三種藥物血藥濃度的高效液相色譜方法

1、三種藥物血藥濃度的高效液相色譜方法癲癇是一種反復(fù)發(fā)作的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，需長(zhǎng)期用藥才能控制發(fā)病，有的患者甚至需要終身用藥。苯巴比妥（ PB） 、苯妥英鈉（ PH） 和卡馬西平（ CBZ） 是臨床常用的抗癲癇藥物，廣泛應(yīng)用于兒童患者。PB 主要用于癲癇大發(fā)作及癲癇持續(xù)狀態(tài)，PH 是治療癲癇大發(fā)作和局限性發(fā)作的首選藥物，CBZ 是治療單純性局限性發(fā)作和大發(fā)作的首選藥物之一1.這三種藥物治療指數(shù)低、安全范圍窄、個(gè)體差異大，使用不當(dāng)易致療效不佳或嚴(yán)重不良反應(yīng)。因其血藥濃度與療效和毒性關(guān)系密切，故監(jiān)測(cè)其血藥濃度可提高臨床用藥的有效性和安全性。本研究以艾司唑侖為內(nèi)標(biāo)，建立了同時(shí)測(cè)定 PB、PH、CBZ 三種藥

2、物血藥濃度的高效液相色譜（ HPLC） 方法，現(xiàn)報(bào)道如下。1 儀器和試藥。1. 1 儀器。Agilent1260 高效液相色譜儀（ G1314F 紫外檢測(cè)器，Chemstation 工作站） ; AUW220D 電子天平（ 日本島津） ;TG16-W 微量高速離心機(jī)（ 長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司） ; WH-2 微量旋渦混合儀（ 上海滬西分析儀器廠） .1. 2 試藥。PB 對(duì)照品（ 171222-201201 ） 、PH 對(duì)照品（ 100210-201110） 、CBZ 對(duì)照品（ 100142-201105） 、艾司唑侖對(duì)照品（ 171219-201112） 均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所（

3、供含量測(cè)定用） .甲醇為色譜純，乙酸乙酯為分析純，水為二重純化水。2 方法和結(jié)果。2. 1 色譜條件。色譜柱 Hypersil ODS2（ 150 mm×4. 6 mm,5 μm） ,檢測(cè)波長(zhǎng) 240 nm,柱溫 25 ，流速 0. 9 mL/min,進(jìn)樣量10 μL,流動(dòng)相甲醇-水（ 54 46） .以內(nèi)標(biāo)法定量。2. 2 對(duì)照品溶液配制。精密稱取 PB 對(duì)照品 13. 03 mg 于 25 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容，得濃度為 0. 521 2 mg/mL 的 PB 對(duì)照品溶液，取 2 mL 于 25 mL 容量瓶中，再用甲醇定容，得濃度為 41. 70 &m

4、u;g/mL 的 PB 對(duì)照品溶液。精密稱取 PH 對(duì)照品 11. 33 mg 于 25 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容，得濃度為 0. 453 2 mg/mL 的 PH 對(duì)照品溶液，取 2 mL 于 25 mL 容量瓶中，再用甲醇定容，得濃度為 36. 26 μg/mL 的 PH 對(duì)照品溶液。精密稱取 CBZ 對(duì)照品 9. 25 mg 于 25 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容，得濃度為 0. 370 0 mg/mL 的 CBZ 對(duì)照品溶液，取 2 mL 于 25 mL 容量瓶中，再用甲醇定容，得濃度為 29. 60 μg/mL 的 CBZ 對(duì)照品溶液。精密稱取艾司唑侖對(duì)照品

5、10. 10 mg 于 25 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容，得濃度為 0. 404 0 mg/mL 的艾司唑侖對(duì)照品溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液備用。2. 3 血漿樣品處理。精密量取血漿樣品 400 μL 于 10 mL 離心管中，加內(nèi)標(biāo)溶液 10 μL、乙酸乙酯 3 mL,混勻，3 000 r/min 離心10 min,取上清液用氮?dú)獯蹈桑?100 μL 甲醇復(fù)溶，取10 μL 進(jìn)樣。2. 4 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍。結(jié)果見(jiàn)表 1.取空白血漿，分別加入不同量的 PB、PH 和 CBZ 對(duì)照品溶液，混勻，作為標(biāo)準(zhǔn)曲線系列濃度標(biāo)準(zhǔn)品，按2. 3;項(xiàng)下方法處理，用內(nèi)標(biāo)法定量，分別計(jì)

6、算得三藥標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程。2. 5 專屬性實(shí)驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)圖 1.PB、PH、CBZ 及內(nèi)標(biāo)物艾司唑侖出峰處無(wú)雜質(zhì)干擾，峰形尖銳，保留時(shí)間分別為 4. 6、8. 9、10. 5、14. 3 min.2. 6 精密度實(shí)驗(yàn)。分別配制低、中、高三個(gè)不同濃度的 PB、PH、CBZ 混合血漿樣品，按2. 3;項(xiàng)下方法處理，每個(gè)濃度平行測(cè)定5 次，連續(xù)測(cè)定 5 d,記錄測(cè)得濃度，計(jì)算日內(nèi)、日間精密度（ RSD） 及相對(duì)偏差。三種藥物低、中、高三個(gè)不同濃度的日內(nèi)、日間 RSD 均80 μg/mL5） ,最高血藥濃度為 54. 31 μg/mL.有 2 例次出現(xiàn)輕度中毒癥狀，其中 1 例次出現(xiàn)嗜睡，

7、血藥濃度 46. 72 μg/mL; 1 例次出現(xiàn)感覺(jué)遲鈍，血藥濃度 50. 24 μg/mL.（ 2） 3 例次 PH 血藥濃度超過(guò)了有效血藥濃度范圍（ 10 20 μg/mL） ,但未達(dá)到中毒血藥濃度（ PH 中毒血藥濃度40 μg/mL,致死血藥濃度100 μg/mL5） ,均未出現(xiàn)中毒癥狀。（ 3）20 例次 CBZ 血藥濃度達(dá)到了中毒血藥濃度（ CBZ 中毒血藥濃度12 μg/mL5） ,最高為 16. 28μg/mL.4 例次出現(xiàn)中毒癥狀，其中 2 例次出現(xiàn)惡心嘔吐，2 例次出現(xiàn)少尿。（ 4） 三種藥物血藥濃度超過(guò)最大有效血藥濃度時(shí)，雖然總有效率可達(dá) 100%,但不能說(shuō)明血藥濃度越高效果越好，而引起的藥物不良反應(yīng)應(yīng)引起高度重視。參考文獻(xiàn)：1楊寶峰。 藥理學(xué)M. 第 7 版。 北京： 人民衛(wèi)生出版社，2010: 133-136.2翁愛(ài)彬，方劍英，鄭荔莉。 RPHPLC 法同時(shí)測(cè)多索茶堿和3 種抗癲癇藥血藥濃度J. 湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013,33（ 6） : 79-81.3張志國(guó)，李 冬，方 芳。 苯巴比妥、苯妥英鈉及卡馬西平血清藥物濃度檢測(cè)方法驗(yàn)證J. 黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，