大青葉中靛玉紅含量測(cè)定

1、大青葉中靛玉紅含量測(cè)定 【關(guān)鍵詞】大青葉 sfetechnologyofindirubinfromdaqingyeandcontentdeterminationofindirubin 【abstract】aim:tousehplcforthecontentdeterminationofindirubininsupercriticalfluidextraction(sfe)materialfromdaqingyeandtooptimizetheprocessofsfe.methods:contentofindirubinwasusedasindextoevaluatethetechnologie

2、sbasedonorthogonaldesign,inwhich4factorsconsideredwereextractiontemperatureandpressure,separationtemperatureandpressure.ahplcsystemwasusedtodeterminethecontentofindirubin.results:optimalprogramwasasfollows:extractiontemperature50andpressure40mpa,separationtemperature40andpressure8mpa.theaveragerecov

3、eryofindirubinwas102.8%andrsdwas1.48%.conclusion:theextractiontemperature,extractionpressureandseparationpressureallhavesignificanteffectsontheextractionrateofindirubin.thehplcmethodissimple,preciseandsuitableforthecontentdeterminationofindirubininsfematerialofdaqingye. 【keywords】daqingye;sfeco2;ind

4、irubin;chromatography,highpressureliquid 【摘要】目的：建立用hplc測(cè)定大青葉的超臨界萃取物中靛玉紅含量的方法，對(duì)萃取工藝進(jìn)行優(yōu)選.方法：采用超臨界萃取法進(jìn)行l(wèi)9(34)正交實(shí)驗(yàn).以靛玉紅含量考察萃取溫度、萃取壓力、分離溫度及分離壓力四個(gè)因素的影響.采用hplc法測(cè)定萃取物中靛玉紅含量.結(jié)果：最佳萃取工藝為萃取溫度50,萃取壓力40mpa,分離溫度40及分離壓力8mpa.靛玉紅平均回收率為102.8%，rsd為1.48%.結(jié)論：萃取溫度、萃取壓力及分離壓力對(duì)大青葉中靛玉紅的萃取都有顯著影響.hplc法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，可作為超臨界萃取大青葉中靛玉紅的

5、質(zhì)量控制方法. 【關(guān)鍵詞】大青葉；co2超臨界萃?。坏逵窦t；色譜法，高壓液相 0引言 靛玉紅主要來源于植物馬藍(lán)(baphicacanthuscusia)、蓼藍(lán)(polygonumtinctorium)及菘藍(lán)(isatisindigotica)的中藥材如大青葉、板藍(lán)根、青黛等，靛玉紅是其主要有效成分.靛玉紅有治療慢性髓性白血病作用，是一種應(yīng)用前景廣闊的抗腫瘤成分1. 靛玉紅在中藥材中含量很低，為減少藥物使用量，提高生物利用度，我們用超臨界流體萃取（sfe）法對(duì)大青葉中的靛玉紅進(jìn)行分離提純，同時(shí)建立萃取物中靛玉紅含量的hplc測(cè)定方法，優(yōu)化靛玉紅sfe工藝. 1材料和方法 1.1材料goldens

6、ystem高效液相色譜儀（美國(guó)beckman公司），配125型高壓雙泵，168型二極管陣列檢測(cè)器；色譜柱:synersifusionrp柱（4.6mm250mm，4m，美國(guó)phenomenex公司）；fy2215006超臨界萃取儀（南通市飛宇石油科技開發(fā)有限公司）；r200d電子分析天平（德國(guó)satorius公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（eyelaaspiratora3srikakikatco.ltd）.大青葉購(gòu)自西安藥材市場(chǎng)，按照中國(guó)藥典（2005年版）有關(guān)大青葉項(xiàng)下鑒定本品為合格藥材；靛玉紅對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)717200204；甲醇為hplc級(jí)（美國(guó)fisher公司），水為超純水

7、，其余試劑均為ar級(jí). 1.2方法 1.2.1sfe正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)采用l9(34)設(shè)計(jì)，選擇萃取溫度、萃取壓力、分離溫度及分離壓力四個(gè)因素，每個(gè)因素取3水平.分別為萃取溫度40,50及60；萃取壓力20,30及40mpa；分離溫度30,40及50；分離壓力8,10及12mpa. 1.2.2供試品溶液的制備打開超臨界萃取儀，按1.2.1的設(shè)計(jì)設(shè)置萃取儀溫度參數(shù)，預(yù)熱完畢后將精密稱取的大青葉50g放入萃取缸，按1.2.1的設(shè)計(jì)將壓力值調(diào)整到需要的參數(shù)，同時(shí)向副泵系統(tǒng)下的夾帶劑缸中加入氯仿100ml，開動(dòng)副泵，開始萃取.每半小時(shí)收集一次分離液，至2h內(nèi)連續(xù)收集不到液體時(shí)停止該次實(shí)驗(yàn).將收集到的分離液在

