011血型鑒定標(biāo)準(zhǔn)操作程序

1、長(zhǎng)沙市精神病醫(yī)院編號(hào)：CSJY-LJ-010版本號(hào)：2015-2.0血型鑒定標(biāo)準(zhǔn)操作程序臨床基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室SOP文件編寫人：唐日升 初審人：唐日升復(fù)審人：彭建宏 批準(zhǔn)人：彭建宏第1頁(yè)，共3頁(yè)實(shí)施日期:2015.11.1操作人員：經(jīng)批準(zhǔn)人授權(quán)的本院專業(yè)技術(shù)人員部門主管：彭建宏質(zhì)量控制員：唐日升目的：保證血型鑒定的操作規(guī)范化，為臨床提供準(zhǔn)確可靠的結(jié)果。該SOP變動(dòng)程序：本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動(dòng)，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、質(zhì)控主管、科主任。適用范圍血型檢驗(yàn)崗位工作人員方法學(xué)原理：ABO血型鑒定,是根據(jù)IgM類特異性血型抗體與紅細(xì)胞膜上特異性抗原結(jié)合能 出現(xiàn)凝集反應(yīng)

2、的原理，用已知IgM類特異性標(biāo)準(zhǔn)抗A和抗B血清來測(cè)定紅細(xì)胞 上有無相應(yīng)的A抗原或/和 B抗原。同時(shí)用已知標(biāo)準(zhǔn)A型紅細(xì)胞和B型紅細(xì)胞來 測(cè)定血清中有無相應(yīng)的天然IgM類抗A或/和抗B?！緲?biāo)本】1. 靜脈抗凝或不抗凝血1.52.0ml。【器材】載玻片、滴管、小試管、臺(tái)式離心機(jī)或微柱凝膠離心機(jī)、玻璃棒、蠟筆或記 號(hào)筆、顯微鏡等?！驹噭?.1抗-A、抗-B試劑1.2 5呀口 10%A B及O型試劑紅細(xì)胞鹽水懸液1.3受檢者血清1.4受檢者5%0 10啣細(xì)胞鹽水懸液1.5 10mr 60mmiS明的玻璃試管或塑料試管【操作步驟】2.1 試管法2.1.1查抗原：取潔凈小試管2支，分別標(biāo)明抗-A、抗-B，

3、用滴管加入抗-A 和抗-B分型血清各2滴于試管底部,再以滴管分別加入受檢者 5啣細(xì)胞鹽 水懸液1滴，混勻。2.1.2查抗體：取潔凈小試管3支，分別標(biāo)明A型、B型和0型細(xì)胞。用滴管 分別加入受檢者血清2滴于試管底部，再分別以滴管加入 A B 0型5%式劑紅 細(xì)胞懸液1滴，混勻。2.1.3立即lOOOrpm離心（離心時(shí)間為離心機(jī)校準(zhǔn)時(shí)間）。2.1.4輕輕搖動(dòng)試管，使沉于管底的紅細(xì)胞浮起，先以肉眼觀察有無凝集（或溶血）現(xiàn)象，如肉眼觀察不見凝集，應(yīng)將反應(yīng)物倒于玻片上，再以低倍鏡下觀察有 無凝集。2.1.5凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)4+=紅細(xì)胞凝集成一大塊，血清清晰透明；3+=紅細(xì)胞凝集成幾大塊,血清尚清晰；2+

4、=紅細(xì)胞成中等大凝塊,游離紅細(xì)胞1/2 ； 1+=紅細(xì)胞成小凝集塊，游離紅細(xì)胞1/2 ； =紅細(xì)胞成微小凝集塊，周圍有很多游離紅細(xì)胞。MF混合凝集外觀（mixed fieLd ）是指鏡下可見少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而極大多 數(shù)紅細(xì)胞仍呈分散分布。-表示陰性，鏡下未見凝集，紅細(xì)胞均勻分布。2.1.6 報(bào)告受檢者紅細(xì)胞ABC血型如下表所示：ABO血型鑒定結(jié)果判斷分型血清+受檢者紅細(xì)胞受檢者血清+試劑紅細(xì)胞抗-A抗-B受檢者血型A 細(xì)胞B 細(xì)胞 0 細(xì)胞+一A一+ 一一+B+一 一一一0+ 一+AB一一 一注+為凝集；-為不凝集2.2玻片法2.2.1查抗原：取清潔玻片1張，用記號(hào)筆分別標(biāo)明抗-A、抗-B，用

