生物制藥工藝學復習總結

1、生物制藥工藝學第四章萃取分離法（答案）一、 填空題1、常用的萃取方法有：單級萃取、多級錯流萃取、多級逆流萃取。2、影響溶劑萃取的因素：乳化和破乳化、PH的影響、溫度和萃取時間的影響、鹽析作用的影響、溶劑種類、用量及萃取方式的影響。3、破乳方法有：加入表面活性劑、離心、加電解質、加熱、吸附法破乳、高壓電破乳、稀 釋法、超濾、反應萃取。4、常用的破乳劑有：陽離子表面活性劑、陰離子表面活性劑。二、名詞解釋1、液-液萃取：是指用一種溶劑將物質從另一種溶劑（如發(fā)酵液）中提取出來的方法，根 據(jù)所用溶劑的性質不同或萃取機制不同，可將液-液萃取分為多種類型。2、萃取：在溶劑萃取中，被提取的溶液稱為料液，其中與

2、提取的物質稱溶質，而用以進行萃取的溶劑稱為萃取劑。 料液與萃取劑接觸后，料液中的溶質向萃取劑轉移的過程稱為萃取， 達到萃取平衡后，大部分溶質轉移到萃取劑中，這種含有溶質的萃取劑溶液稱為萃取液，而被萃取出溶質以后的料液稱為萃余液。3、反萃取（stripping）:是將萃取液與反萃取劑（含無機酸或堿的水溶液，有時也可以是 水）相接觸，使某種被萃入有機相的溶質轉入水相，可把這種過程看作萃取的逆過程。4、分配定律：即在一定溫度，一定壓力下，某一溶質在互不能相溶的兩種溶劑間分配時， 達到平衡后，在兩相中的活度之比為一常數(shù)。5、萃取因素：也稱萃取比，其定義為被萃取溶質進入萃取相的總量與該溶質在萃余相中總

3、量之比，通常以 E表示。6、 萃取率（percentage extraction）：生產(chǎn)上常用萃取率來表示一種萃取劑對某種溶質的萃 取能力，計算萃取效果，其公式為：7、分離因素：在同一萃取體系內(nèi)兩種溶質在同樣條件下分配系數(shù)的比值。三、 問答1、簡述溶劑萃取法的優(yōu)點。答：操作可連續(xù)化，反應速度快，生產(chǎn)周期短；對熱敏物質破壞少； 采用多級萃取時， 溶質濃縮倍數(shù)大、純化度高。2、簡述選擇萃取溶劑應遵守的原則。答：分配系數(shù)愈大愈好，若分配系數(shù)未知，則可根據(jù)“相似相容”的原則，選擇與藥物結構相近的溶劑；選擇分離因數(shù)大于 1的溶劑；料液與萃取溶劑的互溶度愈小愈好；盡量選擇毒性低的溶劑；溶劑的化學穩(wěn)定性要高

4、，腐蝕性低，沸點不宜太高，揮發(fā)性要小， 價格便宜，來源方便，便于回收。第五章 沉淀法（答案）一.填空1 .固相析出法主要包括鹽析法，有機溶劑沉淀法，等電點沉淀法，結晶法及其它多種沉淀方法等。2 .按照一般的習慣，析出物為晶體時稱為結晶法，析出物為無定形固體則稱為沉淀法。3 .影響鹽析的因素有：無機鹽的種類、溶質（蛋白質等）種類的影響、蛋白質濃度的影響、溫度的影響、pH的影響4 .結晶包括三個過程：形成過飽和溶液；（2）晶核形成 ;（3）晶體生長。5 .影晶體大小的主要因素，歸納起來與過飽和度、溫度、攪拌速度、晶種等直接有關。6 .晶體的質量主要是指晶體的大小、形狀和純度等 3個方面二.選擇1、

