2015大學(xué)生項(xiàng)目申報(bào)曾慶娟張君-湖南醫(yī)藥學(xué)院.doc

1、附件 4湖南省大學(xué)生研究性學(xué)習(xí)和創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)計(jì)劃項(xiàng)目申報(bào)表項(xiàng)目名稱(chēng):血管活性腸肽對(duì)急性肺損傷時(shí)中性粒細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制探討學(xué)校名稱(chēng)湖南醫(yī)藥學(xué)院學(xué)生姓名學(xué) 號(hào)專(zhuān)業(yè)性 別入學(xué)年份曾慶娟20141030325醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)（本科）女2014年崔學(xué)慶20141030420醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)（本科）男2014年申鳳琪20143011702臨床醫(yī)學(xué)（專(zhuān)科）女2014年文明佳子20143030301醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)（專(zhuān)科）女2014年指導(dǎo)教師張君職稱(chēng)副教授項(xiàng)目所屬生物學(xué)一級(jí)學(xué)科指導(dǎo)教師鐘文靜職稱(chēng)助教學(xué)生曾經(jīng)參與科研的情況1. 參與科研設(shè)計(jì)的培訓(xùn)與練習(xí)；2. 參與分子生物學(xué)技術(shù)的培訓(xùn)與操作；3. 參與 ALI 相關(guān)文獻(xiàn)查閱及部分研

2、究工作；指導(dǎo)教師承擔(dān)科研課題情況指導(dǎo)并完成大學(xué)生創(chuàng)新課題 2 項(xiàng)。主持省、市、校級(jí)課題各 1 項(xiàng)。主持懷化市科技成果獎(jiǎng)二等獎(jiǎng) 1 項(xiàng)。項(xiàng)目研究和實(shí)驗(yàn)的目的、內(nèi)容和要解決的主要問(wèn)題研究目標(biāo)：1.明確血管活性腸肽（VIP）對(duì)急性肺損傷（ALI ）時(shí)中性粒細(xì)胞（PMN）凋亡的影響，探討肺內(nèi)源性調(diào)控因子 VIP 減輕 ALI 的作用機(jī)制。2.通過(guò)基本的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)操作鍛煉學(xué)生動(dòng)手操作能力，培養(yǎng)學(xué)生科研意識(shí)，加強(qiáng)學(xué)生運(yùn)用所學(xué)基礎(chǔ)理論分析臨床實(shí)際問(wèn)題的能力，從而提高學(xué)生學(xué)習(xí)興趣，激發(fā)學(xué)生求知欲。研究?jī)?nèi)容：探討 VIP 對(duì) ALI 時(shí) PMN 凋亡的影響及其機(jī)制。擬解決的主要問(wèn)題：VIP 可通過(guò)促進(jìn)中性粒

3、細(xì)胞凋亡而減輕ALI ，其可能機(jī)制與 VIP 抑制 NF-B 的活化有關(guān)。國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀和發(fā)展動(dòng)態(tài)急性肺損傷（acute lung injury, ALI ）是指機(jī)體遭受?chē)?yán)重感染、創(chuàng)傷，以及有害氣體吸入等多種因素?fù)p傷后，出現(xiàn)彌漫性肺泡-毛細(xì)血管膜損傷所致肺水腫和肺不張等病理特征的急危重癥，臨床表現(xiàn)為呼吸窘迫和頑固性低氧血癥等1,2。ALI 病死率高，嚴(yán)重威脅患者的生命，是臨床急危重病學(xué)研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)之一。過(guò)度炎癥反應(yīng)在 ALI 的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用，而炎癥反應(yīng)的及時(shí)消退是疾病良好轉(zhuǎn)歸的關(guān)鍵因素，其中中性粒細(xì)胞（polymorphonuclear, PMN）的凋亡是炎癥消退的重要標(biāo)志3。K

4、upfner在脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）引起的 ARDS 中發(fā)現(xiàn) NF-B 大量活化，同時(shí)伴隨著 PMN 的凋亡延遲，而應(yīng)用 NF-B 抑制劑可加速 PMN 的凋亡，提示在 PMN 中抑制 NF-B 的活化可以促進(jìn)凋亡，減輕肺損傷4,5。因此干預(yù) NF-B 活化可能是調(diào)節(jié) PMN 凋亡的重要途徑。2血管活性腸肽（vasoactive intestinal peptide, VIP）是肺內(nèi)含量豐富的具有較強(qiáng)抗炎特性的神經(jīng)肽6。文獻(xiàn)顯示 VIP 可呈時(shí)間和劑量依賴(lài)性地促進(jìn)氣道上皮的趨化遷移及增殖活性，增強(qiáng)上皮 E-鈣粘素的表達(dá)，維持氣道上皮結(jié)構(gòu)與功能的完整性7-9。以

5、上研究表明VIP 對(duì) ALI 具有潛在的治療作用。然而 VIP 對(duì) ALI 時(shí)炎癥消退的影響，以及 VIP 對(duì) ALI時(shí) PMN 凋亡的調(diào)控作用和機(jī)制尚不明確。綜上所述，本課題擬首次從細(xì)胞水平觀察在 LPS誘導(dǎo)的 ALI 中 VIP 對(duì) PMN 凋亡的影響，并從促進(jìn)炎癥消退方面探討其機(jī)制，以期豐富 VIP 保護(hù) ALI 的理論，為臨床防治ALI 提供新策略。主要參考文獻(xiàn)1 Shafeeq H, Lat I. Pharmacotherapy for acute respiratory distress syndromeJ. Pharmacotherapy, 2012, 32(10): 943-9

