中藥芪紅合劑對肺間質(zhì)纖維化模型大鼠肺組織中TGF β1表達的影響

1、DOC格式論文，方便您的復(fù)制修改刪減中藥芪紅合劑對肺間質(zhì)纖維化模型大鼠肺組織中TGF- 31表達的影響（作者：單位：郵編：）【摘要】 目的：探討中藥芪紅合劑在肺間質(zhì)纖維化過程中 的作用及其機理。方法：采用氣管內(nèi)注射博來霉素A5建立肺間質(zhì)纖維化的大鼠模型。將40只Wistar大鼠隨機分為4組：假手術(shù)組、模 型組、潑尼松治療組、芪紅合劑治療組，每組10只。給各組大鼠灌胃相應(yīng)的生理鹽水或藥物，術(shù)后15 d處死各組大鼠，取兩肺組織， 一部分行石蠟包埋切片，HE染色，觀察病理改變，另一部分采用 ELISA法定量測定TGF- 31。結(jié)果：與假手術(shù)組比較，模型組大鼠肺 組織有明顯的纖維化改變，TGF- 31

2、的含量顯著升高（P0.01 ）;與模 型組比較，潑尼松治療組和芪紅合劑治療組大鼠肺組織中TGF- 31含量顯著下降（P0.01 ）。結(jié)論：中藥芪紅合劑可能通過降低肺組織中 TGF- 31的含量而減輕肺間質(zhì)損傷及纖維化改變?！娟P(guān)鍵詞】 芪紅合劑TGF- 31間質(zhì)纖維化Abstract Objective : To study the effect of Qihong decoction on rats with pulmonary fibrosis and its mechanism. Methods : Model rats were in duced by injecti ng bleomy

3、ci n A5 into trachea. 40 Wistar rats were ran domized in to sham operati on con trol group (give n saline), model group (given saline ), prednisone treatment group , Qihong decoction treatment group (n=10) . The lung tissues were collected after 15 days treatment. The level of TGF- 31 was measured b

4、y ELISA , and the level of fibrosis was observed by HE stain. Results : Compared with sham operation control group , the change of pulmonary fibrosis and the level of TGF- 31 in model group rats were obviously in crease (P v 0.01 ) . Compared with model group , the levels of TGF- 31 in two treatment

5、 groups were obviously decreased (P v 0.01 ). Conclusion : Qihong decoction can alleviate lung tissue damage and pulmonary fibrosis through down-regulating TGF- 31 expression.Key words Qihong decoction; Transforming Growth Factor- 3; pul monary fibrosis特發(fā)性肺纖維化(idiopathic pulmonary fibrosis , IPF)是由彌

6、漫 性間質(zhì)性肺疾病引起、以彌漫性肺泡單位慢性炎癥和間質(zhì)纖維化為主 要病理特征的一大疾病1。該病發(fā)病率約為5/10萬人，近年來有 上升趨勢。統(tǒng)計資料顯示其 5年生存率低于50 %，目前臨床治療常 用的藥物是糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑和一些抗纖維化制劑，這些治療 尚不能使患者的生存率有所改善。中藥制劑芪紅合劑是我們在臨床上治療各種肺臟疾病的基礎(chǔ)方劑,常與他藥配用治療各種慢性肺臟疾病。經(jīng)臨床觀察，他能有效保護慢性肺病患者的肺功能，延緩肺病的發(fā)展。在長期臨床實踐的基礎(chǔ)上， 我們通過氣管內(nèi)注射博來霉素 A5建立肺間質(zhì)纖維化的大鼠模型，以 芪紅合劑進行干預(yù)治療，觀察致纖維化因子TGF- B1在肺組織的表達，旨

7、在探討芪紅合劑能否有效保護受損肺組織及其可能的作用機 制，以明確芪紅合劑的抗纖維化功效。1材料與方法1.1實驗材料1.1.1實驗動物 選用健康雄性 Wistar大鼠40只（由山西醫(yī)科大學(xué) 實驗動物中心提供，二級），體重（200 i20） g。1.1.2實驗儀器 酶標比色儀（美國寶特公司生產(chǎn)，ELX800型）； 石蠟切片機（德國Leica公司生產(chǎn)）；超聲波細胞粉碎機（寧波新芝 科器研究所生產(chǎn)）；恒溫孵育箱（Hirasawa公司生產(chǎn)）；光學(xué)顯微鏡（日本Olympus公司生產(chǎn)）；全自動照相系統(tǒng)（日本 Olympus公司 生產(chǎn)）。1.1.3藥品與試劑 中藥芪紅合劑由黃芪、紅花、大黃、地龍等組成， 上藥

8、按比例稱取后，煎制濃縮為含生藥 4.4 g/mL的合劑（山西醫(yī)科 大學(xué)第二醫(yī)院中藥制劑室制備）。潑尼松片：5 mg/片,批號：060423， 浙江仙琚制藥有限公司生產(chǎn)。博來霉素A5 : 8 mg/支，批號：060401， 天津太河制藥有限公司生產(chǎn)。大鼠TGF- B1酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA） 檢測試劑盒（通用型），購自上海軒昊科技發(fā)展有限公司；HE染色劑（由山西醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)實驗中心新鮮配制）；10%水合氯醛（山西醫(yī)科大學(xué)生理實驗室新鮮配制）。1.2實驗方法1.2.1動物分組40只Wistar大鼠常規(guī)適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d，將大鼠隨 機分為4組：假手術(shù)組、模型組、潑尼松治療組、芪紅合劑治療組， 每組

