醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告課件

1、醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告1 醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)設(shè)計醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)設(shè)計 性實驗報告性實驗報告 醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告2 實驗項目一：動物細(xì)胞融合實驗項目一：動物細(xì)胞融合 實驗原理實驗原理 兩個或兩個以上的細(xì)胞在自發(fā)或誘導(dǎo)條件下合并成為一個雙核或多核細(xì)兩個或兩個以上的細(xì)胞在自發(fā)或誘導(dǎo)條件下合并成為一個雙核或多核細(xì) 胞的過程成為胞的過程成為 。在通常情況下，兩個細(xì)胞接觸并不會發(fā)生融合現(xiàn)。在通常情況下，兩個細(xì)胞接觸并不會發(fā)生融合現(xiàn) 象。因為各自存在完整的細(xì)胞膜，在特殊融合誘導(dǎo)物的作用下，兩個細(xì)胞膜象。因為各自存在完整的細(xì)胞膜，在特殊融合誘導(dǎo)物的作用下，兩個細(xì)胞膜 發(fā)生一定變化，就可以促進(jìn)兩個或多個細(xì)胞聚集，

2、相接觸的細(xì)胞膜之間融合，發(fā)生一定變化，就可以促進(jìn)兩個或多個細(xì)胞聚集，相接觸的細(xì)胞膜之間融合， 繼而細(xì)胞質(zhì)融合，形成一個大的融合細(xì)胞，在自然界的繼而細(xì)胞質(zhì)融合，形成一個大的融合細(xì)胞，在自然界的 就是細(xì)胞融合就是細(xì)胞融合 的過程。的過程。 醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告3 目前，細(xì)胞融合的誘導(dǎo)物種類很多，常用的主要有滅活的仙臺病毒，目前，細(xì)胞融合的誘導(dǎo)物種類很多，常用的主要有滅活的仙臺病毒， 聚乙二醇（聚乙二醇（PEGPEG）和電脈沖。目前應(yīng)用最廣泛的是聚乙二醇，因為它易得，）和電脈沖。目前應(yīng)用最廣泛的是聚乙二醇，因為它易得， 簡單，且融合效果穩(wěn)定。簡單，且融合效果穩(wěn)定。 醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告4 醫(yī)學(xué)細(xì)

3、胞設(shè)計性實驗報告5 醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告6 實驗用品實驗用品 （1).1).材料：雞血材料：雞血 。 （2).2).試劑：試劑：HanksHanks液液, ,PEGPEG溶液溶液(MV=400)(MV=400)，16401640液（含液（含10%10%滅活滅活 小牛血清和不含血清的兩種），小牛血清和不含血清的兩種），0.85%0.85%生理鹽水，生理鹽水，0.2%0.2%次甲基藍(lán)染次甲基藍(lán)染 (3). (3).儀器設(shè)備：顯微鏡儀器設(shè)備：顯微鏡(800r/min)(800r/min)，離心機(jī)，水浴箱，酒精，離心機(jī)，水浴箱，酒精 燈，吸管，載玻片、蓋玻片，濾紙。燈，吸管，載玻片、蓋玻片，濾紙。

4、醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告7 混合液離心混合液離心 ( (800800r/minr/min離心離心) ) 8ml hanks8ml hanks 液混勻液混勻 實驗步驟實驗步驟 8min 靜置靜置1min1min后后 3737水浴水浴 PEG溶液溶液 熱的熱的1640 液混勻液混勻 37水浴水浴 保溫保溫 懸浮懸浮 離心離心 洗滌洗滌 流盡剩余液流盡剩余液 體體 雞血雞血 10%懸懸 液液 融化 冷卻 至 50 90S內(nèi) 醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告8 加入加入 Hanks液液 含小牛含小牛 血清的血清的 1640液液 0.2%0.2%次甲基次甲基 藍(lán)染染液染藍(lán)染染液染 色色 鏡檢鏡檢 37水浴水浴 5m

