XXX藥品中殘留溶劑內標法檢測方法驗證方案

1、版本號： 01XXX中甲醇、乙醇、正己烷、甲苯殘留檢測方法驗證方案方案編號：姓名職位簽名日期起草XXX質量研究員審核XXX質量副部長審核XXXQA批準XXX質量部長第 1 頁 共 12 頁版本號： 01概述 XXX 是生產 XX 的起始物料，生產該物料工藝中使用的溶劑有：甲醇、乙 醇、正己烷、甲苯。根據 ICH 要求需要開發(fā)方法對這些殘留溶劑進行檢測，該方 法屬于雜質定量分析，根據 USP 求需要驗證的內容有：系統(tǒng)適用性、專 屬性、線性、范圍、靈敏度、準確度、重復性、中間精密度、耐用性。1. 驗證所需試劑甲苯AR級或更高級別甲醇AR級或更高級別乙醇AR級或更高級別正己烷AR級或更高級別正庚烷A

2、R級或更高級別N,N-二甲基甲酰胺（ DMF） HPLC 級或更高級別2. 試驗所需儀器或設備 氣相色譜儀帶有 FID 檢測器 氣相色譜柱 DB-624，30 m0.53 mm，3.0 m石英毛細管柱 高純氮氣量瓶移液管 電子分析天平（十萬分之一）3. 驗證內容3.1 系統(tǒng)適用性目的： 對由分析設備、 實驗操作、 被分析供試品組成的完整的系統(tǒng)進行評估 接受標準： 計算對照溶液圖譜中甲醇、乙醇、正己烷、正庚烷、甲苯峰面積的相對標準偏差 RSD%，均不得過 5%。3.1.1 溶液制備 見附件分析方法中對照溶液的制備。3.1.2 分析待色譜系統(tǒng)穩(wěn)定后，按下面序列表進樣分析名稱進樣針數空白（溶劑）2

3、針或更多對照品溶液（ S）6針3.2 專屬性目的： 確保采用的方法能正確測定出被測物的特性。 接受標準：第 2 頁 共 12 頁版本號： 01空白溶液圖譜中目標峰出峰位置附近無顯著干擾峰。分離度測試溶液（ RS）圖譜中目標峰與相鄰峰的分離度應不小于 1.5 。3.2.1 溶液制備樣品溶液 制成濃度約為 20mg/ml的 DMF溶液。稱取 1.0g 樣品置 50ml 量瓶 中，加溶劑約 30ml 使溶解，加溶劑定容至刻度，搖勻。標記為 Sample。 乙醇定位溶液 制成乙醇濃度為 0.08%（ v/v ）的 DMF溶液。量取乙醇 40l 置 50ml 量瓶中加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，標記為

4、Ethanol 。 甲醇定位溶液 制成甲醇濃度為 0.002%（ v/v ）的 DMF溶液。量取甲醇 50l 置 50ml 量瓶中加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，標記為 MCB，Y 再量取該溶 液 1ml 置 50ml 量瓶中加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，標記為 Methanol 。 正己烷定位溶液 制成正己烷濃度為 0.002%（v/v ）的 DMF溶液。量取正己 烷 50 l 置 50ml 量瓶中加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，標記為 HCBY，再 量取該溶液 1ml 置 50ml 量瓶中加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，標記為 Hexane。甲苯定位溶液 制成甲苯濃度為 0.002%（ v/v

5、）的 DMF溶液。量取甲苯 50l 置 50ml 量瓶中加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，標記為 TCBY，再量取該溶 液 1ml 置 50ml 量瓶中加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，標記為 Toluene 。 正庚烷定位溶液 制成正庚烷濃度為 0.04%（v/v ）的 DMF溶液。量取正庚烷 20l 置 50ml 量瓶中加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，標記為 Heptane。 分離度測試溶液 制成含供試品 20mg/ml、其他各溶劑濃度同工作對照品溶 液的混合溶液。分別量取乙醇 40l 、正庚烷 20l 、MCBY溶液 1ml、HCBY 溶液 1ml、TCBY溶液 1ml 置已稱有 1.0g 樣品并

6、加 30ml 溶劑溶解的量瓶中， 再加溶劑定容至刻度，搖勻，標記為 RS。3.2.2 分析待色譜系統(tǒng)穩(wěn)定后，按下面序列表進樣分析名稱進樣針數空白（溶劑）2 針或更多Sample1針對照品溶液（ S）6針Ethanol1針Methanol1針Hexane1針Toluene1針Heptane1針第 3 頁 共 12 頁版本號： 01分離度測試溶液（ RS）1針3.3 線性目的：測試在給定的范圍內， 待測物的響應值與供試品中被分析物的濃度成正比 例關系的程度。接受標準： 以甲醇、乙醇、正己烷、甲苯測試所得峰面積與正庚烷峰面積比值為縱坐標， 濃度為橫坐標分別計算線性相關系數 r ，均應不小于 0.95

