中藥三班-王菁-正交試驗優(yōu)選荔枝草中總黃酮的提取工藝(2)[精選]

1、正交試驗優(yōu)選荔枝草中總黃酮的提取工藝摘要 目的：針對從荔枝草中提取總黃酮的操作工藝進(jìn)行提升優(yōu)化。方法：采用紫外分光光度法對荔枝草中總黃酮的含量進(jìn)行檢測，同時考察相關(guān)因素如溶劑濃度、溶劑用量、提取溫度、提取時間等對結(jié)果的影響。結(jié)果：添加20倍量的70% c2h5oh，80提取120min，總黃酮提取率為6.86%。結(jié)論：優(yōu)化后的提取工藝整體簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，在實際生產(chǎn)活動中具有良好應(yīng)用價值，可用于工業(yè)提取總黃酮。關(guān)鍵詞 荔枝草；正交試驗；總黃酮；提取工藝引言 荔枝草屬于唇形科鼠尾草屬植物，針對荔枝草的現(xiàn)代研究結(jié)果顯示其含有多種成分，主要成分包括黃酮、木質(zhì)素、酚類、揮發(fā)油和甾醇等各種成分1。本

2、人通過文獻(xiàn)得知，荔枝草中主要成分為黃酮，預(yù)實驗發(fā)現(xiàn)總黃酮中含有蘆丁，擬以蘆丁為檢測指標(biāo)，對荔枝草中總黃酮的含量進(jìn)行測定。荔枝草性涼，在醫(yī)藥方面的作用主要包括清熱解毒、涼血利尿、消除水腫等；同時還可以用來治療痔瘡腫痛、乳腺炎、出血等，同時針對跌打損傷也具有良好效果2；荔枝草可以用于多種疾病的治療，臨床上常用于急性扁桃體炎、宮頸糜爛等。3。本文主要通過單因素試驗和正交試驗，分析相關(guān)因素如溶劑濃度、溫度、提取時間、溫度等對結(jié)果的影響，從而找出最優(yōu)提取方案。1 材料1.1 儀器1.2 試藥 荔枝草藥品來自于廣西大明山，蘆丁，試劑等均為分析純。2 方法和結(jié)果2.1 總黃酮含量測定2.1.1 對照品蘆丁溶

3、液的制備 稱取10.9 mg的蘆丁樣品，將其放入容量瓶中，滴加70%c2h5oh，將標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行超聲溶解，完成超聲溶解后，用c2h5oh溶液定容至刻度線，最終得到蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液。2.1.2 供試品溶液的制備 準(zhǔn)確稱取2g荔枝草全草，撕碎后放入500ml的圓底燒瓶中，稱取20ml 70% c2h5oh溶液加入圓底燒瓶，之后將燒瓶置于水浴鍋上連續(xù)回流提取2次，每次反應(yīng)1.5h，結(jié)束后趁熱濾過，合并濾液并稀釋，倒入100ml的容量瓶中，用c2h5oh溶液定容至刻度線，即得到樣品待測液。2.1.3 最大吸收波長的選擇 分別準(zhǔn)確地吸取一定量的荔枝草提取液、對照品溶液和70% c2h5oh 溶液，并分別放置

4、于三個25ml量瓶中，首先在各容量瓶中加入1.0ml的5nano2，混均后靜置6 min，再分別滴加入1.0ml 10的al(no3)3，上下?lián)u勻后靜置6min，再依次加入10.0ml4%的naoh溶液，最后用70%c2h5oh溶液定容至容量瓶的刻度線，后放置15min。將配制好的溶液按照紫外可分光光度法進(jìn)行試驗，在400700nm的波長范圍內(nèi)掃描。結(jié)果表明，荔枝草提取液在500nm波長處存在最大吸收峰，蘆丁溶液在502nm波長處存在最大吸收峰，空白對照樣品在此處不存在吸收峰，所以確定最大吸收波長為500nm（圖a、b、c）。2.1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 吸取蘆丁對照品溶液，第一次吸取1ml，第