5、在一定的pH和溫度下改變離子強度（鹽濃度）進行鹽析，稱作（A ）A. Ks鹽析法B. 3鹽析法C.重復鹽析法D .分部鹽析法2、當向蛋白質純?nèi)芤褐屑尤胫行喳}時，蛋白質溶解度（C ）A.增大 B.減小 C.先增大，后減小 D.先減小，后增大3、鹽析法與有機溶劑沉淀法比較，其優(yōu)點是（B ）A.分辨率高B.變性作用小C.雜質易除D.沉淀易分離4、當向蛋白質純?nèi)芤褐屑尤胫行喳}時，蛋白質溶解度（C ）A.增大 B.減小 C.先增大，后減小 D.先減小，后增大5、鹽析常數(shù)Ks是生物大分子的特征常數(shù)，它與下列哪種因素關系密切。（B ）A.鹽濃度 B.鹽種類 C.溶質濃度 D介質pH6、將配基與可溶性的載體偶

6、聯(lián)后形成載體-配基復合物，該復合物可選擇性地與蛋白質結合，在一定條件下沉淀出來，此方法稱為（A）A.親和沉淀 B.聚合物沉淀C.金屬離子沉淀D.鹽析沉淀7、 將四環(huán)素粗品溶于 pH2的水中，用氨水調 pH4.5-4.6, 28 30C保溫，即有四環(huán)素沉淀結晶析出。此沉淀方法稱為（B ）A.有機溶劑結晶法B.等電點法 C.透析結晶法D.鹽析結晶法8、影響體大小的主要因素與下列哪些因素無關（D ）A.過飽和度 B.溫度 C.攪拌速度D.飽和度9、下列沉淀試劑不屬于表面活性劑的是（D）A. CTAB B. CPCC. SDS D. PEG三名詞解釋：1 .鹽析法：是利用各種生物分子在濃鹽溶液中溶解度

7、的差異，通過向溶液中引入一定數(shù)量的中性鹽，使目的物或雜蛋白以沉淀析出，達到純化目的的方法。Ks鹽析法。Ks2 . Ks鹽析：在一定的pH和溫度下改變離子強度（鹽濃度）進行鹽析，稱作鹽析法多用于提取液的前期分離工作。3 . 3鹽析：在一定離子強度下僅改變pH和溫度進行鹽析，稱作3鹽析法。在分離的后期階段，為了求得較好的分辨率，或者為了達到結晶的目的， 有時應用3鹽析法。3鹽析法由于溶質溶解度變化緩慢且變化幅度小，沉淀分辨率比KS 鹽析法好。4 親和沉淀: 利用親和反應原理，將配基與可溶性的載體偶聯(lián)后形成載體-配基復合物（親和沉淀劑） ，該復合物可選擇性地與蛋白質結合，在一定條件下沉淀出來。四 問

8、答1. 什么是鹽析作用？鹽析的原理是什么？答：鹽析作用：向蛋白質溶液中逐漸加入中性鹽，在高鹽濃度時，蛋白質溶解度隨之減小，發(fā)生了鹽析作用。 產(chǎn)生鹽析作用的一個原因是由于鹽離子與蛋白質表面具相反電性的離子基團結合， 形成離子對， 因此鹽離子部分中和了蛋白質的電性， 使蛋白質分子之間電排斥作用減弱而能相互靠攏，聚集起來。鹽析作用的另一個原因是由于中性鹽的親水性比蛋白質大，鹽離子在水中發(fā)生水化而使蛋白質脫去了水化膜， 暴露出疏水區(qū)域， 由于疏水區(qū)域的相互作用，使其沉淀。2. 如何選擇鹽析所用中性鹽？（ 1 ）鹽析作用要強。一般來說多價陰離子的鹽析作用強，有時多價陽離子反而使鹽析作用降低。（ 2 ）鹽

9、析用鹽要有足夠大的溶解度，且溶解度受溫度影響應盡可能小。這樣便于獲得高濃度鹽溶液， 有利于操作， 尤其是在較低溫度下的操作， 不致造成鹽結晶析出， 影響鹽析效果。（ 3 ）鹽析用鹽在生物學上是惰性的，不致影響蛋白質等生物分子的活性，最好不引入給分離或測定帶來麻煩的雜質。（ 4 ）來源豐富、經(jīng)濟。3. 有機溶劑沉淀的原理是什么？答：親水性有機溶劑加入溶液后降低了介質的介電常數(shù)，使溶質分子之間的靜電引力增加，聚集形成沉淀； 水溶性有機溶劑本身的水合作用降低了自由水的濃度， 壓縮了親水溶質分子表面原有水化層的厚度，降低了它的親水性，導致脫水凝集。4. 有機溶劑沉淀影響沉淀效果的因素有那些？答： （

