化妝品中甲醛的檢測方法

1、附件2 :化妝品中甲醛的檢測方法1范圍本方法規(guī)定了采用柱前衍生化液相色譜-紫外檢測法測定化妝品中甲醛(CAS : 50-00-0)的方法。本方法適用于化妝品中甲醛含量的測定。2方法提要甲醛測定采用柱前衍生化法，甲醛與2,4-二硝基苯肼反應(yīng)生成黃色的2, 4-二硝基苯腙(見圖1),經(jīng)高效液相色譜分離，紫外檢測器在355 nm波長下檢測,根據(jù)保留時間定性，峰面積定量，以標(biāo)準曲線法計算含量。本方法對甲醛的檢出限為0.01 g，定量下限為0.052 g。取0.2 g樣品時，本方法對甲醛的檢出濃度為0.001%,最低定量濃度為NO 2A0.0052%。+ HCHOo2nNHNH 2NO 2C7H 6N4

2、O4210.15=CH 2C6H 6N4O4198.14圖1甲醛衍生化反應(yīng)式3試劑除另有規(guī)定外，所用試劑均為分析純，水為實驗室用一級水。3.1甲醛標(biāo)準物質(zhì)水溶液。3.2 2,4-二硝基苯肼，純度 99.0% 3.8乙腈，色譜純。3.3三氯甲烷，色譜純，含量 99.9%3.4鹽酸(二20 =1.19 g/mL)。3.5氫氧化鈉。3.6磷酸氫二鈉(Na2HPO4?12H2O)。3.7磷酸二氫鈉(NaH2PO4?2H2O)。3.9甲醇，色譜純。3.10去離子水。3.11 2, 4-二硝基苯肼鹽酸溶液：稱取 2, 4-二硝基苯肼（3.2） 0.20 g,置于錐 形瓶中，先加濃鹽酸（3.4）40 mL使

3、溶解，必要時可超聲助溶，再加去離子水（3.10）60 mL,搖勻，即得。3.12氫氧化鈉溶液c（ NaOH）= 1 mol/L:稱取NaOH（ 3.5）10 g,加水適量溶 解后，轉(zhuǎn)移到250 mL量瓶中，用去離子水（3.10）稀釋并定容至刻度，搖勻， 即得。3.13 磷酸緩沖溶液c（ PO43-） 0.5 mol/L:精密稱定 NaH2PO4?2H2O（3.7）2.28 g 和Na2HPO4?12H2O（3.6）12.67 g,加水適量溶解后，轉(zhuǎn)移到100 mL量瓶中，加 水稀釋至刻度，搖勻，即得。3.14乙腈水溶液（9+1）：量取乙腈（3.8）180 mL,置錐形瓶中，加水20 mL, 搖

4、勻，即得。3.15甲醛系列標(biāo)準溶液：精密量取適量甲醛標(biāo)準物質(zhì)水溶液（3.1）置于10 mL量瓶中，加乙腈水溶液（3.14）稀釋至刻度，搖勻，得質(zhì)量濃度約為1.04 mg/mL 的甲醛儲備液，然后按照表1進行標(biāo)準溶液的配制。表1甲醛系列標(biāo)準溶液配制1）工作溶液溶液初始濃度量取體積定容終體積標(biāo)準工作溶液終濃度儲備溶液10.4 mg/mL1 mL10 mL1.04 mg/mL標(biāo)準溶液11.04 mg/mL2.5 mL10 mL260 gg/mL標(biāo)準溶液21.04 mg/mL2 mL10 mL208 gg/mL標(biāo)準溶液31.04 mg/mL1 mL10 mL104 gg/mL標(biāo)準溶液4104 gg/m

5、L5 mL10 mL52.0 gg/mL標(biāo)準溶液5104 ggmL1 mL10 mL10.4 gg/mL標(biāo)準溶液610.4 gg/mL5 mL10 mL5.2 gg/mL注1）：甲醛儲備溶液的初始濃度應(yīng)以甲醛準物質(zhì)水溶液的標(biāo)示量計算。4 儀器4.1 高效液相色譜儀：具有紫外檢測器。4.2 分析天平：感量 0.001 g。4.3 超聲波清洗儀。4.4 離心機。4.5 精密吸量管或精密移液器。4.6 渦旋振蕩器。5 分析步驟5.1 樣品預(yù)處理稱取化妝品樣品0.20 g （精確至0.001 g）,置具塞刻度管中，加乙腈水溶液（3.14）至2 mL,渦旋2 min,使混勻，以5000 rpm轉(zhuǎn)速離心5