7、0 。3.3.1 溶液制備量取乙醇 6 ml 、甲苯、甲醇、正己烷各 0.5ml ，置 50ml 量瓶中，加溶劑稀 釋至刻度搖勻，作為線性儲備溶液 a。量取線性儲備溶液 a 0.5ml 置 50ml 量瓶中，加溶劑稀釋至刻度搖勻，標記 為線性儲備液 b.取線性儲備溶液a 1ml ，內標溶液 5ml 置 50ml 量瓶中，加溶劑至刻度，搖勻，標記為 L-01 。取線性儲備溶液a 1.5ml ，內標溶液10ml 置 100ml 量瓶中，加溶劑至刻度，搖勻，標記為 L-02 。取線性儲備溶液a 0.5ml ，內標溶液5ml 置 50ml 量瓶中，加溶劑至刻度，搖勻，標記為 L-03 。取線性儲備溶液

8、a 0.5ml ，內標溶液10ml 置 100ml 量瓶中，加溶劑至刻度，搖勻，標記為 L-04 。取線性儲備溶液 b 2ml 勻，標記為 L-05 。取線性儲備溶液 b 1ml 勻，標記為 L-06 。取線性儲備溶液 b 1ml內標溶液 1ml 置 10ml內標溶液 1ml 置 10ml內標溶液 2ml 置 20ml量瓶中，加溶劑至刻度，搖量瓶中，加溶劑至刻度，搖量瓶中，加溶劑至刻度，搖勻，標記為 L-07標記乙醇（% W/W）正己烷（ %W/W）甲醇（% W/W）甲苯（ % W/W）L-019.480.660.790.87L-027.110.4950.59250.6525L-034.740

9、.330.3950.435第 4 頁 共 12 頁版本號： 01L-042.370.1650.19750.2175L-050.9480.0660.0790.087L-060.4740.0330.03950.0435L-070.2370.01650.019750.021753.3.2 分析待色譜系統(tǒng)穩(wěn)定后，按下面序列表進樣分析名稱進樣針數空白（溶劑）2 針或更多對照品溶液（ S）6針空白（溶劑）1 針或更多L-07 、L-06 、L-05 、L-04 、L-03 、L-02 、L-01各1針3.4 檢出限 目的：確定試樣中的被測溶劑能夠被檢出的最低量。 接受標準：檢出濃度不得高于限度的 15%，

10、信噪比應 3.取線性項下的溶液， 當某個溶液中的某個溶劑峰信噪比不小于 3 時，對應溶 液濃度即可作為該溶劑檢出限濃度，即為檢出限；如果 L-07 溶液中某個溶劑峰 信噪比大于 10，則以 L-07 作為該溶液檢出限溶液，不再另外稀釋。3.5 定量限 目的：確定試樣中的被測溶劑能夠被定量的最低量。 接受標準：檢出濃度不得高于限度的 50%，信噪比應 10.當線性項下的某個溶液中的某個溶劑峰信噪比不小于10，該溶液濃度即可作為定量限濃度，即為定量限。如 L-07 溶液中某個對照品峰信噪比大于 10，則 以線性中 L-06 作為定量限溶液，不再另外稀釋。3.6 方法準確度 目的：考察殘留溶劑分析方

11、法測定結果與真實值或參考值接近的程度。 接受標準：單一回收率應在 75%125%之間。 各濃度水平內的回收率 RSD值應不大于 20%。3.6.1 溶液制備3.6.1.1 空白樣品溶液 取 XXX樣品一批，按附件方法供試品溶液制備精密稱 取三份，制備成供試品溶液，分別標記為： U-1、 U-2、 U-3。第 5 頁 共 12 頁版本號： 013.6.1.2 50% 工作濃度準確度測試溶液 量取乙醇 20ml、正己烷 0.5ml 、甲苯 0.5ml 、甲醇 0.5ml 置 100ml量瓶中，加溶劑稀釋至刻度， 搖勻，再量取該 0.5ml 、 內標溶液 25ml 置 250ml 的量瓶中，加入溶劑