10、1 ）有機溶劑種類及用量（ 2 ） pH 的影響（ 3 ）溫度無機鹽的含量（4）某些金屬離子的助沉淀作用（5）樣品濃度第六章 吸附分離法（答案）一、填空1、吸附劑按其化學結構可分為兩大類：一類是有機吸附劑，如活性炭 、 淀粉 、大孔吸附樹脂 等;另一類是無機吸附劑，如白陶土、 氧化鋁 、 硅膠、 硅藻土 等。2、常用的吸附劑有活性炭 、 硅膠 和 白陶土 等。3、大孔網(wǎng)狀聚合物吸附劑是在樹脂聚合時加入惰性致孔劑,待網(wǎng)格骨架固化和鏈結構單元形成后，用溶劑萃取或蒸儲水洗將致孔劑去掉，形成不受外界環(huán)境條件影響的孔隙，其孔徑遠大于24nmT,可達 100nm,故稱大孔。4、大孔網(wǎng)狀聚合物吸附劑按骨架的

11、極性強弱，可分為非極性、中等極性、極性和強極性吸 附劑四類。二、選擇題1、用大網(wǎng)格高聚物吸附劑吸附的弱酸性物質，一般用下列哪種溶液洗脫（D ）A.水 B. 高鹽 C. 低pH D. 高pH2、“類似物容易吸附類似物”的原則，一般極性吸附劑適宜于從何種溶劑中吸附極性物質（B ）A.極性溶劑 B.非極性溶劑 C.水D.溶劑3、“類似物容易吸附類似物”的原則，一般非極性吸附劑適宜于從下列何種溶劑中吸附非極性物質。（A ）A.極性溶劑 B.非極性溶劑 C.三氯甲烷 D.溶劑4、下列屬于無機吸附劑的是：（A）A. 白陶土 B.活性炭 C.淀粉D.纖維素5、活性炭在下列哪種溶劑中吸附能力最強？（A）A.

12、水 B.甲醇 C.乙醇 D. 三氯甲烷6、關于大孔樹脂洗脫條件的說法，錯誤的是：（A）A .最常用的是以高級醇、酮或其水溶液解吸。B. 對弱酸性物質可用堿來解吸。C.對弱堿性物質可用酸來解吸。D.如吸附系在高濃度鹽類溶液中進行時，則常常僅用水洗就能解吸下來。三、名詞解釋1 、 吸附法 (adsorption method) ：指利用吸附作用，將樣品中的生物活性物質或雜質吸附于適當?shù)奈絼┥?，利用吸附劑對活性物質和雜質間吸附能力的差異，使目的物和其它物質分離，達到濃縮和提純目的的方法。2 、 大網(wǎng)格高聚物吸附劑( macroreticular adsorbent ) ：在合成樹脂時，加入一種惰性

13、組分，它不參與聚合反應，但能和單體互溶，稱為致孔劑。 待網(wǎng)絡骨架固化和鏈結構單元形成后， 用溶劑萃取或水洗蒸餾的方法將致孔劑去掉， 就留下了不受外界條件影響的永久孔隙，其孔徑遠大于 24nm ，可達到 100nm 甚至1000nm 以上， 故稱 “大孔” 。 與大孔網(wǎng)狀離子交換樹脂相比， 它不含離子交換樹脂的功能團，僅保留了多孔的骨架，其性質與活性炭、硅膠等吸附劑相似，稱為大孔網(wǎng)狀聚合物吸附劑。四、問答題1、簡述吸附法的定義和特點。吸附法 (adsorption method) 指利用吸附作用，將樣品中的生物活性物質或雜質吸附于適當?shù)奈絼┥希?利用吸附劑對活性物質和雜質間吸附能力的差異， 使