5、in 離心棄上清離心棄上清 10min 吸紙吸干吸紙吸干 37水浴 水浴 孵育孵育30min 醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告9 注意事項注意事項 1. 1.制備制備50%PEG50%PEG一定要保溫在一定要保溫在3737水浴中，不然冷卻后會有結(jié)水浴中，不然冷卻后會有結(jié) 晶析出。晶析出。 2. 2.在離心管中加在離心管中加PEGPEG之前，一定要將離心管倒置在濾紙上，流之前，一定要將離心管倒置在濾紙上，流 盡液體，否則殘留液會改變盡液體，否則殘留液會改變PEGPEG的濃度。的濃度。 3. 3.融合過程觀察：分別于溫育融合過程觀察：分別于溫育5min5min、10min10min、20min20min、3

6、0min30min 取細(xì)胞懸液一滴制成臨時裝片。取細(xì)胞懸液一滴制成臨時裝片。 兩個細(xì)胞核發(fā)生兩個細(xì)胞核發(fā)生 ，形成一個含有兩個或多個核的圓形細(xì)胞。，形成一個含有兩個或多個核的圓形細(xì)胞。 醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告10 醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告11 細(xì)胞融合過程細(xì)胞融合過程 醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告12 實驗項目二：細(xì)胞核的分離與鑒定 細(xì)胞核。 細(xì)胞內(nèi)各種結(jié)構(gòu)的比重和大小都不 相同，在同一離心場內(nèi)的沉降速度也不 同，用不同的轉(zhuǎn)速和不同的介質(zhì)離心， 就可以將細(xì)胞內(nèi)各組分分級分離出來。 細(xì)胞核的分離就是利用了細(xì)胞核 的比重大小與細(xì)胞內(nèi)其他組分不同，先 將組織制成勻漿，再在懸浮的均勻介質(zhì) 中進(jìn)行離心，分離，甲

7、苯胺藍(lán)又可以將 細(xì)胞核染成藍(lán)紫色，這樣，就可以鑒別 分離出來的細(xì)胞核。 醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告13 實驗用品實驗用品： 材料：小白鼠 試劑：生理鹽水,0.25mol/L蔗糖， 0.003mol/L氯化鈣溶液，1%甲苯胺藍(lán)染液 儀器設(shè)備：顯微鏡，普通離心機(jī)，天平， 離心管，滴管，玻璃漏斗，量筒，25ml燒 杯，解剖剪，鑷子，沖洗瓶，紗布，伯樂 均漿器，載玻片，蓋玻片，染色盤架 醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告14 實驗步驟： 斷頭處死 小白鼠 迅速開腹 取肝 加8ml預(yù)冷的 0.25mol/L蔗糖 0.003mol/L綠化高 永液于燒杯中， 將剪碎的肝組織倒入 玻璃勻漿器，是勻漿 器下端侵入盛有冰塊 的器皿。 盡量剪碎 肝組織， 取1克放入 燒杯中 醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告15 左手握持勻漿器 右手將勻漿搗桿 垂直插入管中勻 漿，直至看不到 明顯的組織塊 過濾勻漿液于 離心管中 離心 取上清液制 一張涂片1 將原離心管中 剩余上清液吹 打成沉淀成懸 液另制涂片2 滴染甲 苯胺藍(lán) 染液 滴染甲 苯胺藍(lán) 染液 鏡 檢 醫(yī)學(xué)細(xì)胞設(shè)計性實驗報告16 注意事項： 1.操作規(guī)范，防止試劑污染。 2.細(xì)胞懸液的涂片制作要輕柔。 3.使用離心機(jī)要注意平衡，轉(zhuǎn)速從低到高。 預(yù)期結(jié)果： 低倍鏡下找到標(biāo)本，再換高倍鏡，可見肝細(xì)胞核已 游離出來，被染成藍(lán)紫色，圓形，中央有2到4個甚 至更多個深藍(lán)色的核仁。