WB的失敗圖分析

1、WBWB問(wèn)題條帶分析問(wèn)題條帶分析 報(bào)告人：楊羚報(bào)告人：楊羚1、目的條帶啥也沒(méi)有、目的條帶啥也沒(méi)有原因原因：只重復(fù)做沒(méi)有思考。這次目的條帶和內(nèi)參的二抗種屬是不同的。網(wǎng)上查閱經(jīng)驗(yàn)網(wǎng)上查閱經(jīng)驗(yàn)：一點(diǎn)沒(méi)有，甚至連內(nèi)參都沒(méi)有，可能抗體加錯(cuò)了，轉(zhuǎn)膜問(wèn)題甚至膜放反； 條帶細(xì)微接近沒(méi)有，上樣量少，一抗?jié)舛鹊?，顯色液失效.解決辦法解決辦法：實(shí)驗(yàn)前檢查抗體種屬是否加錯(cuò)，確認(rèn)轉(zhuǎn)膜沒(méi)有問(wèn)題。20150825_重復(fù)做CST1只有點(diǎn)內(nèi)參20150826_CST1重做2、高背景、高背景20150814_JNk高效價(jià)第一次.bmp原因原因：封閉不夠好，洗膜不充充分，抗體濃度特別是二抗過(guò)高。網(wǎng)上查閱經(jīng)驗(yàn)網(wǎng)上查閱經(jīng)驗(yàn)：奶粉封閉時(shí)

2、間夠，注意操作規(guī)范，不偷工減料洗膜實(shí)際解決方法實(shí)際解決方法：奶粉封閉時(shí)間延長(zhǎng)了半個(gè)小時(shí)， 對(duì)于這種剪小后的片，用小洗滌盒洗，總之保證其洗膜充分20150816_JNK高效價(jià)第二次.bmp3、出現(xiàn)許多黑點(diǎn)和斑、出現(xiàn)許多黑點(diǎn)和斑原因原因：膜上其他部位與一抗或者二抗非特異性結(jié)合。網(wǎng)上查閱經(jīng)驗(yàn)網(wǎng)上查閱經(jīng)驗(yàn)：不要封閉時(shí)才去匆忙配奶粉，要確保奶粉完全溶解,否則不溶顆粒附著膜上。溶解后靜止，輕吸上層牛奶封閉，封閉結(jié)束，三次洗膜徹底 201507內(nèi)參略成功.bmp20150829sirt3失敗品4、條帶拖尾、條帶拖尾可能原因可能原因：蛋白量太大，一抗?jié)舛群蜁r(shí)間太長(zhǎng);個(gè)人猜測(cè)，跑膠的問(wèn)題解決辦法解決辦法：調(diào)整蛋

3、白量，同時(shí)一抗?jié)舛瓤s小和孵育時(shí)間縮短 201508-HSF-LXF.jpg5、出現(xiàn)非均一性背景、出現(xiàn)非均一性背景原因原因：膜可能干過(guò)！解決辦法解決辦法：確保蛋白面不要被風(fēng)干很長(zhǎng)時(shí)間，一定要用不漏水的封閉盒并蓋上蓋子，防止過(guò)夜16個(gè)小時(shí)液體流失。 Gapdh.jpg6、條帶中出現(xiàn)規(guī)則白圈、條帶中出現(xiàn)規(guī)則白圈原因原因：轉(zhuǎn)膜出現(xiàn)氣泡！網(wǎng)絡(luò)經(jīng)驗(yàn)：網(wǎng)絡(luò)經(jīng)驗(yàn)：放膜時(shí)候，使膜U型放，兩邊下壓；蓋海綿前，確定氣泡除盡，蓋后放置動(dòng)作要小幅輕微，防止產(chǎn)生不必要的氣泡。 7、最邊緣條帶彎曲、最邊緣條帶彎曲原因原因：電泳電流不均解決辦法解決辦法：盡量不使用兩邊的兩孔 BNP+Gapdh.jpg8、其他電泳過(guò)程出現(xiàn)的問(wèn)

4、題現(xiàn)象、其他電泳過(guò)程出現(xiàn)的問(wèn)題現(xiàn)象（1）整個(gè)條帶呈 “ ” 狀：凝膠冷卻不均一，電泳槽老化。（2）整個(gè)條帶呈“ ”： 凝膠左右兩頭沒(méi)有凝固好（3）溴酚藍(lán)拖尾：樣品溶解不好。（4）縱向的紋理：上樣樣品中存在不溶性顆粒（5）溴酚藍(lán)很粗：濃縮膠濃縮效果不好，可能是濃縮膠太短，或者是濃縮膠配錯(cuò)。（6）在分離膠中跑不動(dòng)：Tris-Cl PH值不對(duì)，或者忘記加SDS。8、配膠問(wèn)題導(dǎo)致的失敗、配膠問(wèn)題導(dǎo)致的失敗條帶變形條帶變形 原因：膠體中存在氣泡，或不溶性雜質(zhì)，膠不均不平整解決辦法：配膠的小燒杯，水，SDS，tris等等干凈無(wú)雜質(zhì)。貼邊角加入液體，凝固時(shí)間避免大幅度動(dòng)作觸碰。 9、配膠問(wèn)題導(dǎo)致的失敗、配膠問(wèn)題導(dǎo)致的失敗條帶啞鈴狀條帶啞鈴狀原因：配膠問(wèn)題，可能是插或拔梳子引起的凹凸不平整； 還有可能，樣品含較多雜質(zhì)雜質(zhì)沉積空中間.10、其他、其他（1）蛋白分子量偏高或者偏低?？赡苁悄z的濃度與目的蛋白的濃度不對(duì)應(yīng)，比如說(shuō)100KD的蛋白你用12%的膠跑，或者說(shuō)20KD的蛋白你用6%的膠跑。（2）蛋白質(zhì)降解。蛋白質(zhì)降解后很可能會(huì)在比原來(lái)位置低的地方出現(xiàn)主帶，然后會(huì)出現(xiàn)一些其他帶，最主要特點(diǎn)是所有的條帶比正常的都低，并且條帶模糊不清晰。（3）所有條帶