12、稀釋至刻度搖勻，作為 50%濃度稀 釋液。稱取 1.0g 樣品置 50ml 量瓶中，加 50%濃度稀釋液使溶解，再加溶劑定容 至刻度，搖勻。平行制備三份，標記為 CR-01、CR-02、CR-03。3.6.1.3 100% 工作濃度準確度測試溶液 量取乙醇 20ml、正己烷 0.5ml 、甲苯 0.5ml 、甲醇 0.5ml 置 100ml 量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，再量取該 1ml、 內標溶液 25ml 置 250ml 的量瓶中，加入溶劑稀釋至刻度搖勻，作為 100%濃度稀 釋液。稱取 1.0g 樣品置 50ml 量瓶中，加 100%濃度稀釋液使溶解，再加溶劑定 容至刻度，搖勻。平行制

13、備三份，標記為 CR-04、 CR-05、CR-06。3.6.1.4 150% 工作濃度準確度測試溶液 量取乙醇 20ml、正己烷 0.5ml 、甲苯 0.5ml 、甲醇 0.5ml 置 100ml量瓶中，加溶劑稀釋至刻度， 搖勻，再量取該 1.5ml 、 內標溶液 25ml 置 250ml 的量瓶中，加入溶劑稀釋至刻度搖勻，作為 150%濃度稀 釋液。稱取 1.0g 樣品置 50ml 量瓶中，加 150%濃度稀釋液使溶解，再加溶劑定容至刻度，搖勻。平行制備三份，標記為 CR-07、 CR-08、CR-09。名稱150% Level100% Level50% Level乙醇4.74% (w/w

14、)3.16% (w/w)1.58% (w/w)正己烷0.099% (w/w)0.066% (w/w)0.033% (w/w)甲醇0.1185% (w/w)0.079% (w/w)0.0395% (w/w)甲苯0.1305% (w/w)0.087% (w/w)0.0435% (w/w)XXX20 mg/mL20 mg/mL20 mg/mL正庚烷0.04% (v/v)0.04% (v/v)0.04% (v/v)3.6.2 分析待色譜系統(tǒng)穩(wěn)定后， 按下面序列表進樣分析。 按內標法測定準確度測試溶液 中甲醇、乙醇、正己烷、甲苯的量，扣除空白殘留 , 而后除以溶液配制時甲醇、 乙醇、正己烷、甲苯的加入量

15、，即得回收率。名稱進樣針數空白（溶劑）2 針或更多對照品溶液（ S）6針空白（溶劑）1 針或更多空白樣品溶液（ U-1、U-2、 U-3）各1針準確度測試溶液（ CR-01、 CR-02、 CR-03、CR-04、CR-05、CR-06、CR-07、CR-08、CR-09）各1針第 6 頁 共 12 頁版本號： 01準確度測試溶液測得量 - 空白樣品含量計算公式：回收率 %= 100%對照加入量3.7 精密度 由于實際供試品中目標殘留溶劑有些能夠檢出， 有些未檢出， 此時比較供試 品含量測定結果無法反映精密度。故以準確度項下100%工作濃度測試溶液代替供試品考察精密度。3.7.1 重復性 目的

16、：在相同的操作條件下，測試在較短時間間隔精密度。 接受標準：六份測試溶液所得圖譜中甲醇、乙醇、正己烷、甲苯測得量的 RSD 值不得過 20%。3.7.1.1 溶液制備 按附件中供試品溶液制備方法 6.2.3 項制備 6 份，標記為 U-1、U-2、U-3、U-4、U-5、U-6。3.7.1.2 分析待色譜系統(tǒng)穩(wěn)定后，按下面序列表進樣分析名稱進樣針數空白（溶劑）2 針或更多對照品溶液（ S）6針空白（溶劑）1 針或更多重復性測試溶液（ U-1、U-2 、U-3、U-4、U-5、U-6）各1針3.8.2 中間精密度目的：按照重復性實驗的測定程序， 評價在改變實驗員、 日期條件下不同儀器上 所得結果

17、之間的精密度。接受標準：兩個分析人員測得每批殘留溶劑結果應一致： 甲醇、正己烷、 甲苯殘留量絕 對差值應不得過 0.1%; 乙醇殘留量絕對差值應不得過 0.7%.3.8.2.1 溶液制備 取三批產品，由兩個不同的分析員在不同日按供試品溶液 制備方法每批各制備兩份溶液并采用不同儀器進行檢測， 按內標法計算甲醇、 乙 醇、正己烷、甲苯的殘留量。3.8.2.2 分析 待色譜系統(tǒng)穩(wěn)定后，兩個分析人員各按下面序列表進樣分析。名稱進樣針數空白（溶劑）2 針或更多第 7 頁 共 12 頁版本號： 01對照品溶液（ S）6針空白（溶劑）1 針或更多中間精密度測試溶液 lot1 （U-1、U-2）各1針中間精密

