養(yǎng)血調(diào)經(jīng)膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究論文

1、養(yǎng)血調(diào)經(jīng)膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究論文 【摘要】目的建立養(yǎng)血調(diào)經(jīng)膏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用薄層色譜法對制劑中的丹參、人參、甘草進(jìn)行定性，采用高效液相色譜法對制劑中的芍藥苷進(jìn)行定量。結(jié)果薄層色譜斑點(diǎn)清晰，陰性無干擾；芍藥苷在0.18720.9360g范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均回收率為98.24%，RSD為0.85%。結(jié)論此法操作簡單，可靠，可用于養(yǎng)血調(diào)經(jīng)膏的質(zhì)量控制。 【關(guān)鍵詞】養(yǎng)血調(diào)經(jīng)膏；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；高效液相色譜法；薄層色譜法 StudyontheQualityStandardofYangxueTiaojingElectuary Abstract：ObjectiveToestablishthequalityc

2、ontrolmethodofYangxueTiaojingElectuary.MethodsTLCmethodwasusedtoidentifyRadixetRhizomaSalviaeMiltiorrhizae,RadixetRhizomaGinseng,RadixetRhizomaGlycyrrhizaeinYangxueTiaojingElectuary.ThecontentofPaeoniflorinwasdeterminedintheprescriptionbyHPLC.ResultsTheTLCspotsdevelopedwerefairlyclear,andtheblanksho

3、wednointerference.HPLCmethodshowedagoodlinearitybetween0.18720.9360gwithanaveragerecoveryof98.24%,RSDwas0.85%.ConclusionThismethodisdependableandeasytooperate.ItcanbeusedtocontrolthequalityofYangxueTiaojingElectuary. Keywords：YangxueYiaojingElectuary;Qualitystandard;HPLC;TLC 養(yǎng)血調(diào)經(jīng)膏是由白芍、丹參、地黃、人參、銀柴胡、甘

4、草、黃芪等12味藥制成的中藥復(fù)方膏劑，具有補(bǔ)氣養(yǎng)血、調(diào)經(jīng)止帶功效。用于氣血兩虛，身體瘦弱，腰膝酸軟，月經(jīng)不調(diào)，崩漏帶下等癥。方中丹參采用乙醇回流提取，其它藥味采用水提。本實(shí)驗(yàn)采用薄層色譜法對方中丹參、人參、甘草進(jìn)行了定性研究，采用高效液相色譜法對君藥中的芍藥苷進(jìn)行了定量研究，建立了養(yǎng)血調(diào)經(jīng)膏的質(zhì)量控制方法?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。 1儀器與試藥 養(yǎng)血調(diào)經(jīng)膏（自制）；人參皂苷Rg1，Re，Rb1對照品，甘草對照藥材，丹參酮A對照品，芍藥苷對照品（均來自中國藥品生物制品檢定所）；乙腈為色譜純，水為重蒸水，其它試劑均為分析純。 硅膠G薄層板（青島海洋化工廠分廠）；島津LC10ATvp高效液相色譜儀，島津S

5、PDATvp檢測器。 2方法與結(jié)果 2.1薄層鑒別 2.1.1丹參取本品70g，加甲醇140ml，振搖使混勻，超聲30min，再離心20min，取上清液水浴蒸至稠膏狀，加水20ml攪拌稀釋，加氯仿振搖提取4次（30，30，20，20ml），合并氯仿液，水液備用（人參鑒別用），氯仿液揮干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。取缺丹參陰性樣品70g，同法制得缺丹參的陰性對照溶液。取丹參酮A對照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法1實(shí)驗(yàn)，吸取對照品溶液10l，供試品溶液與缺丹參陰性對照溶液各20l，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯（191）為展開劑，展開，

6、取出，晾干。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對照無干擾。結(jié)果見圖1。 2.1.2人參取上述丹參鑒別項(xiàng)下的水液用水飽和的正丁醇振搖提取3次（40，40，30ml），合并正丁醇溶液，用氨試液洗滌3次，30ml/次。棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，通過D101大孔吸附樹脂柱（10g，內(nèi)徑1.5cm），用水50ml洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。取缺人參陰性樣品70g，同法制得缺人參的陰性對照溶液。另取人參皂苷Rg1，Re，Rb1對照品，加甲醇制成每毫升各含1mg的混合溶液，作為對照

7、溶液。照薄層色譜法1試驗(yàn)，吸取對照品溶液10l，供試品溶液及陰性對照溶液各20l，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以展開劑正丁醇-醋酸乙酯-稀氨水（550）（415）10以下放置過夜的上層溶液，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對照無干擾。結(jié)果見圖2。 2.1.3甘草取本品100g，加甲醇200ml，振搖使混勻，超聲30min，再離心20min，取上清液水浴蒸至無醇味，加水30ml攪拌稀釋，用乙醚振搖提取2次，30ml/次。棄乙醚液，水液用水飽和的正丁醇振搖提取3次，50ml/次。合并正丁醇液，用正

