常見緩沖液的配方

1、.常用貯液與溶液 1mol/L 亞精胺( Spermidine ): 溶解 2.55g 亞精胺于足量的水中，使終體 積為10ml。分裝成小份貯存于-20 Co1mol/L精胺(Spermine ):溶解3.48g精胺于足量的水中，使終體積為10ml。 分裝成小份貯存于 -20Co10mol/L 乙酸胺( ammonium acetate ):將 77.1g 乙酸胺溶解于水中，加 水定容至1L后，用0.22um孔徑的濾膜過濾除菌。10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(組分V或分子生物學(xué)試劑級(jí)，無 DNA 酶)于 9.5ml 水中(為減少變性， 須將蛋白加入水中，而不是將水

2、加入蛋白) ，蓋好蓋后，輕輕搖動(dòng)，直至 牛血清蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于 -20Co1mol/L二硫蘇糖醇(DTT):在二硫蘇糖醇5g的原裝瓶中加32.4ml水， 分成小份貯存于-20 C?；蜣D(zhuǎn)移100mg的二硫蘇糖醇至微量離心管，加 0.65ml的水配制成1mol/L二硫蘇糖醇溶液。8mol/L 乙酸鉀( potassium acetate )：溶解 78.5g 乙酸鉀于足量的水中， 加水定容到 100ml 。1mol/L氯化鉀(KCI):溶解7.46g氯化鉀于足量的水中，加水定容到100ml。 3mol/L 乙酸鈉( sodium acetat

3、e )：溶解 40.8g 的三水乙酸鈉于約 90ml 水 中，用冰乙酸調(diào)溶液的 pH至5.2，再加水定容到100ml o0.5mol/L EDTA:配制等摩爾的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液(0.5mol/L )，混合 后形成EDTA的三鈉鹽?；蚍Q取186.1g的Na2EDTA?2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至 1L 1mol/L HEPES:將 23.8gHEPES 溶于約 90ml 的水中，用 NaOH 調(diào) pH（6.8-8.2 ），然后用水定容至 100ml。1mol/L HCl :加 8.6ml 的濃鹽酸至 91.4ml 的水中。25mg/ml IPGT :溶解25

4、0mg的IPGT（異丙基硫代-p -D-半乳糖苷）于10ml 水中，分成小份貯存于-20 C。1mol/LMgCl2: 溶解 20.3g MgCl2 ?6H2O 于足量的水中，定容到 100ml 。100mmol/L PMSF :溶解174mg的PMSF （苯甲基磺酰氟）于足量的異丙醇中，定容到10ml。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹或貯存于 -20 C。20mg/ml蛋白酶K （proteinase K）:將200mg的蛋白酶L加入到9.5ml 水中，輕輕搖動(dòng)，直至蛋白酶K完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml , 然后分裝成小份貯存于 -20C。10mg/mlRnase （無 DNase

5、） （DNase free RNase）:溶解 10mg 的胰蛋白R(shí)NA酶于1ml的10mmol/L的乙酸鈉水溶液中（pH 5.0 ）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris HCl調(diào)pH至7.5，于-20 C貯存。（配制過程中要戴手套）5mol/L氯化鈉（NaCI）:溶解29.2g氯化鈉于足量的水中，定容至100ml。10N氫氧化鈉（NaOH）:溶解400g氫氧化鈉顆粒于約0.9L水的燒杯中（磁 力攪拌器攪拌） ，氫氧化鈉完全溶解后用水定容至 1L。10 %SDS （十二烷基硫酸鈉）：稱取100gSDS慢慢轉(zhuǎn)移到約含0.9L的水的 燒杯中，用磁力攪拌器攪拌直至

6、完全溶解。用水定容至1L。2mol/L 山梨（糖）醇（ Sorbitol ）：溶解 36.4g 山梨（糖）醇于足量水中使 終體積為 100ml 。100 %三氯乙酸（TCA）:在裝有500gTCA的試劑瓶中加入100ml水，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。 （稀釋液應(yīng)在臨用前配制）2.5 % X gal （ 5-溴-4-氯-3-吲哚（3 -半乳糖苷）：溶解25mg的X gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用鋁箔包裹裝液管，貯存于-20 C。100 x Denhardt 試劑（Denhardts regent ）成分及終濃度 配制 100ml 溶液各成分的用量2%聚蔗糖（ Ficoll， 40

7、0 型）2% 聚乙烯吡咯烷酮（ PVP-40）2%BSA （組分 V）水 2g2g2g加水至總體積為 100ml依照上表稱取各組分，溶于水中定容。過濾除菌及雜質(zhì)，分裝成小份于-20 C貯存。10 x標(biāo)準(zhǔn)DNA連接酶緩沖液（standard DNA ligase buffer ）（粘端、平端連接）成分及終濃度 配制 10ml 溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl100mmol/L MgCl2100mmol/L DTT 2mmol/L ATP5mmol/L 鹽酸亞精胺（可選）0.5mg/ml BSA （組分 V）（可選）水 5ml 1mol/L 貯液1ml 1mol/L 貯液1ml

