埃博拉出血熱實驗室檢測方案二

1、埃博拉出血熱實驗室檢測方案二埃博拉出血熱實驗室檢測方案（第二版）埃博拉出血熱是一種嚴重的急性傳染病，埃博拉出血熱患者血液中有較高的病毒載量, 可能發(fā)生人-人傳播和院內感染，病死率高。直接接觸傳播是本病最主要的傳播途徑。可以 通過接觸病人或被感染動物的體液、分泌物、排泄物及其污染物等而感染。埃博拉出血熱 的臨床表現(xiàn)和其他一些病毒性出血熱相似，需要通過實驗室進行確診。在目前階段，以對 病人血液標本檢測為主。為及時檢測和確認埃博拉出血熱病例，規(guī)范實驗室檢測程序，提 高檢測質量，為指導病例的管理和出院提供依據(jù)，特制定本方案。9 檢測對象包括留觀病例、疑似病例和確診病例，病例定義參見國家衛(wèi)生計生委制定的

2、埃博拉 出血熱相關病例診斷和處置路徑。二、標本采集、保存和運輸（一）標本采集用分離膠無菌真空促凝管采集靜脈血，每管3ml,標記后4保存，填寫標本采集登 記表（附表1）0留觀病例、疑似病例采集4管，其中2管送指定的具有埃博拉出血熱檢 測資質的實驗室進行埃博拉病毒檢測，2管保存于樣本采集單位或所在省疾病預防控制機 構，待排除埃博拉病毒感染后用于其他病原體的篩查；確診病例采集恢復期血標本，送國 家疾控中心病毒病所進行檢測。（二）標本保存、運送未分離血清的全血標本應4保存，并盡快分離血清；血清標本長期保存應置于-70 以下，標本保存不超過1周可置-20。標本運輸應按照相關生物安全規(guī)定，采取a類包裝，低

3、溫冷藏運輸，避免反復凍融 （附件1）0三、檢測內容埃博拉病毒核酸檢測、埃博拉病毒抗原檢測和igm、igg抗體檢測。四、實驗室檢測 方法（一）病原學檢測1 .核酸檢測：為目前早期診斷、早期發(fā)現(xiàn)埃博拉出血熱病例的主要檢測方法。采用 熒光定量pcr進行病毒核酸檢測，患者標本中擴增到特異性核酸，可確診埃博拉病毒感 染（附件2）。傳統(tǒng)rlpcr因易出現(xiàn)污染使用受限，但可以獲得病毒基因序列。發(fā)病后3天內，血標本中埃博拉病毒核酸檢出率低，檢測陰性不能排除埃博拉病毒感 染，應結合病例的流行病學史和臨床表現(xiàn)進行綜合判斷。發(fā)病后310天血標本病毒核酸 檢出率高，檢測陰性可排除埃博拉病毒感染。2 .病毒抗原檢測：用

4、酶聯(lián)免疫法檢測埃博拉病毒核蛋白抗原。病毒抗原檢測陽性可 確診（附件3）。發(fā)病后3天內，血標本中埃博拉病毒抗原檢出率低，檢測陰性不能排除 埃博拉病毒感染，發(fā)病后310天血標本病毒抗原檢出率高。（二）血清學檢測1 .血清特異性igm抗體：采用捕獲法elisa方法檢測。igu抗體陽性可確診（附件 4）。2 .血清特異性igg抗體：目前采用間接法elisa檢測igg抗體。單價血清埃博拉病毒 igg抗體陽性提示曾感染埃博拉病毒，雙份血清埃博拉病毒igg抗體陽轉或恢復期滴度較 急性期4倍或者以上增高者可確診（附件5）。（三）結果的報告、復核和反饋埃博拉病毒檢測機構應將所有陽性和部分陰性血清標本送中國疾病預

5、防控制中心病毒 病所進行復核檢測。實驗室檢測結果應及時反饋標本送檢單位，并盡快上報上級主管部門 （附表2）。五、生物安全按照病原微生物實驗室生物安全管理條例等相關規(guī)定要求，做好生物安全工作。9 *實驗室檢測1 .凡涉及埃博拉病毒的分離、培養(yǎng)和動物實驗，需在生物安全4級（bsl-4/absl-4）實驗室內進行。涉及未經培養(yǎng)有感染性材料的實驗活動，需在bsl- 3實驗室內進行。血清學檢測應在bsl-3實驗室內，且標本需先601小時滅活后，再進行后續(xù)實驗操作。核酸檢測時，需在bsl-3實驗室內加入核酸提取裂解液,完成病 毒rna提取，并對裝有病毒rna樣品管的外表面進行徹底消毒后，可在bsl-3實驗