8、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干，用甲醇定容于10ml容量瓶中，作為供試品溶液. 1.2.3色譜條件以甲醇0.015mol/l醋酸銨（7228）（用醋酸以1150的比例調(diào)節(jié)ph值）為流動(dòng)相；流速為1.0ml/min；檢測(cè)器靈敏度：1.0aufs；柱溫20；檢測(cè)波長(zhǎng)289nm.理論板數(shù)按靛玉紅峰計(jì)算不低于4000.對(duì)照品及樣品色譜圖不同(圖1,2). 圖1靛玉紅對(duì)照品的色譜圖（略） 圖2樣品色譜圖（略） 1.2.4線性考察精密稱取靛玉紅對(duì)照品10mg，用甲醇定容于50ml容量瓶中，超聲5min，制成0.2g/l的對(duì)照品溶液，分別精密吸取該對(duì)照品溶液3,2,1,0.5及0.2ml于5ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度

9、.各取以上5個(gè)對(duì)照品溶液20l進(jìn)樣于hplc系統(tǒng)中，以色譜峰面積對(duì)靛玉紅進(jìn)樣濃度作線性回歸，得回歸方程y=10.83427+0.68547x,r=0.9994.靛玉紅在8120mg/l內(nèi)，線性關(guān)系良好. 1.2.5精密度測(cè)定取線性關(guān)系中同一對(duì)照品液連續(xù)進(jìn)樣5次，每次20l，靛玉紅峰面積rsd為1.74%. 1.2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)將同一供試品液在0,1,2,4,12h各進(jìn)樣一次測(cè)試峰面積，結(jié)果rsd為2.65%，表明樣品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定. 1.2.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一供試品液5份，依法測(cè)定，結(jié)果靛玉紅平均含量為17.33g/g，rsd為2.07%. 1.2.8加樣回收率實(shí)驗(yàn)精密量取已知含量的同一供

10、試品液3份，每份1ml，分別精密加入0.4ml濃度為0.04g/l的對(duì)照品溶液，按樣品含量測(cè)定方法操作，平均回收率為102.8%,rsd為1.48%. 1.2.9樣品測(cè)定精密吸取上述正交實(shí)驗(yàn)提取的供試品溶液各20l進(jìn)樣,按1.2.3色譜條件進(jìn)行測(cè)定. 2結(jié)果 外標(biāo)法計(jì)算靛玉紅含量（表1），并計(jì)算每個(gè)因素每水平的靛玉紅含量（表2）. 表1不同工藝的靛玉紅含量（略） 表2每個(gè)因素每水平的靛玉紅含量（略） k值為每因素每水平的三個(gè)值之和，如k1為每因素水平為1時(shí)的三個(gè)值的和，余同.r為級(jí)差，即k1,k2和k3三個(gè)值中最大值與最小值之差. 對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，結(jié)果萃取溫度、萃取壓力及分離壓力對(duì)靛玉

11、紅的回收率均有顯著影響（p萃取壓力分離壓力分離溫度.以每個(gè)因素每水平的k值中的最大值得知：最佳工藝為萃取溫度50、萃取壓力40mpa、分離溫度40及分離壓力8mpa.按最佳工藝條件萃取了三份大青葉（50g）進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果靛玉紅平均含量為21.87g/g，表明該工藝穩(wěn)定，測(cè)定值在較高范圍. 3討論 3.1萃取實(shí)驗(yàn)條件的選擇在設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)時(shí)，為更準(zhǔn)確地定位萃取溫度的水平范圍，在sfe的預(yù)實(shí)驗(yàn)中做過萃取溫度最高60和最低30（其他條件固定不變）的靛玉紅回收率比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)高溫萃取回收率較高，故在正交設(shè)計(jì)中舍去萃取溫度30這個(gè)水平.另三個(gè)因素的水平設(shè)定是依據(jù)儀器的工作參數(shù)而定的.在選擇夾帶劑時(shí)曾做

12、過氯仿和甲醇的比較，因?yàn)榈逵窦t在冷甲醇中易析出，故本實(shí)驗(yàn)選擇氯仿為萃取夾帶劑.在預(yù)實(shí)驗(yàn)中考慮了萃取時(shí)間和co2流量的影響，結(jié)果不同的實(shí)驗(yàn)條件下，分離液的流出沒有固定的時(shí)間規(guī)律，萃取儀co2流量在2l/h左右,不可調(diào)節(jié),故未將萃取時(shí)間和co2流量?jī)梢蛩丶{入正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中. 3.2hplc條件的選擇靛玉紅在242,292,362,544nm處有吸收2，而本實(shí)驗(yàn)中靛玉紅的紫外最大吸收波長(zhǎng)為289nm.實(shí)驗(yàn)曾用乙腈與水配比作流動(dòng)相，在反相色譜中用有機(jī)堿三乙胺調(diào)節(jié)峰形，結(jié)果效果不理想.最后用甲醇比水加入醋酸銨，用酸適當(dāng)調(diào)整ph值，所得結(jié)果峰形理想，分離效果好.曾直接以氯仿作溶劑進(jìn)樣，結(jié)果氯仿有較強(qiáng)的吸收峰，改為甲醇作溶劑后得以改善. 查閱文獻(xiàn)未見類似有關(guān)大青葉中靛玉紅sfe工藝的報(bào)道.而大青葉中含有