天然成分分離與精制一般方法

1、五、天然成分分離與精制一般方法（1）簡單萃?。豪梅忠郝┒愤M(jìn)行兩相溶劑萃取。五、天然成分分離與精制一般方法（2）液液連續(xù)萃取重溶劑萃取器輕溶劑萃取器五、天然成分分離與精制一般方法 （3 ） 逆流連續(xù)萃取：是一種連續(xù)的兩相溶劑萃取法；其裝置可具有一根、數(shù)根或更多根的萃取管；效率高，不易乳化。 重質(zhì)提取液提取裝置示意圖輕質(zhì)提取液提取裝置示意圖多管逆流連續(xù)萃取法裝置圖五、天然成分分離與精制一般方法（4）逆流分配法（CCD）：又稱逆流分溶法、逆流分布法或反流分布法，與兩相溶劑逆流萃取法原理一致，對于分離具有非常相似性質(zhì)的混合物效果較好。一般50時，簡單萃取即可分離，50時，則易采用逆流分溶法。 CCD

2、法的分離過程示意圖五、天然成分分離與精制一般方法（5）液滴逆流分配法（DCCC）：本法必須選用能生成液滴的溶劑系統(tǒng)，且對高分子化合物的分離效果較差，處理樣品量小，并要有一定的設(shè)備，操作較繁瑣。 DCCC原理示意圖五、天然成分分離與精制一般方法2.紙色譜（PPC）原理：紙層析法實(shí)際上是一種液液分配技術(shù)，紙主要系由純粹的纖維素組成，纖維素能從大氣，尤其能從被水蒸氣飽和的大氣中吸收高達(dá)22%左右的水，正是這些吸附在纖維素上的水起著固定相的作用，為保證使纖維素維持被水所飽和的狀態(tài)，許多用于紙層析法的展開溶劑都含水，作為溶劑的一個組分，當(dāng)溶劑沿紙上行時，化合物即在固定的水相和移動的溶劑相之間進(jìn)行分配。

3、操作方法：作紙層析時，在一張高級濾紙的底邊附近點(diǎn)上個斑點(diǎn)然后將紙放在一只展開槽中， 溶劑借助毛細(xì)管作用沿紙上行，并帶著點(diǎn)在紙上的混合物的組分以不同速率向上移動，由于水相是固定的，因此混合物中水溶性最大，或形成氫鍵能力最大的組分成了受到阻止而移動得最慢的組分。紙層析法多數(shù)應(yīng)用于高度極性的化合物，或用于具有多官能團(tuán)的化合物。最普遍使用紙層析法的是糖類、氨基酸和天然色素。由于濾紙是可以造得很均勻的，故紙層析法中的Rf值通常是可信賴的，然而，測量Rf值時習(xí)慣上都從斑點(diǎn)的前線(頂部)量起，而不像TLC中習(xí)慣上都從斑點(diǎn)中心量起。五、天然成分分離與精制一般方法上行展開常用儀器下行展開常用儀器中藥木蝴蝶黃酮體

4、的紙層析展開溶劑：乙酸乙酯吡啶 水（4：2：1)五、天然成分分離與精制一般方法 糖類徑向紙層析溶劑系統(tǒng)：正丁醇丙酮水（2：7：1） 顯色劑：鄰苯二甲酸苯胺樣品1麥芽糖、核搪；2乳已糖；3麥芽糖、乳已糖、葡萄糖、阿拉伯糖、核搪、鼠李糖；4葡萄糖、鼠李糖； 5阿拉伯糖。紙層析小結(jié)原理：分配原理支持劑：纖維素固定相：水 流動相：水飽和的有機(jī)溶劑 Rf值：化合物極性越小，Rf值越大；反之，化合物極性越大，Rf值越小。應(yīng)用：用作微量分析，特別適合于親水性較強(qiáng)的成分，其層析效果往往比吸附薄層色譜效果好。但紙層析一般需要較長的時間。 五、天然成分分離與精制一般方法3.液液分配柱色譜 原理： 分配層析是以一種