14、目的物和其它物質分離，達到濃縮和提純目的的方法。吸附法具有下列特點：(1)設備簡單、操作簡便、價廉、安全。(2) 少用或不用有機溶劑， 吸附與洗脫過程中 pH 變化小， 較少引起生物活性物質的變性 失活。(3)天然吸附劑(特別是無機吸附劑) 的吸附性能和吸附條件較難控制，吸附選擇性差， 收率不高，難以連續(xù)操作。2、影響吸附的因素有哪些？ 吸附劑的特性：吸附現(xiàn)象在界面發(fā)生， 因此吸附劑比表面積愈大， 吸附量愈多。 通過活化的方法也可增加吸附劑的吸附容量。另外還要求吸附劑的機械強度好，吸附速度快 吸附物的性質：能使表面張力降低的物質， 易為表面所吸附； 一般極性吸附劑易吸附極性物質， 非極性吸附劑

15、易吸附非極性物質； 溶質從較易溶解的溶劑中被吸附時， 吸附量較少； 對于同系列物質，吸附量的變化是有規(guī)則的；吸附物若能與溶劑形成氫鍵，則吸附物極易溶于溶劑之中。 吸附條件:溫度：吸附熱越大，溫度對吸附的影響越大。PH值：溶液的pH值溶液pH值可控制吸附劑或吸附物解離情況，進而影響吸附量，對 蛋白質或酶類等兩性物質，一般在等電點附近吸附量最大。鹽濃度：溶劑的影響：單溶劑與混合溶劑對吸附作用有不同的影響。吸附物濃度與吸附劑用量一般情況下吸附物濃度大時，吸附量也大。第七章凝膠層析一、填空題1、凝膠層析的分離原理有凝膠層析的分離原理有平衡排除理論、擴散分離理論、流動分離理論。這三種分離原理是互相補充的

16、，在通常情況下平衡排除理論起主導作用；擴散分離理論的作用隨流速增加而加強;只有在流速很高時流動分離理論才起作用。2、瓊脂糖凝膠的一個特征是分離的分子量范圍非常大，其分離范圍隨著凝膠濃度上升而下_蹩，顆粒強度隨濃度上升而提電3、凝膠粒度的大小對分離效果有直接的影響。一般來說，細粒凝膠柱流速低，洗脫峰窄，分辨率 高，多用于精制分離 一等。粗粒凝膠柱流速高，洗脫峰平坦，分辨率 低 多用于多用于脫鹽等。4、在作分級分離時，為了提高分辨率，多采用比樣品體積大25倍以上的柱體積,25 以上的柱比，較 大 吸液量、較 細粒的凝膠固定相。5、溶質通過色譜柱時造成的峰加寬效應包括分子擴散、渦流擴散、流動相中傳質

17、阻力、固定相中傳質阻力。6、葡聚糖凝膠的孔徑大小取決于交聯(lián)度，其越小,凝膠孔徑越 大 ；而瓊脂糖凝膠的孔徑卻依賴于瓊脂糖濃度。二、選擇題1、凝膠層析中, A.凝膠排斥2、凝膠層析中, A.水合作用有時溶質的Kd1B.凝膠吸附有時小分子溶質的B.凝膠吸附其原因是C.柱床過長Kd1說明樹脂對交換離子吸引力（）。A.小于平衡離子B.大于平衡離子C.等于平衡離子D.其它三、名詞解釋1、蛇籠樹脂：由丙烯酸或甲基丙烯酸在季胺型陰離子交換樹脂（如 Dowex ）中聚合而成的一類樹脂稱蛇籠樹脂。它是一種兩性樹脂，它適宜于從有機物質（如甘油） 水溶液中吸附鹽類，再生時用水洗，就可將吸著的離子洗下來。2、尼柯爾斯

18、基方程式： 即其中 m1、 m2 及 C1、 C2 分別代表樹脂上和溶液中的兩種離子的濃度。 K 值的大小取決于樹脂和交換離子的性質，以及交換條件。K1時說明離子A1比離子A2對樹脂有較大的吸引力；反之，KV1時樹脂對A2的吸引力大于A1。3、偶極離子排斥作用：許多生化物質都是兩性物質。其中有些是偶極離子。因為它們即使凈電荷為零時， 正電中心和負電中心并不重疊， 遂成偶極。 偶極離子在離子交換過程中的行為是很特殊的?，F(xiàn)以氨基酸的離子交換為例。式中由于使用了鈉型樹脂， 被吸附氨基酸的羧基所帶的負電荷與樹脂磺酸基之負電荷產(chǎn)生排斥力。這就是所謂偶極離子的排斥作用。因此使樹脂對氨基酸的吸附量大大降低。