8、1mol/L 貯液200ul 100 mmol/L 貯液50ul 1 mmol/L 貯液0.5ml 10 mg/mL 貯液2.25ml將配制好的緩沖液分裝成小份，貯存于-20 C。100 mmol/L dNTP 溶液（ dNTP solutions ）可以購買到100mmol/L純dNTPs貯液，-80 C可貯存至少6個(gè)月。10mmol/L dNTP 混合液成分及終濃度 配制 20ul 溶液各成分的用量10mmol/L dATP10mmol/L dCTP10mmol/L dGTP10mmol/L dTTP水 2ul 100 mmol/L dATP 貯液2ul 100 mmol/L dCTP 貯

9、液2ul 100 mmol/L dGTP 貯液2ul 100 mmol/L dTTP 貯液12ul20 PEG 8000/2.5M NaCl成分及終濃度 配制 10ml 溶液各成分的用量質(zhì)量濃度為 20聚乙二醇2.5mol/L 氯化鈉水 20g50ml 5 mol/L 氯化鈉 或 14.6g 固體氯化鈉補(bǔ)足 100ml加聚乙二醇于含有氯化鈉的燒杯中，加水至終體積100ml ，用磁力攪拌器攪拌溶解。20 XSSC成分及終濃度 配制 1L 溶液各成分的用量300mmol/L 檸檬酸三鈉（二水）3mol/L 氯化鈉水 88.2g175.3g補(bǔ)足 1L溶解檸檬酸三鈉（二水）和氯化鈉于約 0.9L 水中

10、，加幾滴 10N NaOH 溶 液調(diào) pH 為 7.0，用水補(bǔ)足體積至 1L。DEPC （焦碳酸二乙酯）處理水加100ul DEPC于100ml水中，使 DEPC的體積分?jǐn)?shù)為 0.1 %。在37 C溫浴至少12h，然后在15 psi條件下高壓滅菌20min，以使殘余的DEPC 失活。DEPC會(huì)與胺起反應(yīng)，不可用 DEPC處理Tris緩沖液。甲酰胺（ deionized formamide ）直接購買或加 Dowex XG8 混合樹脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中，用磁力攪拌器輕輕攪拌1h，可去除甲酰胺中的離子。經(jīng) Whatman 1號(hào)濾紙過濾 除去樹脂后分成小份，充氮?dú)庥?80 C貯存（防止氧化）。

11、磷酸緩沖液（ phosphate buffer ）按照下表所給定的體積， 混合 1 mol/L 的磷酸二氫鈉（單堿） 和 1mol/L 磷 酸氫二鈉（雙堿）貯液，獲得所需 pH 的磷酸緩沖液。配制 1 mol/L 的磷 酸二氫鈉（NaH2PO4?H2O）貯液：溶解 138g于足量水中，使終體積為 1L;1mol/L 磷酸氫二鈉（Na2HPO4）貯液:溶解142g于足量水中使終體積 為 1L。1mol/L 磷酸二氫鈉（ ml） 1mol/L 磷酸氫二鈉（ ml） 最終 pH 值8778508151236.0685625565510450390330280150185225265315375435

12、4905506106707206.16.26.3 6.46.56.66.76.86.97.07.17.2TE (用于懸浮和貯存 DNA)成分及終濃度 配制 100ml 溶液各成分的用量10mmol/L Tris HCl1mmol/L EDTA水 1ml 1mol/L Tris-HCI (pH7.4-8.0 , 25 C)200ul 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0 )98.8mlTris 緩沖液( Tris-HCl buffer )將121g的Tris堿溶解于約0.9L水中，再根據(jù)所要求的 pH (25 C下)加一定量的濃鹽酸( 11.6N) ，用水調(diào)整終體積至 1L。濃鹽酸的體積

13、( ml) pH 8.614 2128.53846566671.376 9.08.88.68.48.28.07.87.67.47.2二.電泳緩沖液、染料和凝膠加樣液電泳緩沖液50 X Tris-乙酸（TAE）緩沖液成分及終濃度 配制 1L 溶液各成分的用量2mol/L Tris 堿1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA水 242g57.1 ml 的冰乙酸( 17.4 mol/L )200ml 的 0.5 mol/L EDTA ( pH 8.0 )補(bǔ)足 1L5X Tris-硼酸(TBE)緩沖液成分及終濃度 配制 1L 溶液各成分的用量445 mmol/L Tris 堿445 mmol/

14、L 硼酸鹽10 mmol/L EDTA水 54g27.5g 硼酸20 ml 的 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0)補(bǔ)足 1L染料1溴酚藍(lán)( bromophenol blue )加 1g 水溶性鈉型溴酚藍(lán)于 100ml 水中，攪拌或渦旋混合直到完全溶解1二甲苯青 FF( xylene cyanole FF )溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。10mg/ml 的溴化乙錠( ethidium bromide )小心稱取 1g 溴化乙錠，轉(zhuǎn)移到廣口瓶中，加 100ml 水，用磁力攪拌器攪拌直到完全溶解。用鋁箔包裹裝液管，于4 C貯存。凝膠上樣液（ gel loading s