5、多孔物質(zhì)吸著一種極性溶劑，此極性溶劑在層析過程中始終固定在支持劑上，因此稱為固定相。另用一非極性溶劑(與固定相不相互溶)洗脫，此洗脫劑在層析過程中始終是移動的，稱為移動相。溶質(zhì)在固定相和移動相之間，在柱上作連續(xù)的、動態(tài)的不斷分配，由于不同成分在兩相間分配系數(shù)的差異而得以分開。 分配層析所用多孔支持劉，主要有硅膠、硅藻土(商品名Celite)、纖維粉等，近年來，有用有機(jī)支持劑的，如微孔聚乙烯粉等，分配層析所用儀器操作一般與吸附層析相同。五、天然成分分離與精制一般方法操作方法：將預(yù)先選定的固定相溶劑(一般為水溶液或極性溶劑)加入支持劑硅膠中，攪拌混合均勻，傾入事先選定的移動相溶劑中，激烈攪拌，使兩

6、相互相飽和達(dá)到平衡；層析管中放移動相(事先務(wù)必用固定相溶劑劇烈振搖，互相飽和，以造成層析時穩(wěn)定的平衡條件)，將上述吸著固定相的硅膠濕法裝柱，不斷輕敲管壁，使固定相支持劑壓緊，樣品一般可溶于移動相中上柱，繼以移動相洗脫，按固定體積收集，分別濃縮處理；或根據(jù)樣品的具體情況選擇一種物理方法作含量測定，與氧化鋁層折相同。五、天然成分分離與精制一般方法層析分離過程用一只螺旋夾控制流速的玻管用活塞控制流速的 玻管五、天然成分分離與精制一般方法 如圖所示為薄膜塑料柱，因使用方便、節(jié)省淋洗劑、減少蒸發(fā)量等優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用日趨廣泛。薄膜塑料柱總是以扁平成卷保存的，兩側(cè)常有很深的折痕。使用前需將裁取的一段薄膜管一端扎緊

7、，另一端套在一段玻管上井用棉線扎固。將這段玻管穿過一個軟木塞。然后將薄膜管放進(jìn)一根又粗又長，下端拉細(xì)了的玻管內(nèi)，使塞子塞緊大玻管的口。用水泵自大玻管下端抽氣，薄膜柱即因內(nèi)部壓強(qiáng)大于外部而自行展圓。待裝入吸附劑后在其下部扎幾個小孔即可使用。五、天然成分分離與精制一般方法正相分配色譜 固定相：水、緩沖溶液 流動相：固定相飽和的氯仿、乙酸乙酯、丁醇等弱極性有機(jī)溶劑 洗脫順序：化合物極性越小，越先出柱；反之，化合物極性越大，越后出柱。 應(yīng)用：通常用于分離水溶性或極性較大的成分，如生物堿、苷類、糖類、有機(jī)酸等化合物。 反相分配色譜固定相：石蠟油、化學(xué)鍵合固定相 流動相：固定相飽和的水或甲醇等強(qiáng)極性有機(jī)溶

8、劑 洗脫順序：化合物極性越大，越先出柱；反之，化合物極性越小，越后出柱。 應(yīng)用：適合于分離脂溶性化合物，如高級脂肪酸、油脂、游離甾體等。 五、天然成分分離與精制一般方法4.液液分配薄層色譜法 液液分配色譜法也可在硅膠薄層色譜上進(jìn)行。因此，液液分配柱色譜的最佳分離條件可以根據(jù)相應(yīng)的薄層色譜結(jié)果（正相柱用正相薄層色譜，反相柱用反相薄層色譜）進(jìn)行選定。 舉例： 硅膠G薄層硬板的制備 硅膠是最常用的吸附劑。使用市售硅膠G(即在硅膠中已加入1214煅石膏)制板時，只需將適量硅膠G加水2.53份，調(diào)成均勻的糊狀，至石膏開始凝固時鋪板；鋪成的薄層板置水平臺面上，自然干燥后，即可在105110烘箱中加熱活化，