5、滴管加 入抗-A和抗-B分型血清各1滴于玻片標(biāo)記相對(duì)應(yīng)處，再以滴管分別加入受 檢者10%!細(xì)胞鹽水懸液1滴，混勻。2.2.2查抗體：取清潔玻片1張，用記號(hào)筆分別標(biāo)明A型、B型和O型細(xì)胞。 用滴管分別加入受檢者血清1滴于玻片標(biāo)記相對(duì)應(yīng)處，再分別以滴管加入 A、B、 O型10%4劑紅細(xì)胞懸液1滴，混勻。2.2.3將玻片不斷輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，使血清與細(xì)胞充分混勻，連續(xù)約15min,以肉眼觀察有無凝集反應(yīng)。如肉眼觀察不見凝集，應(yīng)再以低倍鏡下觀察有無凝集或溶血。2.2.4報(bào)告受檢者紅細(xì)胞ABO血型如下表所示：長(zhǎng)沙市精神病醫(yī)院編號(hào)：CSJY-LJ-011版本號(hào)：2015-2.0凝聚胺介質(zhì)交叉配血法臨床基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室S

6、OP文件編寫人：唐日升 初審人：唐日升復(fù)審人：彭建宏 批準(zhǔn)人：彭建宏第1頁(yè)，共2頁(yè)實(shí)施日期:2015.11.13 凝膠微柱法（1）標(biāo)本：同試管法（2）原理：人紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體發(fā)生特異性免疫反應(yīng)（其本質(zhì)為血凝反應(yīng)）；檢測(cè)系統(tǒng)是在微柱中（載體）將反應(yīng)介質(zhì)凝膠（sephdexG-100或50葡聚糖膠）或小玻璃裝入微柱中；凝膠或小玻璃珠的間隙具有分子篩作用。 凝集的紅細(xì)胞（結(jié)合的）被留在微柱上面成帶狀或凝集顆粒散布凝膠中間。未凝集的紅細(xì)胞（即未結(jié)合、游離的）通過離心后沉入微柱的底部；微柱凝膠中所 含的特異性單克隆抗 A、抗B試劑檢測(cè)紅細(xì)胞上相應(yīng)的血型抗原，從而鑒定紅 細(xì)胞的血型。（3）操作：在微柱

7、凝膠檢測(cè)卡各管中各加入 0.5%的紅細(xì)胞生理鹽水懸液1 滴（或50山）；即刻使用微柱凝膠離心機(jī)，以 1000r/min離心10min,取出觀察 結(jié)果。亦可用全自動(dòng)血型檢測(cè)系統(tǒng)直接檢測(cè)。（4）結(jié)果判斷：陽性反應(yīng)，紅細(xì)胞抗原與抗體結(jié)合使紅細(xì)胞發(fā)生凝集，在離心后浮在凝膠表面或膠中；陰性反應(yīng)，被檢紅細(xì)胞無相應(yīng)抗原結(jié)合，在離心后 紅細(xì)胞沉于微柱的底部。A孔陽性B孔陰性為A型，A孔陰性B孔陽性為B 型, A孔陰性B孔陰性為O型，A孔陽性B孔陽性為AB型。見圖6- 1?！咀⒁馐马?xiàng)】1 嚴(yán)格按操作規(guī)程操作，認(rèn)真核對(duì)標(biāo)本并作好標(biāo)記。2 所用試管、滴管和玻片必須清潔干凈，防止溶血。3. 一般應(yīng)先加血清，然后再加紅

8、細(xì)胞懸液，以便容易核實(shí)是否漏加血清。4. 抗血清每次使用完后，應(yīng)放回冰箱保存，以免細(xì)菌污染。5為了防止冷凝集現(xiàn)象的干擾，一般應(yīng)在室溫下進(jìn)行試驗(yàn)。6. 嚴(yán)格控制離心速度和時(shí)間，防止假陽性或假陰性結(jié)果。7. 觀察時(shí)應(yīng)注意紅細(xì)胞呈特異性凝集、 繼發(fā)性凝固以及緡錢狀排列的區(qū)別。8. 未用的微柱凝膠免疫檢測(cè)卡應(yīng)入室溫保存，用完后放 4C冰箱保存1周。9. 判斷結(jié)果后應(yīng)仔細(xì)核對(duì)，記錄，避免筆誤。10. 分型血清+受檢者紅細(xì)胞與受檢者血清+試劑紅細(xì)胞結(jié)果不符時(shí)，要看受檢 者基本情況，如果是嬰幼兒、腫瘤患者，理論上應(yīng)該檢測(cè)到的抗體沒有查到，可 以忽略不計(jì)，以查到的抗原定型。11. 分型血清+受檢者紅細(xì)胞與受檢