6、572 Reiss LK, Uhlig U, Uhlig S. Models and mechanisms of acute lung injury caused by direct insultsJ. Eur J Cell Biol, 2012, 91(6-7): 590-601.3 Kennedy AD, Deleo FR. Neutrophil apoptosis and the resolution of infectionJ. Immunologic Research, 2009, 43(1-3): 25-61.4 Ma HJ, Huang XL, Liu Y, et al. Sul

7、fur dioxide attenuates LPS-induced acute lung injury via enhancing polymorphonuclear neutrophil apoptosisJ. Acta Pharmacol Sin, 2012, 33(8): 983-990.5 Li L, Weijing W, Wenjie H, et al. NF- B RNAi decreases the Bax/Bcl-2ratio and inhibits TNF-induced apoptosis in human alveolar epithelial cellsJ. Inf

8、lammation research, 2013, 62(4): 387-397.6 Souza-Moreira L, Delgado-Maroto V, Delgado M. Potential applications of vasoactive intestinal Peptide-based therapies on transplantationJ.Endocr Metab Immune Disord Drug Targets, 2012, 12(4): 333-343.7 Cui YR, Sun GY, Tang CY, et al. Role of CREB in vasoact

9、ive intestinal peptide-mediated wound healing in human bronchial epithelial cellsJ. Regul Pept, 2009, 153(1-3): 64-69.8 Cui YR, Zhang M, Bai HB, et al. Intracellular signaling molecules involved in vasoactiveintestinal peptide-mediated wound healing in human bronchial epithelial cellsJ. Peptides, 20

10、07, 28(9): 1667-1673.9 Zhang M, Qin XQ, Cui YR, et al. Vasoactive intestinal peptide enhances wound healing and proliferation of human bronchial epithelial cellsJ. Peptides, 2006, 27(12): 3107-3114. 3本項(xiàng)目學(xué)生有關(guān)的研究積累和已取得的成績(jī)圍繞研究課題，我們進(jìn)行了大量的前期工作，積累了相應(yīng)研究經(jīng)驗(yàn)，取得了初步的研究成績(jī)：積極查閱相關(guān)文獻(xiàn)，基本了解了本課題相關(guān)領(lǐng)域的研究最新進(jìn)展；積極參加醫(yī)學(xué)機(jī)能學(xué)實(shí)驗(yàn)

11、，基本掌握了科學(xué)研究的常用方法與手段；積極參與指導(dǎo)老師的課題研究，基本掌握了科研工作程序與步驟。項(xiàng)目的創(chuàng)新點(diǎn)和特色1. 首次從炎癥消退的角度，探討肺內(nèi)神經(jīng)肽 VIP 對(duì) ALI 的保護(hù)作用。2. 多學(xué)科基礎(chǔ)理論知識(shí)與臨床疾病和科研工作緊密結(jié)合。項(xiàng)目的技術(shù)路線及預(yù)期成果項(xiàng)目研究方案：抽取健康志愿者外周血，采用 Haslett法分離純化 PMN，采用 LPS 建立 ALI 細(xì)胞模型，同時(shí)運(yùn)用 VIP 干預(yù)后觀察以下指標(biāo)：采用 Annexin V-FITC/PI 雙染以及 Hochest染色法檢測(cè) PMN 的凋亡率，觀察 VIP對(duì) PMN 凋亡的影響；采用 real-time PCR和 Wester

12、n blot法檢測(cè) Bax與 Bcl-2 的表達(dá)，計(jì)算 Bax/Bcl-2比值：反映 VIP 對(duì) PMN 凋亡的影響；Westernblot 法檢測(cè) NF-B 和 IB 的蛋白表達(dá)量，激光共聚焦顯微鏡觀察 NF-B的轉(zhuǎn)位：反映 NF-B 的活化情況，探討 VIP 調(diào)節(jié) PMN 凋亡的分子機(jī)制。所有實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目分為三組（空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組）進(jìn)行分析探討。4技術(shù)路線如下：PMNVIPLPSAnnexin V-FITC/PI 雙染以及Hochest染色法檢測(cè) PMN 的凋亡率PMN 凋亡率的檢測(cè)Western blot法檢NF- B的表達(dá)測(cè)Bax、 Bcl-2表達(dá)I B 降解并計(jì)算 Bax/Bcl-2NF- B的轉(zhuǎn)位比值凋亡機(jī)制探討VIP 調(diào)節(jié)機(jī)制探討預(yù)期目標(biāo)：明確中性粒細(xì)胞凋亡在 ALI 發(fā)生發(fā)展中的作用，同時(shí)探討 VIP 發(fā)揮肺損傷保護(hù)作用的機(jī)制；在國(guó)內(nèi)外重要學(xué)術(shù)期刊發(fā)表論文 12 篇；培養(yǎng)優(yōu)秀大學(xué)畢業(yè)生