18、度測試溶液 lot2 （U-1、U-2）各1針中間精密度測試溶液 lot3 （U-1、U-2）各1針3.9 耐用性 目的：確認在測定條件有微小變動時，測定結果不受影響的承受程度 接受標準：改變不同色譜條件后， 系統(tǒng)適用性應符合要求。 即對照溶液圖譜中甲醇、 乙 醇、正己烷、正庚烷、甲苯峰面積的相對標準偏差 RSD%值，均不得過 5%。3.9.1 溶液制備 按附件中 6.2.2.4 項對照溶液制備方法制備。3.9.2 分析3.9.2.1 不同載氣流速將載氣流速分別設置為 4.8ml/min 、5.2ml/min ，其余色譜條件按附件中色譜 條件設置。待色譜系統(tǒng)穩(wěn)定后，按下面序列表進樣分析。名稱進

19、樣針數空白（溶劑）2 針或更多對照品溶液（ S）6針3.9.2.2 不同進樣口溫度將進樣口溫度設置為 235、 245，其余色譜條件按附件中色譜條件設置。 待色譜系統(tǒng)穩(wěn)定后，按下面序列表進樣分析。名稱進樣針數空白（溶劑）2 針或更多對照品溶液（ S）6針3.9.2.3 不同檢測器溫度將檢測器溫度設置為 235、 245，其余色譜條件按附件中色譜條件設置。 待色譜系統(tǒng)穩(wěn)定后，按下面序列表進樣分析。名稱進樣針數空白（溶劑）2 針或更多對照品溶液（ S）6針3.9.2.4 不同色譜柱采用兩個批號的 30 m0.53 mm3.0 m石英毛細管柱， DB-624，其余色 譜條件按附件中色譜條件設置。待色

20、譜系統(tǒng)穩(wěn)定后，按下面序列表進樣分析。第 8 頁 共 12 頁版本號： 01名稱進樣針數空白（溶劑）2 針或更多對照品溶液（ S）6針4. 再驗證周期若分析方法的改變超出方法驗證范圍， 或產品生產工藝發(fā)生改變， 需對分析 方法進行再驗證。5. 偏差及糾正措施該方法驗證過程中， 是否產生了偏差， 若有， 應將所出現(xiàn)的所有偏差和所采 取的糾正措施應記錄在“偏差清單”中。對因發(fā)生偏差而導致的任何變更控制， 應有記錄并在報告中加以說明。序號項目偏差內容產生的原因及采取的措施負責人完成日期第 9 頁 共 12 頁版本號： 016. 附件 1 分析方法6.1 色譜條件儀器Agilent 6890 GC 帶F

21、ID 檢測器，或等效儀器色譜柱DB-624，30 m0.53 mm， 3.0 m石英毛細管柱載氣氮氣流速5.0ml/min柱溫起始溫度 40，以 3/min 的升溫速率升溫至 80， 保持 2min，再以 30/min 的升溫速率升溫至 200， 保持 10min。進樣口溫度240檢測器溫度240進樣量1l分流比5:16.2 溶液制備6.2.1 溶劑 N,N- 二甲基甲酰胺（ DMF）6.2.2 對照溶液6.2.2.1 內標溶液 制備 0.4%（ V/V）的正庚烷的 DMF溶液。精密量取 0.4ml 正 庚烷置 100ml 量瓶，加溶劑稀釋至刻度，搖勻。6.2.2.2 對照儲備液 1 量取乙醇

22、 20ml、正己烷 0.5ml 、甲苯 0.5ml 、甲醇 0.5ml 置 50ml 量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻。6.2.2.3 對照儲備液 2 量取 1ml對照儲備液 1置 100ml量瓶中加溶劑稀釋至刻 度，搖勻。6.2.2.4 工作對照溶液 量取 2ml 對照儲備液 2、1ml 內標溶液置 10ml 量瓶中， 加溶劑稀釋至刻度，搖勻，標記為 S。Solvent% V/V%W/W in sample密度 (g/ml)Ethanol0.083.160.789n-Hexane0.0020.0660.660Methanol0.0020.0790.793Toluene0.0020.0870.8666.2.3 供試品溶液 稱取 1.0g 樣品置 50ml 量瓶中，加溶劑約 30ml