19、四、問答題1、簡述離子交換纖維素的特點有哪些？答： 離子交換纖維素的特點是： 離子交換纖維素為開放的長鏈骨架， 大分子物質能自由地在其中擴散和交換，親水性強，表面積大，吸易附大分子；交換基團稀疏，對大分子的實際交換容量大；吸附力弱，交換和洗脫條件緩和，不易引起變性；分辨力強，能分離復雜的生物大分子混合物。2、請以 CM-C 為例說明離子交換纖維素分離純化蛋白質時的洗脫方法有哪些？并說出各種方法的洗脫原理。答：無論是升高環(huán)境的 pH 還是降低 pH 或是增加離子強度都能將被吸附物質洗脫下來?，F(xiàn)以羧甲基纖維素為例加以說明，圖中 H2N-P 表示蛋白質， C 表示纖維素。（ 1 ） 、升高環(huán)境的pH

20、 ，使蛋白質在此pH 下失去電荷，從而喪失與CM-C 結合力而被洗脫下來。（ 2） 、降低環(huán)境的pH ，使CM-C 在此 pH 下不解離，從而不能吸附蛋白質而被洗脫下來。（ 3 ） 、用高濃度的同性離子根據(jù)質量作用定律將目的物離子取代下來。3、請以DEAE-C 為例說明離子交換纖維素分離純化蛋白質時的洗脫方法有哪些？并說出各種方法的洗脫原理。答：無論是升高環(huán)境的 pH 還是降低 pH 或是增加離子強度都能將被吸附物質洗脫下來。（ 1 ） 、升高環(huán)境的 pH ，使 DEAE-C 在此 pH 下不解離，從而不能吸附蛋白質而被洗脫下來。（2） 、降低環(huán)境的 pH ，使蛋白質在此pH 下失去電荷，從而

21、喪失與DEAE-C 結合力而被洗脫下來。（ 3 ） 、用高濃度的同性離子根據(jù)質量作用定律將目的物離子取代下來。4、由下圖，利用給出的兩種離子交換劑（ E1, E2）分離3種蛋白質（P1、P2、P3）,用箭頭流程圖表示（并指出 E1 ， E2 的類型 ）。E1 為陰離子交換劑E2 為陽離子交換劑5、下圖為離子交換法應用實例，請?zhí)顚懮a(chǎn)工藝流程中的空格（可選因素：陰離子交換樹脂，陽離子交換樹脂，0.05mol/L 氨水，0.1mol/L 氨水，2mol/L 氨水）。簡述從“濾液”開始，以后步驟的分離原理？答：陽離子交換樹脂，0.05mol/L 氨水，0.1mol/L 氨水，2mol/L 氨水濾液調

22、節(jié)到 pH2.5 時， 氨基酸帶正電荷， 因此選用陽離子交換樹脂， 之后根據(jù)氨基酸等電點的不同，依次用 0.05mol/L 氨水， 0.1mol/L 氨水， 2mol/L 氨水洗脫。酸性氨基酸等電點低，因此用 0.05mol/L 氨水就可洗脫下來，而堿性氨基酸等電點高，因此需用 2mol/L 氨水才能將之洗脫下來。第九章 親和純化技術1、親和層析洗脫方法有非專一性洗脫一、填空題特殊洗脫， 專一性洗脫。2、親和力大小除由親和對本身的 解離常數(shù) 決定外，還受許多因素的影響，其中包括親和吸附劑微環(huán)境、 載體空間位阻、 載體孔徑、 配基和配體的濃度、配基結構等。3、親和層析中常用作分離酶的配基有酶抑制

23、劑， 輔酶 ， 底物和 底物結構類似物 。4、親和層析中非專一性吸附有離子效應、疏水基團、復合親和力。5 、親和過濾指的是將親和層析和 膜過濾技術結合運用，它包括 親和錯流過濾和 親和膜分離兩大方法。二、選擇題1、下面關于親和層析載體的說法錯誤的是（ B ）A. 載體必須能充分功能化。B.載體必須有較好的理化穩(wěn)定性和生物親和性，盡量減少非專一性吸附。C.載體必須具有高度的水不溶性和親水性。D.理想的親和層析載體外觀上應為大小均勻的剛性小球。2、制備親和柱時，應首先選用的配基是（ A ）A.大分子的B.小分子的C.中等大小的D.不確定3、 親和層析的洗脫過程中， 在 流動相中加入 配基的洗脫方法