9、一般需12小時，從烘箱中取出薄層，保存于干燥器中備用；干燥器可用無水氯化鈣或硅膠為干燥劑，活化時間根據(jù)被分離組分的性能而定。五、天然成分分離與精制一般方法 自制簡易涂鋪器示意圖 1. 涂鋪器 2玻璃板 3含粘合劑或不含粘合劑的吸附劑 4涂鋪過吸附劑的薄層硬板的涂鋪裝置示意圖載玻片浸漬涂漿五、天然成分分離與精制一般方法制作兩根毛細(xì)吸液管示意圖1.在火焰中旋轉(zhuǎn)直至燒軟 2.從火焰中取出并拉開3.在拉伸段的中央輕輕搓捻 4.折成兩半得到兩個吸液管 將l毫克左右的固體試樣或一滴液體試樣置于一個諸如表面皿或試管之類的小容器中，然后將樣品用幾滴揮發(fā)性溶劑（如氯仿、丙酮或二氯甲烷等）加以溶解，如果試樣是溶液

10、，就可直接用該溶液， 按上法制成的小毛細(xì)滴管在充填試樣時，可將其細(xì)的一端浸入試樣溶液中 毛細(xì)管作用使試樣進(jìn)人滴管中，將滴管輕輕觸及薄層板中距底部l厘米左右處的一個點(diǎn)上，使滴管內(nèi)的液體流出。五、天然成分分離與精制一般方法薄層板在不同的層析缸中展(a)為立式，(b)為臥式，(c)和(d)為斜靠式，(e)為下行式， (f)為制備純樣品所用的大型展開槽，亦為斜靠式。(a)(b)，(c)，(d)，(f)統(tǒng)稱上行式。展開的薄層色譜板五、天然成分分離與精制一般方法紫外顯色法：另一種能給出良好顯示結(jié)果的方法是通過在涂板所用的吸附劑中加進(jìn)一種熒光指示劑來加以實(shí)現(xiàn)的。經(jīng)常使用的是硫化鋅和硫化鎘的混合物。用此法處理

11、過的板放在紫外光下時，整塊板發(fā)熒光，然而板上會出現(xiàn)黑點(diǎn)，所看到這個黑點(diǎn)就是分離開來的化合物將熒光猝滅之處。碘顯色法：將已展開過且已干燥過的薄板放在一只內(nèi)中放有幾粒碘晶體的有螺旋蓋的廣口瓶中，將瓶蓋好，置溫度較低的蒸氣浴上緩緩加熱瓶內(nèi)充滿碘蒸氣，因此斑點(diǎn)即開始出現(xiàn)，當(dāng)斑點(diǎn)的呈色已足夠強(qiáng)時，將板從瓶中取出，用鉛筆畫出斑點(diǎn)之輪廓，斑點(diǎn)是不能持久顯色的，它們的顏色系由碘和有機(jī)物所形成的絡(luò)合物造成當(dāng)?shù)鈴陌迳仙A逸出時，斑點(diǎn)即行褪色。因此，應(yīng)該迅速標(biāo)清它們的輪廓，除飽和烴和烴基鹵外，幾乎所有化合物均會與碘形成絡(luò)合物， 斑點(diǎn)的強(qiáng)度并不精確地代表存在的物料量，只不過是一種最粗略的指示而已。五、天然成分分離與精

12、制一般方法展開溶劑的快捷選擇法：在單獨(dú)一塊板上點(diǎn)上某一樣品的幾個班點(diǎn)，斑點(diǎn)之間至少應(yīng)相隔約1厘米，讓溶劑充入一支滴管中并讓此滴管與斑點(diǎn)之一輕輕接觸，溶劑將向外擴(kuò)展成一圓圈，應(yīng)將溶劑前沿用鉛筆加以標(biāo)出，在每一斑點(diǎn)上各點(diǎn)上一種不問溶劑，當(dāng)這些溶劑向外擴(kuò)展時，所有斑點(diǎn)都將擴(kuò)大成同心圓環(huán)從這些環(huán)的外形來看，便可對溶劑的適宜性作出大致的判斷。圖所示者即為用此法進(jìn)行試驗(yàn)時經(jīng)常遇到的幾種情況。五、天然成分分離與精制一般方法Shall設(shè)計(jì)的簿層色譜條件選擇圖 圖中的羅馬數(shù)字表示吸附劑活性級別，實(shí)線三角形是可以轉(zhuǎn)動的，虛線三角形表示旋轉(zhuǎn)后的位置。假設(shè)分離非極性化合物，將三角形的一個角旋向分析物中的非極性位置，則其余兩個角便指出所要求的溶劑(非極性)和吸附劑的活性級別，這只是一個粗略的原則。五、天然成分