臨床檢驗血液(10)

1、臨床檢驗血液（10）臨床醫(yī)學(xué)檢驗主管技師考試輔導(dǎo)臨床血液學(xué)檢驗紅細(xì)胞酶 缺陷性貧血及其實驗診斷一. 紅細(xì)胞酶代謝與功能1. 維持紅細(xì)胞能量代謝的主要酶（1）與糖代謝有關(guān)酶：丙 酮酸激酶（PK） .2, 3-二磷酸甘油酸（2, 3-DPG）.葡萄糖6-磷酸 脫氫酶（G-6-PD）等。（2）谷胱甘肽還原酶系統(tǒng)。（3）高鐵血紅蛋白還原酶系統(tǒng)。2. 紅細(xì)胞酶的功能改變與酶缺陷紅細(xì)胞酶缺陷多系遺傳性, 因其結(jié)構(gòu)基因突變引起酶的活性減低.增加或正常。酶缺乏者常有 程度不等的溶血，多表現(xiàn)為慢性非球形紅細(xì)胞溶血性貧血，部分 對多種氧化型藥物敏感，其屮以G-6-PD和PK較常見。（1）無氧酵解途徑酶缺乏：PK缺

2、乏較常見。（2）戊糖旁路酶缺陷：最常見有葡萄糖6-磷酸脫氫酶（G-6- PD） o（3）核昔酸代謝酶缺乏：有卩密噪5核昔酸酶（P5 N）.腺昔 酸激酶（AK）.腺昔脫氨酶（AD）增多或缺乏，后者活性過高引起 可代償性溶血性貧血。酶缺陷不引起溶血：有乳酸脫氫酶（LDH）,紅細(xì)胞缺乏的是 LDH-1,它呈常染色體顯性遺傳，其酶活性不足正常人的10%,無 溶血發(fā)生。二. 紅細(xì)胞酶缺陷的檢驗及其應(yīng)用1. 高鐵血紅蛋白還原試驗（1）原理：在血液屮加入亞硝酸 鹽使紅細(xì)胞屮的亞鐵血紅蛋白變成高鐵血紅蛋白，正常紅細(xì)胞的 G-6-PD催化戊糖旁路使NADP （氧化型輔酶II）變成NADPH （還原 型輔酶II）

3、,其脫的氫通過亞甲藍(lán)試劑的遞氫作用而使高鐵血紅 蛋白（Fe3+）還原成亞鐵血紅蛋白（Fe2+）,通過比色可觀察還 原的多少。當(dāng)G-6-PD缺乏時，高鐵血紅蛋白還原率下降。參考值：正常人高鐵血紅蛋白還原率大于75% （臍帶血 277%） o（2）臨床意義：G-6-PD缺乏時，高鐵血紅蛋白還原率下 降。屮間缺乏（雜合子）為31%74%,嚴(yán)重缺乏（半合子或純合 子）小于30%。2. 變性珠蛋白小體檢查（1）原理：G-6-PD缺乏的病人血樣 加入乙酰苯月井于37C孵育24小時，用煌焦油藍(lán)染色觀察紅細(xì)胞 中珠蛋白小體的生成情況，計算含5個及以上珠蛋白小體的紅細(xì) 胞的百分率。參考值：正常人含5個及以上珠蛋

4、白小體的紅細(xì)胞一般小于 30% o(2)臨床意義：G-6-PD缺乏癥常高于45%,故可作為G-6- PD缺乏的篩檢試驗。但還原型谷胱甘肽缺乏癥也增高；不穩(wěn)定血 紅蛋白病含小體的細(xì)胞百分率為75%84%, HbH病和化學(xué)物質(zhì)屮 毒時也增高。3. G-6-PD測定 包括熒光斑點試驗和G-6-PD活性檢測。(1) 原理：在G-6-PD和NADP+存在下,G-6-PD能使NADP+還 原成NADPH,后者在紫外線照射下會發(fā)岀熒光。NADPH的吸收峰在 波長340nm處，可通過單位時間生成的NADPH的量來測定G-6-PD 活性。參考值：正常人有很強(qiáng)熒光。正常人酶活性為(4. 971.43) U / g

5、Hbo(2) 臨床意義：G-6-PD缺陷者熒光很弱或無熒光；雜合子 或某些G-6-PD變異者則可能有輕到屮度熒光。G-6-PD缺乏者酶活 性減少。4.丙酮酸激酶測定：包括熒光斑點試驗和PK活性檢測。(1)原理：在二磷酸腺昔(ADP)存在的條件下丙酮酸激酶 (PK)催化磷酸烯醇丙酮酸(PEP)轉(zhuǎn)化成丙酮酸，在輔酶I還原 型(NADH)存在情況下，丙酮酸被LDH轉(zhuǎn)化為乳酸，若標(biāo)記熒光 于NADH ,此時有熒光的NADH變?yōu)闊o熒光的NAD。參考值：正常熒光在20min內(nèi)消失。15.0土1.99IU/gHb （37C） （ICSH 推薦 Blume 法）（2）臨床意 義：PK嚴(yán)重缺乏者熒光60min不

6、消失；PK屮等缺乏者熒光25 60min消失。純合子PK值在正?；钚缘?5%以下，雜合子為正常 25%50%。三. 紅細(xì)胞酶缺陷性貧血的實驗診斷1. 紅細(xì)胞G-6-PD缺陷癥本病分5型：蠶豆病.藥物致溶貧. 感染誘發(fā)溶血.新生兒高膽紅素血癥和遺傳性非球形紅細(xì)胞溶貧。（1）篩檢試驗1）高鐵血紅蛋白還原試驗：G-6-PD活性雜合 子屮等缺乏者31%74%,臍血41%77%；純合子或半合子G-6-PD 嚴(yán)重缺乏者大于30%,臍血小于40%； 2） G-6-PD熒光斑點法:G- 6-PD活性中等缺乏者1030分鐘岀現(xiàn)熒光；嚴(yán)重缺乏者30min不 出現(xiàn)熒光。（2）確診試驗：G-6-PD活性減少。2. 紅細(xì)胞丙酮酸激酶缺陷癥（1）篩檢試驗：PK熒光斑點 法：中等缺乏者（雜合子型）2060min熒光消失，嚴(yán)重缺乏者（純合子型）60min熒光不消失。（2）確診試驗：PK活性檢測，屮等缺乏者（雜合子型）為正 常活性的25%50%,嚴(yán)重缺乏者（純合子型）為正?；钚缘?5% 以下。