24、稱作 （C ）A.陰性洗脫B. 劇烈洗脫C.競爭洗脫D.非競爭洗脫4、 親和層析的洗脫過程中， 在流動相中減去配基的洗脫方法稱作（ D ）A.陰性洗脫B. 劇烈洗脫C.正洗脫D.負洗脫三、名詞解釋1、親和反膠團萃取（ Affinity-based resersed micellar extraction ） ：是指在反膠團相中除通常的表面活性劑（如 AOT ）以外，添加另一種親水頭部為目標分子的親和配基的助表面活性劑， 通過親和配基與目標分子的親和結合作用， 促進目標產(chǎn)物在反膠團相的分配，提高目標產(chǎn)物的分配系數(shù)和反膠團萃取分離的選擇性。2、親和膜：利用親和配基修飾微濾膜為親和吸附介質親和純化目

25、標蛋白質，是固定床親和層析的變型。將一張微濾膜比喻為一個固定床，則膜厚即為床層高度.優(yōu)點是傳質阻力小，達到吸附平衡的時間短，配基利用率高；壓降小，流速快，設備體積小，配基用量低。3、二次作用親和沉淀（ secondary-effect affinity precipitation ） ：利用在物理場（如 pH 、離子強度、溫度和添加金屬離子等）改變時溶解度下降、發(fā)生可逆 性沉淀的水溶性聚合物為載體固定親和配基， 制備親和沉淀介質。 親和介質結合目標分子后，通過改變物理場使介質與目標分子共同沉淀的方法成為二次作用親和沉淀。4、親和萃?。豪镁垡叶迹?PEG） /葡聚糖（Dx ）或聚乙二醇/無機

26、鹽等雙水相系統(tǒng)萃取分離蛋白質等大生物分子，特別是胞內(nèi)酶的雙水相萃取法。利用偶聯(lián)親和配基的 PEG 為成相聚合物進行目標產(chǎn)物的雙水相萃取，可在親和配基的親和結合作用下促進目標產(chǎn)物在PEG 相（上相）的分配，提高目標產(chǎn)物的分配系數(shù)和選擇性。5、親和吸附劑：由載體及配基偶聯(lián)構成，在親和層析中起可逆結合的特異性物質稱為配基（ Ligand ） ，與配基結合的層析介質稱為載體（ Matrix ） 。6、負洗脫：在雙底物反應中，與配基互補的酶的親和吸附，如果吸附取決于 A 物的存在與否，則洗脫液中除去A 物時，吸附在配基上的互補分子也會洗脫下來，這種洗脫方法也稱 負洗脫。四、問答題1、親和層析的原理是什么

27、？主要特點是什么？答：親和層析的設計和過程大致分為以下三步： 1 ）配基固定化：選擇合適的配基與不溶性的支撐載體偶鏈，或共價結合成具有特異親和性的分離介質； 2 ）吸附樣品：親和層析介質選擇性吸附酶或其他生物活性物質， 雜質與層析介質間沒有親和作用， 故不能被吸附而被洗滌去除；3）樣品解析：選擇適宜的條件使被吸附的親和介質上的酶或其他生物活性物質解析下柱。親和層析技術的最大優(yōu)點在于， 利用它從提取液中經(jīng)過一次簡單的處理便可得到所需的高純度活性物質。此外親和層析還有對設備要求不高、操作簡便、適用范圍廣、特異性強、分離速度快、分離效果好、分離條件溫和等優(yōu)點： 其主要缺點是親和吸附劑通用性較差，故要

