【大學課件】《儀器分析實驗》高效液相色譜法

1、 實驗目的實驗目的 了解了解HPLC儀器根本結(jié)構(gòu)儀器根本結(jié)構(gòu),掌握實驗儀器的一般使掌握實驗儀器的一般使 用方法；用方法； 加深對色譜別離原理的理解，掌握主要實驗條件加深對色譜別離原理的理解，掌握主要實驗條件 的選擇；的選擇； 掌握液相色譜定性定量分析技術。掌握液相色譜定性定量分析技術。 實驗內(nèi)容實驗內(nèi)容 反相高效液相色譜法別離測定烷基苯系反相高效液相色譜法別離測定烷基苯系 物物 實驗講解要點實驗講解要點 一、色譜別離原理一、色譜別離原理 二、色譜分析技術二、色譜分析技術 三、三、 HPLC儀器和使用方法儀器和使用方法 四、四、 HPLC和和GC的比較的比較 五、五、 RP-HPLC測定烷基苯化

2、合物原測定烷基苯化合物原 理理 一、色譜別離原理一、色譜別離原理 色譜法是一類高效別離方法。色譜法是一類高效別離方法。 色譜別離原理是什么？色譜別離原理是什么？ HPLC和和GC儀器的別離部件是什么？儀器的別離部件是什么？ 它們有什么不同？它們有什么不同？ HPLC和和GC的主要差異？的主要差異？ 二、色譜分析技術二、色譜分析技術 色譜分析是一類重要的儀器分析方法，其色譜分析是一類重要的儀器分析方法，其 特點是別離能力強、定量準確，適合于復雜特點是別離能力強、定量準確，適合于復雜 樣品或多組分樣品分析。樣品或多組分樣品分析。 常見的色譜定性方法？常見的色譜定性方法？ 色譜定量分析的依據(jù)？色譜定

3、量分析的依據(jù)？ 氣相色譜實驗采用那種定量分析方法？有何氣相色譜實驗采用那種定量分析方法？有何 特點？特點？ HPLC HPLC和和GCGC的應用特點的應用特點 三、三、 HPLC儀器和實驗技術儀器和實驗技術 HPLC HPLC儀器的根本組分？儀器的根本組分？ 主要部件的工作原理？主要部件的工作原理？ HPLC HPLC和和GCGC儀器的比較儀器的比較 HPLC HPLC和和GCGC實驗技術的比較實驗技術的比較 有人認為色譜分析實驗很簡單，就是打一有人認為色譜分析實驗很簡單，就是打一 針樣品而已，你是怎么認為的？你是否給病針樣品而已，你是怎么認為的？你是否給病 人打過針？為什么沒有？人打過針？為

4、什么沒有？ 四、高效液相色譜儀的根本組成四、高效液相色譜儀的根本組成 分幾個系統(tǒng)？分幾個系統(tǒng)？ 和和GCGC有何不同？有何不同？ 高壓泵工作原理？高壓泵工作原理？ GCGC是如何進樣的？是如何進樣的？ 記錄系統(tǒng)和記錄系統(tǒng)和GCGC一樣一樣 嗎？嗎？ 高壓泵工作原理單向閥高壓泵工作原理單向閥 高壓液體有危險嗎？高壓液體有危險嗎？ 高壓泵如何改變流速？高壓泵如何改變流速？ 高壓泵工作原理單向閥高壓泵工作原理單向閥 HPLC HPLC進樣針與進樣針與GCGC有何不同？有何不同？ 為什么為什么HPLCHPLC與與GCGC進樣要求不同？進樣要求不同？ 六通閥工作原理流路切換六通閥工作原理流路切換 五、五

5、、 RP-HPLC測定烷基苯化合物原理測定烷基苯化合物原理 什么是正相色譜？什么是反相色譜？什么是正相色譜？什么是反相色譜？ 什么是鍵合固定相？什么是鍵合固定相？ 預測一下苯和甲苯在預測一下苯和甲苯在C18C18反相柱上的保存反相柱上的保存 順序？順序？ 什么是反相色譜疏水機理？什么是反相色譜疏水機理？ 本實驗的主要色譜分析條件有那些？本實驗的主要色譜分析條件有那些？ 流動相組成對保存時間有何影響？舉例說流動相組成對保存時間有何影響？舉例說 明？明？ 改變檢測波長對色譜圖有何影響？改變檢測波長對色譜圖有何影響？ HPLC的溶劑選擇的溶劑選擇 本實驗采用什么流動相？本實驗采用什么流動相？ 什么是

6、什么是HPLCHPLC級甲醇、乙腈溶劑？級甲醇、乙腈溶劑？ 如何獲得超純水？如何獲得超純水？ 本實驗所用的流動相如何配制？本實驗所用的流動相如何配制？ 流動相為什么要除氣？如何除氣？流動相為什么要除氣？如何除氣？ 六、實驗局部六、實驗局部 一、溶液配制一、溶液配制 1 1 配制標準系列溶液配制標準系列溶液 三組分混標液：每三組分混標液：每mLmL溶液分別含苯、甲苯和乙苯。溶液分別含苯、甲苯和乙苯。 分別準確移取、和三組分混標液于分別準確移取、和三組分混標液于10mL10mL容量瓶容量瓶 中，用流動相溶劑定容。中，用流動相溶劑定容。 2 2 流動相的配制、過濾和除氣。流動相的配制、過濾和除氣。

7、五組分混標液：含適量苯、甲苯、乙苯、丙苯和丁五組分混標液：含適量苯、甲苯、乙苯、丙苯和丁 苯。苯。 標準苯測試液。標準苯測試液。 未知樣品未知樣品1 1號、號、2 2號和號和3 3號。號。 二、色譜實驗條件二、色譜實驗條件 A A組：組：Waters HPLCWaters HPLC儀儀 色譜柱：色譜柱：Nova Pak C18 (3.9Nova Pak C18 (3.9150mm, 4m)150mm, 4m) 流動相：流動相：CH3OH-H2O (70/30, v/v)CH3OH-H2O (70/30, v/v) 流速：流速：0.8 mL/min0.8 mL/min 檢測波長：檢測波長：254

8、nm254nm 進樣體積：進樣體積：20L20L B B組：組：TSP HPLCTSP HPLC儀儀 色譜柱：色譜柱：Hypersil BDS C18 (4.0Hypersil BDS C18 (4.0200mm, 5m)200mm, 5m) 流動相：流動相：CH3OH-H2O (80/20, v/v)CH3OH-H2O (80/20, v/v) 流速：流速：0.8 mL/min0.8 mL/min 檢測波長：檢測波長：254nm254nm 進樣體積：進樣體積：20L20L 三、實驗內(nèi)容與主要步驟三、實驗內(nèi)容與主要步驟 1 1 更換流動相。更換流動相。 2 2 開動儀器，讓色譜柱平衡。開動儀器，讓色譜柱平衡。 3 3 設置色譜工作站參數(shù)。設置色譜工作站參數(shù)。 4 4 進樣、采集色譜圖。進樣、采集色譜圖。 1 1五