實驗二-部分清熱藥的體外抗菌實驗精編版

1、學(xué)習(xí)要求學(xué)習(xí)要求 通過平板打孔法，通過平板打孔法，(1).學(xué)習(xí)體外抑菌實學(xué)習(xí)體外抑菌實驗的基本操作，驗的基本操作，(2).了解部分清熱藥和大蒜的了解部分清熱藥和大蒜的抑菌作用。抑菌作用。背景介紹背景介紹-1-1 藥物的體外抑菌試驗是為了檢查藥物的抑藥物的體外抑菌試驗是為了檢查藥物的抑菌能力。該項試驗方法已廣泛應(yīng)用于菌能力。該項試驗方法已廣泛應(yīng)用于新藥研究新藥研究和和指導(dǎo)臨床用藥指導(dǎo)臨床用藥。如抗菌藥物的篩選，提取過。如抗菌藥物的篩選，提取過程的生物追蹤、抗菌譜的測定、耐藥譜的測定程的生物追蹤、抗菌譜的測定、耐藥譜的測定、藥敏試驗、藥物血濃度測定等各個方面。、藥敏試驗、藥物血濃度測定等各個方面。

2、背景介紹背景介紹-1-1系列稀釋法系列稀釋法瓊脂擴(kuò)散法瓊脂擴(kuò)散法液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基系列稀釋法系列稀釋法固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基系列稀釋法系列稀釋法測定藥物的最小抑測定藥物的最小抑菌濃度（菌濃度（MIC）背景介紹背景介紹-1-1系列稀釋法系列稀釋法瓊脂擴(kuò)散法瓊脂擴(kuò)散法液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基系列稀釋法系列稀釋法固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基系列稀釋法系列稀釋法測定藥物的最小抑測定藥物的最小抑菌濃度（菌濃度（MIC）濾紙片法濾紙片法打孔法打孔法挖溝法挖溝法管碟法管碟法：抗菌藥物的篩選：抗菌藥物的篩選背景介紹背景介紹-1-1系列稀釋法系列稀釋法瓊脂擴(kuò)散法瓊脂擴(kuò)散法液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基系列稀釋法系列稀釋法固體培養(yǎng)基固

3、體培養(yǎng)基系列稀釋法系列稀釋法測定藥物的最小抑測定藥物的最小抑菌濃度（菌濃度（MIC）濾紙片法濾紙片法打孔法打孔法挖溝法挖溝法管碟法管碟法：監(jiān)測抗菌藥物血藥濃度：監(jiān)測抗菌藥物血藥濃度背景介紹背景介紹-1-1系列稀釋法系列稀釋法瓊脂擴(kuò)散法瓊脂擴(kuò)散法液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基系列稀釋法系列稀釋法固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基系列稀釋法系列稀釋法測定藥物的最小抑測定藥物的最小抑菌濃度（菌濃度（MIC）濾紙片法濾紙片法打孔法打孔法挖溝法挖溝法管碟法管碟法背景介紹背景介紹-1-1系列稀釋法系列稀釋法瓊脂擴(kuò)散法瓊脂擴(kuò)散法液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基系列稀釋法系列稀釋法固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基系列稀釋法系列稀釋法測定藥物的最小抑測定藥物

4、的最小抑菌濃度（菌濃度（MIC）濾紙片法濾紙片法打孔法打孔法挖溝法挖溝法管碟法管碟法：測試藥物對不同種細(xì)菌的抑測試藥物對不同種細(xì)菌的抑制制背景介紹背景介紹-1-1系列稀釋法系列稀釋法瓊脂擴(kuò)散法瓊脂擴(kuò)散法液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基系列稀釋法系列稀釋法固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基系列稀釋法系列稀釋法測定藥物的最小抑測定藥物的最小抑菌濃度（菌濃度（MIC）濾紙片法濾紙片法打孔法打孔法挖溝法挖溝法管碟法管碟法背景介紹背景介紹-2-2清熱藥清熱藥指藥性寒涼，以清解里熱為主要作用的中指藥性寒涼，以清解里熱為主要作用的中藥。藥。清熱瀉火藥清熱瀉火藥清熱燥濕藥清熱燥濕藥清熱解暑藥清熱解暑藥清熱涼血藥清熱涼血藥清熱解毒藥清熱

