不宜過(guò)厚，嚴(yán)格控制脫色時(shí)間。大腸桿菌(E.coli)是革蘭氏陰性細(xì)菌，金黃色葡萄球菌(S. aureus Rosenbach)與枯草桿菌 (B.subtilis)都是革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，染色后在顯微鏡下容易區(qū)別。同時(shí)它們的形態(tài)各異，可以根據(jù)具體顏色和形態(tài)差異來(lái)判斷染色是否成功。本實(shí)驗(yàn)還涉及到高倍油鏡的使用。使用油鏡與用一般的鏡頭不同，具體使用在實(shí)驗(yàn)方法中描述。 1.1材料1.1.1菌種大腸桿菌16小時(shí)牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養(yǎng)物，金黃色葡萄球菌16小時(shí)牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養(yǎng)物，枯草桿菌16小時(shí)牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養(yǎng)物。

4、1.1.2 溶液與試劑 無(wú)菌生理鹽水，草酸銨結(jié)晶紫染液，盧戈氏碘液，95%乙醇，番紅復(fù)染夜，香柏油，二甲苯1.1.3儀器 酒精燈，載玻片，顯微鏡，雙層瓶，接種環(huán)，滴管等1.2 方法 1.2.1 制片：取活躍生長(zhǎng)期菌種按常規(guī)方法涂片（不要太厚）、干燥和固定。 1.2.2染色 （1）初染：滴加草酸結(jié)晶紫染液覆蓋涂菌部位，染色2min，水洗至流出水無(wú)色。 （2）媒染：用盧戈氏染液沖去殘留水跡，再用碘液覆蓋1min，傾去碘液，水洗至流出水無(wú)色。 （3）脫色：將玻片上的水用吸水紙吸取，用滴管流加95%乙醇脫色（持續(xù)20秒），稍后立即洗去乙醇。 （4）復(fù)染：將玻片上的水用吸水紙吸去，用番紅復(fù)染液染色2mi

5、n，水洗，吸去殘水烤干。 1.2.3 鏡檢 分別用香柏油覆蓋涂菌部位，先用低倍鏡找到菌，換用的物鏡觀察染色情況。觀察結(jié)束后，用二甲苯擦洗鏡頭。2實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析2.2 結(jié)果分析 大腸桿菌竟革蘭氏染色后呈現(xiàn)紅色，3個(gè)圖片上都是紅色，因此大腸桿菌應(yīng)該是革蘭氏陰性細(xì)菌，與事實(shí)相符，染色成功。 金黃色葡萄球菌比較難染色，從結(jié)果中可以分析，前兩個(gè)涂片的菌種可能培養(yǎng)的時(shí)間太長(zhǎng)了。因?yàn)槔淆g的革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌會(huì)被染成紅色而造成假陰性，老齡的G+細(xì)菌細(xì)胞壁老化，不能在乙醇處理的時(shí)候使肽聚糖網(wǎng)孔收縮而使碘-結(jié)晶紫復(fù)合物滯留在細(xì)胞壁，從而在復(fù)染時(shí)被染紅。 枯草桿菌染色結(jié)果很好，藍(lán)紫色很明顯，染色成功。1.3.3 小結(jié)

6、1、獲得本實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵：固定時(shí)烘烤要適度，太輕會(huì)在沖洗時(shí)沖走細(xì)菌，過(guò)度會(huì)破壞細(xì)菌形態(tài)；脫色的時(shí)間要嚴(yán)格控制，脫色不夠造成假陽(yáng)性，脫色過(guò)度會(huì)出現(xiàn)假陰性；選用新培養(yǎng)的菌種，涂片時(shí)不能太厚。這些問(wèn)題在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中幾乎都有出現(xiàn)，尤其是對(duì)于初學(xué)者，特別需要注意。 2、 革蘭氏染色可以迅速將細(xì)菌分為陰性和陽(yáng)性，是很重要的染色方法，也是相當(dāng)復(fù)雜的染色方法。通過(guò)練習(xí)革蘭氏染色，既掌握了一般的染色方法，又為以后技術(shù)要求更高的染色，觀察，鑒別奠定了基礎(chǔ)。參考文獻(xiàn)1 王芳,宋瑛琳,田明等.革蘭氏染色結(jié)果的影響因素及原因分析J.實(shí)驗(yàn)室科學(xué),2009,(1):104-106. 2 沈杰.大腸菌群革蘭氏染色技術(shù)的實(shí)驗(yàn)研究J.干旱環(huán)境監(jiān)測(cè),2008,22(1):62-64. 3 洪慶華,石璐,孫井梅等.革蘭氏染色三步法應(yīng)用試驗(yàn)探討J.實(shí)驗(yàn)室研究與探索,2010,29(11):15-17. 4 洪慶