8、丁醇飽和的水洗滌2次，30ml/次。棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀芙?，上聚酰胺柱?g，內(nèi)徑1.5cm），用水洗至無色，用50%乙醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。取缺甘草陰性樣品100g，同法制得缺甘草的陰性對照溶液。另取甘草對照藥材1.3g，加水100ml煎煮30min，水煎液離心20min后，用脫脂棉濾取上清液，濾液用乙醚振搖提取2次，按上述供試品溶液的制備方法制得對照藥材溶液。照薄層色譜法1實(shí)驗(yàn)，吸取上述供試品溶液及陰性樣品溶液各20l，對照藥材溶液20l，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲苯-丙酮-甲酸（5025101）溶液，展開，取

9、出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同的一個(gè)黃色主斑點(diǎn)，陰性無干擾。結(jié)果見圖3。 2.2含量測定 2.2.1色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性色譜柱為C18柱（4.6mm250mm，5m）（迪馬公司）；流動(dòng)相為乙腈-1%醋酸（1486）；流速1.0ml/min；檢測波長230nm；進(jìn)樣10l；理論板數(shù)為按芍藥苷峰計(jì)不低于2500。 圖1丹參TLC（略） 圖2人參TLC（略） 圖3甘草TLC（略） 2.2.2對照品溶液的制備取芍藥苷對照品約10mg，精密稱定，置20ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml，置10ml量

10、瓶中，加甲醇至刻度搖勻，即得（每毫升含芍藥苷0.05mg）。 2.2.3供試品溶液的制備取本品3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250w，頻率33kHz）40min，取出放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。 2.2.4線性關(guān)系的考察精密稱取芍藥苷對照品9.36mg，置20ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密移取1，2，3，4，5ml置25ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。各精密吸取10l進(jìn)樣，按上述色譜條件測定，記錄峰面積，并以峰面積為縱坐標(biāo)，芍藥苷進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)作圖，得一直線，以峰面積（Y）對芍藥

11、苷進(jìn)樣量（X）進(jìn)行回歸，得回歸方程：Y=1130494.658X+13721,r=0.9991。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，芍藥苷在0.18720.9360g范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。 2.2.5精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取同一芍藥苷對照品溶液10l，重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄芍藥苷峰面積值，其RSD值為1.40%，表明本法精密度良好。 2.2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一批樣品制備的供試品溶液，每隔一定時(shí)間進(jìn)樣10l，記錄芍藥苷峰面積值，其RSD值為1.15%，結(jié)果表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。 2.2.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批樣品，制備5份供試品溶液，按上述色譜條件測定，記錄芍藥苷峰面積值，計(jì)算芍藥苷含量，其RSD值為1.98%，表明本法重

12、復(fù)性良好。 2.2.8回收率實(shí)驗(yàn)采用加樣回收法，取含量為0.383mg/g的養(yǎng)血調(diào)經(jīng)膏約1.5g，精密稱定，分別精密添加濃度為0.46，0.58,0.75mg/ml的芍藥苷對照品溶液1ml再精密加入甲醇24ml，密塞，按上述2.2.3方法制備供試品溶液，測定含量，計(jì)算回收率；平均回收率為98.24%，其RSD值為0.85%，結(jié)果表明本法具有良好的回收率。見表1。 表1回收率測定結(jié)果（略） 2.2.9樣品測定取10批樣品，分別制備供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10l，以上述色譜條件測定，記錄芍藥苷峰面積值，按外標(biāo)法計(jì)算芍藥苷含量。根據(jù)10批樣品含量測定結(jié)果，暫定成品中含白芍以芍

13、藥苷（C23H28O11）計(jì)，每克不得少于0.2mg。 圖4缺白芍陰性樣品色譜圖（略） 圖5芍藥苷對照品色譜圖（略） 圖6養(yǎng)血調(diào)經(jīng)膏樣品色譜圖（略） 3討論 在人參的鑒別實(shí)驗(yàn)中，曾采用：（1）氯仿醋酸乙酯甲醇水（15402210）10以下放置的下層溶液1（2）正丁醇醋酸乙酯水（415）2的上層溶液為展開劑，均為斑點(diǎn)不夠清晰，故采用本法中的展開劑。 在甘草的鑒別實(shí)驗(yàn)中，由于甘草中含有黃酮類成分，具有酚羥基，故在供試液制備時(shí)采用了上聚酰胺柱，使其與不含酚羥基的成分分離3；用水洗脫，去除部分親水性雜質(zhì)，減少TLC斑點(diǎn)，有利于甘草有效成分的分離；曾采用：（1）氯仿甲醇水（1372）10以下放置分層的下層溶液；（2）氯仿甲醇溶液（91）為展開劑，均不如本法中的展開劑分離效果好，斑點(diǎn)清晰，故采用本法中的展開劑。 芍藥苷流動(dòng)相的選擇，曾選用甲醇-水-冰醋酸（20801）和乙腈水冰醋酸（10901）為流動(dòng)相，出峰時(shí)間較晚，效果均不理想，最后選用乙腈1%醋酸（1486）為流動(dòng)相，其保留時(shí)間合適且峰型較好，達(dá)到基線分離，且陰性對照無干擾（圖46），故選用乙腈1%醋酸（1486）為流動(dòng)相。 【參