5、二次2ml，第三次4ml，依次上升到8ml，將其分別滴入5個容量瓶中，在此之前先將1.0ml 5的nano2滴加入各容量瓶中，混合均勻后靜置 6 min，然后再在容量瓶中分別滴加入10的al(no3)3各1.0ml，搖晃容量瓶，促使內(nèi)部溶液均勻，然后靜置容量瓶，時間為6分鐘；加入10.0ml 4%的naoh，加入70%的乙醇溶液定容，達(dá)到容量瓶刻度線，再次搖晃容量瓶，溶液均勻后，靜置15 min。同時制備空白實驗進(jìn)行對照，在吸收波長為500nm處測定吸光度（a），平行測試取平均值。以蘆丁對照品溶液的質(zhì)量濃度（c）為橫坐標(biāo)，吸光度（a）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)實驗結(jié)果，得到回歸方程為a=0.

6、0111c+0.0085(r= 0.9991，n=5）。表1-1為測定的吸光度，圖1-1為繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線。表1-1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)吸光度2.1.5 精密度試驗 對五份蘆丁對照品溶液進(jìn)行顯色，記錄5次吸光度，取平均值，rsd=0.4（2%），結(jié)果見表1-2 。表1-2精密度試驗2.1.6 穩(wěn)定性試驗 準(zhǔn)確吸取1ml荔枝草溶液滴加于25ml容量瓶中，按2.1.3項顯色后，存放在室溫下，在0，10，20，30，40，50，60min后，測定荔枝草溶液吸光度，rsd0.62%（2%） 。實驗結(jié)果顯示，在60min內(nèi)，荔枝草溶液中總黃酮含量能穩(wěn)定顯色，結(jié)果如表1-3所示。表1-3 穩(wěn)定性試驗2.1.7 重復(fù)性

7、試驗 稱量6份荔枝草藥材樣品，每份1g，測定吸光度6 次，rsd=0.12%（70% 時，總黃酮的提取率會與乙醇濃度之間存在負(fù)相關(guān)聯(lián)系。因此，將c2h5oh濃度定為70進(jìn)行后續(xù)試驗，結(jié)果見圖2-1。2.2.2 料液比的影響 將提取溫度控制在80，提取時間控制在1.5 h，c2h5oh濃度控制在 70的條件下，稱取5份8g的荔枝草，撕碎后置于容量瓶中，然后分別加入5、10、15、20、25倍的c2h5oh，在此基礎(chǔ)上考察不同料液比提取率的影響。當(dāng)料液比在1:51:15之間時，荔枝草中總黃酮的含量與溶劑用量存在正相關(guān)聯(lián)系；當(dāng)料液比為1:20時，總黃酮達(dá)到最大值；隨著料液比繼續(xù)上升，達(dá)到25倍時，總

8、黃酮含量開始下降，以上結(jié)果顯示荔枝草中總黃酮的最優(yōu)條件為料液比為1：20倍。圖2-2為不同料液比對荔枝草中總黃酮含量的影響。圖2-2 料液比的影響2.2.3 提取溫度對荔枝草中總黃酮提取率的影響 在提取時間為1.5h，乙醇濃度為70，料液比為1：20的條件下，分別稱取5份8g的荔枝草，剪碎荔枝草置于容量瓶中，研究溫度分別為50、60、70、80、90時對荔枝葉總黃酮提取率的影響，實驗結(jié)果表明，當(dāng)提取溫度為5070時，荔枝草中總黃酮提取率隨著溫度的升高而迅速增大，隨著提取溫度上升，達(dá)到7080時，結(jié)果顯示總黃酮提取率的上升速度開始放緩，當(dāng)溫度為80時，提取率達(dá)到最大值。隨著溫度繼續(xù)上升，達(dá)到80

9、90時，總黃酮提取率出現(xiàn)下降，以上結(jié)果說明荔枝草中總黃酮的最佳提取溫度應(yīng)設(shè)為80，結(jié)果見圖2-3 。 圖2-3 提取溫度對總黃酮提取率的影響2.2.4 提取時間對荔枝草中總黃酮含量的影響 將提取溫度控制在80，料液比控制在1：20，乙醇濃度控制在 70，在這一條件下稱取5份8g的荔枝草，將其全部撕碎，置于容量瓶中，探究在30、60、90、120、150 min不同的提取時間條件下，對荔枝草中總黃酮提取率的影響，結(jié)果如圖2-4所示，當(dāng)提取時間在052h范圍內(nèi)時，荔枝草中總黃酮的提取率會隨著時間的加長而不斷增大，提取時間在2h提取率達(dá)到最大，隨著時間延長，荔枝草中總黃酮的提取率變化不大，逐漸平穩(wěn)。