9、者血清+試劑紅細(xì)胞結(jié)果不符時(shí)，受檢者基 本情況，又不是嬰幼兒、腫瘤患者。理論上應(yīng)該檢測(cè)到的抗體沒有查到，多見老 年人，可以試用以下方法加以檢測(cè)抗體： 用試管法重做，在做完2.1.1和2.1.2后,把試管放4C環(huán)境15分鐘,后取出 離心。觀察結(jié)果。 用試管法重做，在做完2.1.1和2.1.2后,把試管放37C環(huán)境15分鐘,后取 出離心。觀察結(jié)果。 用試管法重做，用聚凝胺方法查抗體：2.1.2取潔凈小試管3支，分別標(biāo)明A型、B型和0型細(xì)胞。用滴管分別加入 受檢者血清2滴于試管底部，再分別以滴管加入A、B 0型5%C劑紅細(xì)胞懸液1 滴，混勻。2.1.3 于三個(gè)試管中分別加入 LIM0. 7ml 、

10、Polybrene 溶液 2滴，混勻。2.1.4以1000rpm離心（離心時(shí)間應(yīng)按離心機(jī)校準(zhǔn)時(shí)間）。2.1.5 倒掉上清液，管底殘液體留約 0.1ml。2.1.6 輕輕搖動(dòng)試管，目測(cè)紅細(xì)胞有無凝集，如無凝集，則必須重做。2.1.7加入Resuspending2滴，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)試管混合并同時(shí)觀察結(jié)果。 如果 在 30 秒1 分內(nèi)凝集散開，代表是由 Polybrene 引起的非特異性聚集，配 血結(jié)果相合；如凝集不散開，則為紅細(xì)胞抗原抗體結(jié)合的特異性反應(yīng)，配 血結(jié)果不相合。如反應(yīng)可疑，可進(jìn)一步倒在玻片上用顯微鏡觀察。12. 受檢者血清+試劑紅細(xì)胞試驗(yàn)中，0細(xì)胞凝聚要查自身抗體和不規(guī)則抗體.【方法評(píng)價(jià)】1

11、 玻片法定型簡(jiǎn)單，不需要離心設(shè)備，適用于大規(guī)模血型普查。亞型紅細(xì) 胞抗原與抗體的凝集反應(yīng)慢、 凝集強(qiáng)度弱， 有時(shí)容易被忽略而導(dǎo)致定型有誤。 該 法僅靠抗體的力量凝集紅細(xì)胞而無離心力加速反應(yīng)， 故反應(yīng)時(shí)間較長(zhǎng)， 且不適用 于交叉配血。2試管法定型反應(yīng)快、時(shí)間短，特別是緊急輸血時(shí)可在抗原抗體反應(yīng) 1 分 鐘后離心觀察結(jié)果； 通過離心增強(qiáng)凝集， 可發(fā)現(xiàn)亞型和較弱的抗原抗體反應(yīng)， 結(jié) 果準(zhǔn)確可靠。3卡式法定型使用安全，操作簡(jiǎn)單，結(jié)果穩(wěn)定可靠，靈敏度高，重復(fù)性好， 但費(fèi)用昂貴，需要特殊的儀器設(shè)備?！举|(zhì)量控制】1 每更換一批號(hào)抗血清試劑，均要滴定抗體效價(jià)。2分型血清應(yīng)保存在26C,對(duì)長(zhǎng)期數(shù)月不用的試劑，可保存于-20Eo3. IgM抗A或抗B血凝效價(jià)128,親和力w 15秒，冷凝集素效價(jià)V 1: 4, 必須具有檢出 A2、 A2B 的能力。4. 抗血清如出現(xiàn)渾濁和變色則不能使用，防止抗血清污染、變質(zhì)失效，而 造成血型鑒定