15、olutions ）6 X堿性凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度 配制 10ml 溶液各成分用量0.3 N 氫氧化鈉6 mmol/L EDTA18 聚蔗糖（ 400 型）0.15 溴甲酚綠0.25 二甲苯青 FF水 300ul 10N 氫氧化鈉120ul 0.5mol/L EDTA （ pH8.0 ）1.8g15mg25mg補(bǔ)足到 10ml6 X聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度 配制 10ml 溶液各成分用量0.15 溴酚藍(lán)0.15 二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA 15 聚蔗糖（ 400 型）水 1.5ml 1 溴酚藍(lán)1.5ml 1 二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L

16、 EDTA （ pH8.0 ）1.5g補(bǔ)足到 10ml6X溴酚藍(lán)/二甲苯青/聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度 配制 10ml 溶液各成分用量0.25 溴酚藍(lán)0.25二甲苯青 FF15 聚蔗糖（ 400 型）水 2.5ml 1 溴酚藍(lán)2.5ml 1 二甲苯青 FF1.5g補(bǔ)足到 10ml6X甘油凝膠上樣液（4C貯存）成分及終濃度 配制 10ml 溶液各成分用量0.15 溴酚藍(lán)0.15二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA50甘油水 1.5ml 1 溴酚藍(lán)1.5ml 1 二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA （ pH8.0 ）3ml3.9ml6 X蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存

17、）成分及終濃度 配制 10ml 溶液各成分用量0.15 溴酚藍(lán)0.15 二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA40聚蔗糖水 1.5ml 1 溴酚藍(lán)1.5ml 1 二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA （ pH8.0 ）4g補(bǔ)足到 10ml10 X十二烷基硫酸鈉/甘油凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度 配制 10ml 溶液各成分用量0.2溴酚藍(lán)0.2 二甲苯青 FF200 mmol/L EDTA0.1 SDS 50甘油水 20mg20mg 4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)100ul 10 SDS5ml補(bǔ)足到 10ml三.常用培養(yǎng)基I Q拉差甘LB 培養(yǎng)基將下列組

18、分溶解在 0.9L 水中：蛋白胨 10g酵母提取物 5g氯化鈉 10g如果需要用1N NaOH (1ml)調(diào)整pH至7.0，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉 12g/L, 上層瓊脂平板添加瓊脂粉 7g/L 。SOB 培養(yǎng)基將下列組分溶解在 0.9L 水中：蛋白胨 20g酵母提取物 5g氯化鈉 0.5g1 mol/L 氯化鉀 2.5ml用水補(bǔ)足體積到1L。分成100ml的小份，高壓滅菌。培養(yǎng)基冷卻到室溫 后，再在每 100ml 的小份中加 1ml 滅過菌的 1mol/L 氯化鎂。SOC 培養(yǎng)基成分、方法同 SOB 培養(yǎng)基的配制， 只是在培養(yǎng)基冷卻到室溫后， 除了在每 100ml 的小份中

19、加 1ml 滅過菌的 1mol/L 氯化鎂外，再加 2ml 滅菌的 1mol/L 葡萄糖（ 18g 葡萄糖溶于足夠水中，再用水補(bǔ)足到 100ml ，用 0.22um 的 濾膜過濾除菌） 。TQTB 培養(yǎng)基將下列組分溶解在 0.9L 水中：蛋白胨 12g酵母提取物 24g甘油 4ml各組分溶解后高壓滅菌。冷卻到60 C,再加100ml滅菌的170mmol/LKH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4 的溶液（2.31g 的 KH2PO4 和 12.54gK2HPO4 溶在足量的水中,使終體積為 100ml 。高壓滅菌或用 0.22um 的濾膜過濾 除菌）。2X YT培養(yǎng)基將下列組分溶解在

20、0.9L 水中：蛋白胨 16g酵母提取物 10g氯化鈉 4ml如果需要用1N NaOH （1ml）調(diào)整pH至7.0，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊 脂平板需添加瓊脂粉 12g/L, 上層瓊脂平板添加瓊脂粉 7g/L 。YPD培養(yǎng)基將下列組分溶解在 0.9L 水中： 蛋白胨 20g酵母提取物 10g葡萄糖 20g用水補(bǔ)足體積為 1L 后，高壓滅菌。建議在高壓滅菌之前，對(duì)色氨酸營養(yǎng) 缺陷型每升培養(yǎng)基添加 1.6g 色氨酸，因?yàn)?YPD 培養(yǎng)基是色氨酸限制型培 養(yǎng)基。為了配制平板，需要在高壓滅菌前加入 20g 瓊脂粉。 四.常用抗生素氨芐青霉素( ampicillin )( 100mg/ml )溶解 1g 氨芐青霉素鈉鹽于足量的水中，最后定容至 10ml 。分裝成小份于 -20 C貯存。常以25ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長培養(yǎng)基。 羧芐青霉素( carbenicillin )(50mg/ml )溶解 0.5g 羧芐青霉素二鈉鹽于足量的水中，最后定容至 10ml 。分裝成小 份于-20 C貯存。常以25ug/ml50ug