10、荔枝草中總黃酮的提取率隨著時間的延長不斷上升直至穩(wěn)定，最優(yōu)提取時間應(yīng)為2h，此時提取率最大。2.3 正交試驗法優(yōu)選荔枝草總黃酮提取工藝設(shè)計正交試驗，探索能夠影響提取荔枝草中總黃酮提取率的主要因素：a：乙醇濃度；b：料液比；c：提取溫度；d：提取時間。表3-1為因素水平，表3-2為試驗安排及實驗結(jié)果，表3-3為各因素的方差分析。 由表3-2可知，各種因素對荔枝草中總黃酮提取都具有一定影響，但是其影響程度存在差異，研究結(jié)果顯示其影響順序如下：提取溫度提取時間料液比乙醇的濃度。由表3-3方差分析，結(jié)果顯示提取溫度和提取時間具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05），從節(jié)約成本角度考慮，料液比為10倍，所以可以得到

11、最佳工藝為a1b1c2d2，即就是提取溫度80，10倍量的60%乙醇，提取時間為120 min。3 討論荔枝草是一種常見的民間的中草藥，荔枝草經(jīng)過科學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，其具有很多明顯的治療作用，特別是荔枝草獨特具有的抗氧化活性能力，因而荔枝草還可以治療像痔瘡、癤、癰、皮膚瘙癢等多種疑難雜癥疾病。 中藥中含有各種不同的成分，并且不同成分之間可能會相互作用，生成穩(wěn)定、亞穩(wěn)定的復(fù)雜化合物，這些情況的發(fā)生，都會給中藥成分的分析帶來困難，在一種待測提取物經(jīng)常含有相似化學(xué)成分的化合物，所以，我們要經(jīng)過多重的提取、凈化的過程，才可以用于檢測成分含量，這些提取凈化的過程要盡可能的保留待測化學(xué)成分，分離出非待測成分，從

12、而最大幅度保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，為科學(xué)用藥提供必要的信息支持。研究指出，荔枝草中含有多種化學(xué)成分，主要包括黃酮、木質(zhì)素、二萜類等成分，國內(nèi)研究也有一定發(fā)現(xiàn)，對荔枝草的化學(xué)成分進(jìn)行揭示，指出荔枝草不僅含有黃酮、木質(zhì)素，還有甾醇、揮發(fā)油等成分。 對于中藥而言，一味中藥中含有十幾種或者更多種化學(xué)成分組成，沒有辦法對所有的成分進(jìn)行檢測，在檢測化學(xué)成分時，首先要測定其主要的有效成分，其次是毒性成分、有害物質(zhì)。此外，還要注意的是如果有效成分含量特別低的時候，由于儀器分析的局限性，靈敏性，檢測限，我們應(yīng)換一種含量進(jìn)行檢測。本人通過文獻(xiàn)得知，荔枝草中主要成分為黃酮，預(yù)實驗發(fā)現(xiàn)總黃酮中含有蘆丁，擬以蘆丁為檢測指標(biāo)，對荔枝草中總黃酮的含量進(jìn)行測定。3.3 含量測定方法驗證就是為了證明我們檢測成分時用的分析方法是否符合檢測要求，對于荔枝草的精密度實驗，穩(wěn)定性實驗，重復(fù)性實驗，可以作為分析方法的評估標(biāo)準(zhǔn)。在近幾十年來，荔枝草已經(jīng)進(jìn)行了深入的研究，對其的化學(xué)成分、作用機(jī)理、物質(zhì)基礎(chǔ)取得了重要進(jìn)展，但是，總的來說，研究荔枝草的物質(zhì)基礎(chǔ)比較欠缺。參考文獻(xiàn)1國家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會.中華本草m.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999：6 1932 喻樊，荔枝草化學(xué)成分藥理學(xué)及其研究進(jìn)展j.安徽農(nóng)學(xué)通報，200