6、室以外 進行擴增檢測。2.在進行感染性材料操作時，每次標本份數(shù)不宜過多，每份標本量不宜過大。（二） 生物安全防護在實驗室處理感染性標本時，應嚴格按照操作規(guī)范在bsl-3實驗室內進行。實驗室工 作人員應穿著遮蓋全身的個人防護裝備，包括防滲漏防護服、n95或以上口罩、防護目鏡、 防護面罩、乳膠手套等，當需進行感染性標本離心、較大量標本（210 ml）分裝處理等 時應使用正壓頭盔。實驗人員有體表開放式傷口時不宜參加實驗活動。涉及感染性材料的離心應使用有密封蓋的離心桶或轉頭進行標本離心，應在生物安全 柜內打開離心轉頭放入或取出裝有標本的離心管。在標本的采集、包裝和實驗室檢測等過程中所產生的醫(yī)療廢物，可

7、能具有生物危險性, 應當按照醫(yī)療廢物管理條例和醫(yī)療衛(wèi)生機構醫(yī)療廢物管理辦法等相關規(guī)定及時處 理。實驗室檢測埃博拉病毒相關感染性標本的實驗活動發(fā)生意外時，應及時啟動相關應急 預案（附件6）。附件：附件l埃博拉出血熱相關標本采集、包裝、運輸技術指南附件2.埃博拉病毒核酸 檢測方法附件3.埃博拉病毒核蛋白抗原檢測方法（雙抗體夾心法elisa）附件4.埃博拉病 毒igm抗體檢測方法（抗體捕捉法elisa）附件5.埃博拉病毒igg抗體檢測方法（間接 法elisa）附件6.埃博拉出血熱相關標本實驗活動意外應急預案附表：附表1.埃博拉出血熱送檢材料一覽表附表2.埃博拉出血熱實驗室檢測結果一覽表附件1埃博拉出

8、血熱相關標本采集、包裝、運輸技術指南埃博拉出血熱（ebola hemorrhagic fever）是由埃博拉病毒（ebola virus）引起的一種 急性出血性傳染病。人主要通過接觸病人或感染動物的體液、分泌物和排泄物等而感染， 臨床表現(xiàn)主要為突起發(fā)熱、出血和多臟器損害，病死率可高達50%-90k2021年，在幾內 亞、利比里亞和塞拉利昂等西非國家發(fā)生歷史上最嚴重的埃博拉出血熱暴發(fā)疫情。本病潛 伏期為221天，通常為810天。為使醫(yī)療機構疾病預防控制機構在埃博拉出血熱患者或疑似患者的診治過程中，指導 埃博拉出血熱相關標本的采集、包裝和運輸工作，保證生物安全，特制定本指南。一、生物安全防護所有樣

9、本的采集或處理應遵守醫(yī)院感染管理規(guī)范和病原微生物實驗室生物安全 管理條例等相關生物安全規(guī)定，在標準預防的基礎上采用飛沫和接觸隔離的預防措施。2、樣本采集時，應嚴格按照bsl-3級實驗室規(guī)定做好個人防護。應穿戴醫(yī)用防護服、 可遮蓋口鼻的醫(yī)用防護口罩（n95）、雙層乳膠手套、護目鏡、頭部面部保護罩、專用橡膠 靴等。二、標本采集。（一）采集時間一般發(fā)病后2周內，可在患者血標本中檢測到病毒核酸和抗原，發(fā)病后310天的標 本核酸和抗原的檢出率高。在發(fā)病后數(shù)月內，可在特定分泌物中持續(xù)檢出病毒。最早可從 發(fā)病后2天的患者血清中檢出特異性igm抗體，igm抗體可維持數(shù)月。發(fā)病后7-10天可檢 出ig g抗體，康復者ig g抗體可維持數(shù)年。發(fā)病10-14天以后的標本病毒特異性抗體的