敦煌古方“紫蘇煎”對慢性支氣管炎大鼠血清、肺組織中NO、ET(一).doc

1、敦煌古方 “紫蘇煎 ”對慢性支氣管炎大鼠血清、肺組織中NO、 ET(一 )作者：王鳳儀 ,賈育新 ,李生財 ,王小榮 ,劉峰林 ,楚惠媛摘要：目的：探討敦煌古方“紫蘇煎 ”治療慢性支氣管炎的作用機制。方法：采用改良煙熏法復制慢性支氣管炎大鼠模型，實驗動物隨機分為模型組、 沖劑組、 紫蘇煎低劑量組、紫蘇煎高劑量組及不加處理的空白對照組。 造模各組以高、 低劑量紫蘇煎、 止咳化痰沖劑和生理鹽水進行干預，測定各組大鼠血清、肺組織中內(nèi)皮素 -1（ ET1）及一氧化氮（ NO）的含量。結(jié)果：模型組大鼠血清、肺組織中 ET1較正常空白組明顯升高（ 0.01）；NO 含量較正?？瞻捉M明顯降低 ( 0.01)

2、。與模型組比較， 紫蘇煎高劑量組、 紫蘇煎低劑量組及沖劑組血清、肺組織中 ET1明顯降低（ 0.05 或 0.01）；NO 含量均明顯升高 （ 0.05 或 0.01）。與沖劑組比較， 紫蘇煎高劑量組血清、 肺組織中 ET1含量明顯低于沖劑組 （ 0.05 或0.01）；NO 含量均高于沖劑組（ 0.05 或 0.01）。結(jié)論： “紫蘇煎 ”可顯著提高慢性支氣管炎模型大鼠的 NO 含量，降低 ET1的含量。提示該方可以調(diào)節(jié)和保持血管、 氣管舒縮平衡，減輕炎癥反應。關(guān)鍵詞：敦煌醫(yī)學；紫蘇煎；慢性支氣管炎；ET1； NO；實驗研究敦煌古方 “紫蘇煎 ”治療慢性支氣管炎療效肯定， 但其作用機制尚不十

3、分清楚。 有研究結(jié)果表明，體內(nèi)氧化 抗氧化平衡失調(diào) 1及血管系統(tǒng)的舒張 收縮性失衡 2在慢性支氣管炎的形成和發(fā)展中具有重要作用。 本實驗通過觀察 “紫蘇煎 ”對慢性支氣管炎大鼠血清、 肺組織中內(nèi)皮素-1（ ET1）及一氧化氮（ NO）含量的影響，進一步探討其治療慢性支氣管炎的作用機制。1 材料1.1 動物健康 Wistar 老齡大鼠52 只（清潔級），質(zhì)量 20020g，雌雄各半，由甘肅中醫(yī)學院實驗動物中心提供，動物合格證號：醫(yī)動字第235 號。1.2 試劑盒ET1試劑盒（批號： 200508 ）、NO 試劑盒（批號： 20050816 ）均由南京建成生物工程研究所提供。1.3 藥物“紫蘇煎

4、”藥劑：原方各種藥材按照比例配方共計相當生藥146g ，將 4 劑中藥打成粉末，在適宜溫度下滲濾、醇提，揮發(fā)酒精，平均分為4 等份，其中1 份濃縮成生藥濃度為1g/mL的紫蘇煎液，另外3 份合并濃縮成生藥濃度為2.5g/mL 的紫蘇煎液， 分別作為低、高劑量組實驗用藥劑。祛痰止咳沖劑，由廣州市花城制藥廠出品（批號：20041013 ），實驗時用蒸餾水配制成濃度為0.085g/mL 的混懸液使用。2 方法2.1 動物分組采用數(shù)字表法將 52 只大鼠隨機分為空白對照組、模型對照組、陽性對照組、紫蘇煎低劑量組及紫蘇煎高劑量組，共 5 組。其中模型組 12 只，其余各組 10 只。2.2 動物造模除空

5、白對照組外，其余各組用煙熏法造模。造模參照文獻3法，采用改良煙熏法復制： （ 1）將造模組大鼠共42 只置于 90cm60cm60cm的煙室中，煙室上方開一0.4cm60cm的縫隙，下面外接回活塞通氣管具，通氣管具活塞端接煙條，后端接50mL 注射器。（2）將鋸末、旱煙條各 12g 混合均勻，卷成每支8g 左右的煙條。將煙條接在活塞端，點燃煙條，抽動活塞即可順利通入。 （ 3）煙熏大鼠：共30d ，其中前20d 每日 2 次，每次 30min ，每次用煙條 3支，每隔 10min 加入 1 支;后 10d 每天 1 次，每次30min ，每次用煙條 3 支，每隔 10min 加入 1 支。（

6、4）第 20d 時，取模型對照組大鼠雌雄各1 只，斷頸處死，取右肺中部組織在10%福爾馬林中固定，再經(jīng)過脫水、浸蠟、包埋等處理，切片，常規(guī)HE染色做成病理切片光鏡下觀察，證明慢性支氣管炎已經(jīng)形成，造模成功。（5）從造模第20d 起，空白對照組不施加任何影響，模型對照組用生理鹽水灌胃，陽性對照組用公開上市中成藥止咳化痰沖劑灌胃，紫蘇煎高劑量組、紫蘇煎低劑量組用配制的高劑量、低劑量紫蘇煎液灌胃。（ 6）用藥劑量見表 1、表 2，沖劑組相當于臨床藥量的10 倍，紫蘇煎低劑量組相當于臨床藥量的5 倍，紫蘇煎高劑量組相當于臨床藥量的15 倍，各組均用藥 20d。2.3 檢測方法血清制備：在治療結(jié)束后第2

7、d，將大鼠股動脈剪斷取血8mL 左右，分為2 份，每份 4mL，其中 1 份立即加入抗凝劑并與抗凝劑混合均勻，靜置，以3500r/min 離心，移取上層血清，在-20下凍存待測。另一份立即以3500r/min離心，移取上層血清，在-20下凍存待測。肺組織勻漿的制備： （ 1 ）大鼠取血后，立即斷頸處死，剖取氣管和肺臟，取左肺下葉組織0.3g 左右，在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，稱重，置于小燒杯中。（2）用移液管量取 0.86%的預冷生理鹽水 2.7mL（按照實際組織重量的9 倍計算），先將 2/3置于小燒杯中，用眼科剪盡快剪碎組織塊。（ 3）將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中，用剩余的1/3 冷鹽水沖洗小燒杯，一起倒入勻漿管中。（ 4）將勻漿器下端插入盛有冰水混合物的器皿中，充分研磨使組織勻漿化。 （5）將制備好的勻漿以3000r/