28、分離一種物質差不多都得重新制備專用的吸附劑。 另外由于洗脫條件較苛刻， 須很好地控制洗脫條件，以避免生物活性物質的變性失活。2、對親和層析的公式進行說明。設KL=10-7 ，求 L0（ 6 分）Ve 為洗脫體積（ 1 分） ；V0 固定相（柱床）體積（ 1 分） ；L0為固定化配基濃度（1分）；KL為親和對解離常數(shù)（親和勢）（1分）；只有當阻留值10時，親和層析才是有效（分離）的。1+L0/ KL 10,將 KL =10-7 代入得：L0/10-7 9,所以，L0 9X10-7 （2 分）。3、何謂“手臂”？其長短與親和層析效果有何聯(lián)系？為什么？答：有時候用小分子物質 （如酶的輔因子）作為配基

29、直接偶聯(lián)至瓊脂糖凝膠珠粒上制備親和 層析介質時，盡管配基和酶間的親和力在合適的范圍內(nèi)，但其吸附容量往往是低的。這是由于酶的活性中心常是埋藏在其結構的內(nèi)部，它們與介質的空間障礙影響其與親和配基的結合作用。為了改變這種情況可在載體和配基間插入一個物質稱為“手臂”，以消除空間障礙。手臂的長度是有限的， 不可太短也不可太長， 太短不能起消除空間障礙的作用，太長往往會使非特異性吸附增加。4、從親和沉淀的機理和分離操作的角度出發(fā)，簡述親和沉淀純化技術的優(yōu)點。答：從親和沉淀的機理和分離操作的角度可以看出，親和沉淀純化技術具有如下優(yōu)點：1）配基與目標分子的親和結合作用在自由溶液中進行，無擴散傳質阻力，親和結合

30、速度快；2）親和配基裸露在溶液之中，可更有效的結合目標分子，即親和沉淀的配基利用率高；3）利用成熟的離心或過濾技術回收沉淀，易于規(guī)模放大；4）親和沉析法可用于高粘度或含微粒的料液中目標產(chǎn)物的純化，因此可在分離操作的較初期采用，有利于減少分離操作步驟，降低成本。同時，在分離過程的早期階段除去對目標產(chǎn)物有毒的雜質（如蛋白酶），有利于提高目標產(chǎn)物質量和收率。第十章離心技術一、填空：1、制備型離心機的轉子有 一角度.轉子、-水平 轉子、垂直轉子、 區(qū)帶。轉子。2、密度梯度的制備方法有：手工制備法、梯度混合儀制備法、離心形成法反復凍融法3、梯度的取出和收集方法：取代法、穿刺法、切割法、虹吸法二、選擇題：

31、在離心分離過程中，若離心機的轉速為 4000轉/分種，離心半徑為10厘米，則相對離心力為 （A ）A. 1789（g） B. 4000（g） C. 8000（g） D. 2000（g）名詞解釋:1、相對離心力：由于各種離心機轉子的半徑或者離心管至旋轉軸中心的距離不同，離心力而受變化， RCF 就是實際離心場轉化為重力加速度的倍數(shù)。2、離心力：在一定角度速度下作圓周運動的任何物體都受到的向外的力。離心力（Fc）的大小等于離心加速度3 2r與顆粒質量 m的乘積，即：F=m w 2r3、沉降速度：即在離心力作用下，物質粒子于單位時間內(nèi)沿離心力方向移動的距離。4、沉降系數(shù)：在單位離心力場中，顆粒的沉降

32、速度謂之“沉降系數(shù)”四、 問答題1、試述等密度離心法及其特點。2、 試述差分離心法：3、試述速度區(qū)帶離心法及其特點。4、密度梯度介質應具備哪些基本條件？5 、影響沉降速度的因素有哪些?6、簡述螺旋卸料離心機的特點7 、密度梯度離心常用的介質有哪幾類四、 問答題1 、答：當不同顆粒存在密度差時，在離心力場下，顆?；蛳蛳鲁两担蛳蛏细∑?，一直沿梯度移動到與其密度恰好相等的位置上 （即等密度點） 形成區(qū)帶， 這種離心分離方法稱為等密度離心法。等密度離心法是根據(jù)顆粒的密度差異進行的離心分離的一種方法。特點：（ 1 ）加樣位置自由.（ 2 ）離心平衡后，區(qū)帶的位置、形狀、不受離心時間的影響。（ 3 ）梯度的密度范圍包括樣品所有組分顆粒的密度。（ 4 ）分離依據(jù)是密度，與顆粒大小形狀無關。（ 5 ）離心力