6、 min，精密量取 上清液1 mL置5 mL離心管中，加水2 mL ,渦旋30 s,必要時以5000 rpm轉(zhuǎn) 速離心5 min，精密量取上清液1 mL置10 mL離心管中，力卩2, 4-二硝基苯肼鹽 酸溶液（3.11）0.4 mL，渦旋1 min，靜置2 min,加磷酸緩沖液（3.13）0.4 mL, 再加氫氧化鈉溶液（3.12）約1.9 mL調(diào)至中性，渦旋10 s,然后加入4 mL三氯 甲烷（3.3）,渦旋3 min ,以5000 rpm轉(zhuǎn)速離心10 min,取三氯甲烷層溶液1 mL 置離心管中，以5000 rpm轉(zhuǎn)速離心10 min，取三氯甲烷層溶液，作為色譜分析 待測液,備用。5.2

7、色譜參考條件色譜柱：C18色譜柱（250 X4.6 mm, 5 yn）；流動相：甲醇 +水（ 60+40）；流速： 1.0 mL/min；柱溫：25 C；檢測波長： 355 nm；進樣體積： 10 yL；運行時間： 25 min。5.3甲醛標(biāo)準曲線待測溶液的制備精密量取 5.2 卩 g/mL10.4 卩 g/m!52 卩 g/mL104 卩 g/mL208 卩 g/mL260 卩 g/mL 系列標(biāo)準工作溶液各1 mL置5 mL離心管中，加水2 mL，渦旋30 s,必要時以 5000 rpm轉(zhuǎn)速離心5 min，然后精密量取上清液1 mL置10 mL離心管中，加2， 4-二硝基苯肼鹽酸溶液（3.1

8、1）0.4 mL，渦旋1 min，靜置2 min，加磷酸緩沖液（3.13）0.4 mL,再加氫氧化鈉溶液（3.12）約1.9 mL調(diào)至中性，渦旋10 s,然后精密加入4 mL三氯甲烷（3.3），渦旋3 min，以5000 rpm轉(zhuǎn)速離心10 min,取三氯甲烷層溶液1 mL置離心管中，以5000 rpm轉(zhuǎn)速離心10 min，取三氯甲烷 層，作為色譜分析待測液，備用。5.4測定在“5.2項色譜條件下，取“5.3項下處理得到的標(biāo)準曲線待測溶液分別進樣，進行液相色譜分析，以系列標(biāo)準溶液濃度為橫坐標(biāo)，甲醛衍生物2, 4-二硝基苯腙的峰面積為縱坐標(biāo)，進行線性回歸，建立標(biāo)準曲線，得到回歸方程。取“ 5.1

9、 ”項下處理得到的待測溶液進樣10 uL根據(jù)測定的甲醛衍生物2, 4-二硝基苯腙 的峰面積，代入標(biāo)準曲線計算游離甲醛的質(zhì)量濃度。按“7計算”，計算樣品中游離甲醛的含量。6平行實驗按以上步驟操作，對同一樣品獨立進行測定獲得的兩次獨立測試結(jié)果的絕對 差值不得超過算術(shù)平均值的10%。7計算PV-（游離甲醛）二100m000式中：（游離甲醛）一一化妝品中游離甲醛的含量，%;m樣品取樣量，g;一一代入標(biāo)準曲線計算得到的樣品待測液中甲醛的質(zhì)量濃度，mg /mL ；V 樣品定容體積，本方法為2 mL 08回收率和精密度多家實驗室驗證的平均回收率為99.9% - 104%，相對標(biāo)準偏差小于7%(n=6)。9色譜圖RT: 0.00 - 24.997.30950000 E900000 上850000 2800000 2750000 700000 i650000 2600000 J550000 J500000 Z450000 W400000 r350000 300000 三250000 上200000 -=150000 100000 J50000 g0-=.01.66 2.729.4710.6912.5715.09101