CCK8試劑盒說明書

1、精品文檔隨意編輯cell counting kit （cck 試齊u盒）目”產品名稱規(guī)格包裝025cell counting kit100次1ml026cell counting kit500次5ml027cell counting kit1000 次10ml028cell counting kit3000 次30ml產品簡介：cell counting kit簡稱cck試劑盒，為 mtt法的替代方法，是一種基于wst （水溶性四陛鹽，化學名：2-（2-甲氧基-4-硝苯基）-3-（4-硝苯基）-5-（2,4-二磺基苯）-2h-四陛單鈉鹽）的廣泛應用于細胞增殖和 細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒

2、。cck法與其它檢測方法之間的比較:細胞計數方法mtt法xtt法wst-1 法cck法形成的formazan 的水溶性差好好好產品性狀粉末2瓶溶液溶液1瓶溶液使用方法配成溶液后使用現配現用無需預制無需預制檢測靈敏度高很高很高高檢測時間較長較短較短最短檢測波長560-600nm420-480nm420-480nm430-490nm細胞毒性高，細胞形態(tài)完全消失很低，細胞形態(tài)不變很低，細胞形態(tài)不變很低，細胞形態(tài)不變試劑穩(wěn)定性一般較差一般很好大批量樣品檢測可以非常適合非常適合非常適合便捷程度一般便捷便捷非常便捷cck用途：藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗操作說明：一、制作標準曲線（測

3、定細胞具體數量時）1、先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量，然后接種細胞。般要做3-5個細胞濃度梯度,2、按比例（例如：1/2比例）依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度, 每組3-6個復孔。3 、接種后培養(yǎng)2-4 小時使細胞貼壁，然后加 cck 試劑培養(yǎng)一定時間后測定 od 值，制作出一條以細胞數量為橫坐標（ x 軸） ， od 值為縱坐標（ y 軸）的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量（試用此標準曲線的前提是實驗的條件要一致，便于確定細胞的接種數量以及加入 cck 后的培養(yǎng)時間 。 ）二、細胞 活性 檢測1、在96孔板中接種細胞懸液（100科1/孔）。將培養(yǎng)板放

4、在培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)（在 37 c ,5% co2的條件下）。2、向每孔加入10 的cck溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響od值的讀數）。3 、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內孵育1-4 小時。4 、用酶標儀測定在450nm 處的吸光度。5、如果暫時不測定 od值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10 l 0.1m的hcl溶液或者1% w/vsds 溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24 小時內吸光度不會發(fā)生變化。三、細胞增值- 毒性檢測1、在96孔板中配置100科l的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預 培養(yǎng)24小時（在37 c, 5% co 2的條件下）。2、向培養(yǎng)板 加入10 不同濃度的待測物

5、質。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當的時間（例如： 6、12、24或48小時）。12后/24h4、想每孔加入10 cck溶液（注意不要再孔中生成氣泡，它們會影響od值的讀數）。5 、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內 孵育 1-4 小時 。 （ 2h 后）6 、用酶標儀測定在450nm 處的吸光度。7、如果暫時不測定 od值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10 l 0.1m的hcl溶液或者1% w/vsds 溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24 小時內吸光度不會發(fā)生變化。注意：如果待測物質有氧化性或還原性的話，可在加cck 之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次， 然后加入新的培

6、養(yǎng)基） ， 去掉藥物影響。 當然藥物影響比較小的情況下， 可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。備注：建議先做幾個孔摸索接種細胞的數量和加入 cck 試劑后的培養(yǎng)時間。 （怎么判斷哪個時間好？）有條件的情況下建議采用多通道移液器，可以減少平行孔減的差異。加入cck試劑時，建議斜貼著培養(yǎng)板壁加，不要插到培養(yǎng)基頁面下加，容易產生氣泡，會干擾od 值讀數。白細胞可能需要培養(yǎng)較長時間。當使用標準96孔板時，貼壁細胞的最小接種量至少為1,000個/孔（100科l培養(yǎng)基）。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500個/孔（100培養(yǎng)基）。如果要使用24孔板或6孔板實驗，請先計算每孔相應的接種量，并按照 每孔培養(yǎng)基總體積的 10% 加入 cck 溶液 。如果沒有450nm 的濾光片，可以使用吸光度在430-490 nm 之間的濾光片，但是450nm 濾光片的檢測靈敏度最高。培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影 響?；盍τ嬎悖杭毎盍? （%） =a（加藥）-a （空白）/a （0力口藥）-a （空白） x 100a （加藥） ：具有細胞、 cck 溶液和藥物溶液的孔的吸光度a （