5、解毒藥清虛熱藥清虛熱藥知母知母黃連黃連黃芩黃芩黃柏黃柏金銀花金銀花荷葉荷葉地黃地黃青蒿青蒿連翹連翹背景介紹背景介紹-3-3大蒜大蒜 為百合科蔥屬植物蒜為百合科蔥屬植物蒜Allium sativum L.的鱗莖的鱗莖。人工栽培。具有解毒消腫，殺蟲，止痢之功效。常。人工栽培。具有解毒消腫，殺蟲，止痢之功效。常用于癰腫瘡瘍，疥癬，肺癆，頓咳，泄瀉，痢疾。用于癰腫瘡瘍，疥癬，肺癆，頓咳，泄瀉，痢疾。蒜氨酸蒜氨酸大蒜酶大蒜酶大蒜素大蒜素及其及其 他他 含含 硫硫 化化 合合 物物揮發(fā)性揮發(fā)性實驗操作實驗操作一、部分清熱藥的抗菌實驗一、部分清熱藥的抗菌實驗觀并測量抑菌圈直徑（明天觀并測量抑菌圈直徑（明天1

6、2:1512:15）瓊脂平板瓊脂平板（塑料）（塑料）100L大腸桿菌懸液大腸桿菌懸液，“L L”棒涂勻棒涂勻均勻打均勻打 5 5 個孔，個孔，火焰稍加熱封底火焰稍加熱封底標(biāo)記標(biāo)記中藥藥液中藥藥液 加滿孔加滿孔滅菌水滅菌水 加滿孔加滿孔3737培養(yǎng)培養(yǎng)24h24h（206206房間）房間）黃連、黃芩、黃柏、連翹黃連、黃芩、黃柏、連翹、滅菌水、滅菌水二、揮發(fā)性成分的抗菌實驗二、揮發(fā)性成分的抗菌實驗2.2.皿蓋中央放倒置無菌青霉素蓋，石蠟固定，無菌鑷移皿蓋中央放倒置無菌青霉素蓋，石蠟固定，無菌鑷移 取少量大蒜泥填滿青霉素瓶蓋凹陷；取少量大蒜泥填滿青霉素瓶蓋凹陷；1.1.取一瓊脂平板（玻璃），取一瓊脂

7、平板（玻璃），100L大腸桿菌懸液，大腸桿菌懸液，“L L”棒涂棒涂勻；勻；3.3.將瓊脂培養(yǎng)皿倒置于盛有大蒜泥的培養(yǎng)皿蓋上，切勿將瓊脂培養(yǎng)皿倒置于盛有大蒜泥的培養(yǎng)皿蓋上，切勿接觸青霉素蓋。放入接觸青霉素蓋。放入3737培養(yǎng)培養(yǎng)24h24h，觀察并測量抑菌圈的，觀察并測量抑菌圈的直徑；（明天直徑；（明天12:1512:15）4.4.同上操作，取無菌生理鹽水加入青霉素蓋凹陷內(nèi)作為同上操作，取無菌生理鹽水加入青霉素蓋凹陷內(nèi)作為對照組。對照組。大蒜、滅菌水大蒜、滅菌水注意事項注意事項1 1、全班、全班4 4組，每組出組，每組出4 4位同學(xué)各做一塊板；位同學(xué)各做一塊板；2 2、所有試驗所用菌液、接觸菌液的槍頭、培養(yǎng)基均應(yīng)收集、所有試驗所用菌液、接觸菌液的槍頭、培養(yǎng)基均應(yīng)收集到到75%75%乙醇燒杯中，最后集中滅菌處理；乙醇燒杯中，最后集中滅菌處理；3 3、操作靠近酒精燈火焰范圍；接菌時平板蓋不要完全敞開，、操作靠近酒精燈火焰范圍；接菌時平板蓋不要完全敞開，避免空氣中雜菌污染；避免空氣中雜菌污染；4 4、涂布時，要等涂布棒稍冷再涂布，涂布要均勻；吸取細(xì)、涂布時，要等涂布棒稍冷再涂布，涂布要均勻；吸取細(xì)菌時，要將菌液搖勻。菌時，要將菌液搖勻。5 5、打孔加藥時不要使供藥液