9、10只。122造模及給藥 根據(jù)文獻2 制備肺間質(zhì)纖維化大鼠模型，氣 管內(nèi)注射5 mg/kg博來霉素A5溶液建立肺纖維化動物模型。假手術(shù) 組動物在同樣麻醉條件下氣管內(nèi)注入 0.2 mL生理鹽水。術(shù)后第2天 開始每天給大鼠灌胃給藥，假手術(shù)組和模型組予2mL生理鹽水；潑尼松治療組予30 mg/kg潑尼松片；芪紅合劑治療組予 2 mL中藥芪 紅合劑（用藥劑量相當于成人每天每公斤體重的20倍）。1.2.3標本米集 術(shù)后15 d處死所有大鼠米集標本。以10%水合氯 醛0.3 mL/100 g體重腹腔注射麻醉大鼠，剖取兩肺，剪除氣管、主 支氣管，將右肺組織用冰鹽水沖洗3遍，濾紙吸干水分，-70 C凍存，待做

10、肺組織勻漿，用于蛋白指標檢測；左肺組織用10 %的中性甲醛溶液固定，石蠟包埋切片，以4 口石蠟切片，常規(guī)行HE染色， 待做病理形態(tài)學(xué)觀察。1.2.4指標觀察1.2.4.1肺組織病理觀察 將HE染色后的石蠟切片置于光鏡下觀察 肺組織病理變化。1.2.4.2肺組織TGF- （31檢測采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）進行 測定，取右側(cè)肺組織，常溫下解凍，吸去血跡，稱取300 mg相同部 位組織，分別裝入EP管，加入PBS液1 mL ,冰水中用超聲波細胞 粉碎機做組織勻漿，離心15 min，取上清液，按照試劑盒說明操作。125統(tǒng)計學(xué)處理所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)士標準差（x is）表示，采用 SPSS11.5統(tǒng)

11、計軟件分析，多組間采用單因素方差分析。2結(jié)果2.1肺組織病理觀察肉眼觀察結(jié)果見圖1圖4。假手術(shù)組肺組織結(jié)構(gòu)正常，雙肺呈粉 紅色，表面光滑；模型組可見肺組織體積縮小，表面有片狀凹凸不平 的蒼白灶，也有個別灰黑色病灶。潑尼松治療組、芪紅合劑治療組均 有不同程度的蒼白灶，但較模型組明顯減少。肺組織HE染色光鏡下觀察結(jié)果見圖5圖8。假手術(shù)組肺組織形 態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)無明顯改變；模型組肺組織可見明顯的肺間質(zhì)病變，肺泡隔增寬，間質(zhì)水腫，炎性細胞浸潤增多，成纖維細胞和肌成纖維細胞增 殖；潑尼松治療組和芪紅合劑治療組上述病理改變有所減輕，但較假手術(shù)組仍明顯。2.2肺組織中TGF- （31檢測結(jié)果結(jié)果見表1。由表可見，

12、與假手術(shù)組比較，其余3組大鼠肺組織中 TGF- 31含量顯著升高（P0.01 ）;與模型組比較，兩治療組 TGF- 31 含量顯著降低（P0.01 ）;而兩治療組間比較無顯著差異（P 0.05 ）。3討論肺間質(zhì)纖維化是多種相關(guān)和觸發(fā)性因素參與的慢性肺疾病的共同 結(jié)局，早期常常表現(xiàn)為肺泡炎，肺泡內(nèi)有大量炎癥細胞浸潤，隨后在炎癥細胞、血小板等分泌的致纖維化因子的作用下，細胞外基質(zhì)(ECM )成分合成降解失衡，間質(zhì)膠原增生、沉積，最終導(dǎo)致肺纖 維化。根據(jù)中醫(yī)理論，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)病機理，從中西醫(yī)結(jié)合的角度， 我們認為肺纖維化時，患者出現(xiàn)的進行性呼吸困難，肺順應(yīng)性降低， 肺容量減少，通氣/血流比例失調(diào)

13、和彌散功能障礙，這些表現(xiàn)與中醫(yī) 學(xué)中的氣虛血瘀、氣虛生痰、痰瘀互結(jié)，不榮肺絡(luò)，久而漸致肺絡(luò)枯 萎，痰瘀阻結(jié)肺絡(luò)成毒為害的病機理論相符。因此，臨床上我們配用 益氣活血化瘀、解毒通絡(luò)的黃芪、紅花、大黃等治療多種肺系疾病， 取得了滿意療效。芪紅合劑中黃芪扶正顧本，能夠抗炎抗病毒，是一 種肯定的免疫功能調(diào)節(jié)劑，還能夠抑制血小板聚集，對血小板聚集有 一定的解聚作用3 164。有研究報道，黃芪能抑制人胚肺成纖維 細胞表達細胞間黏附分子-1及白介素-6受體，進而減少ECM的合成 :4。紅花活血化瘀，可使全血凝固時間延長，研究表明紅花所含成 分紅花黃色素具有抑制血小板聚集和增加纖溶酶活性的作用，如果以膠原誘導(dǎo)

14、血小板聚集，則紅花黃色素有明顯的拮抗作用3 164。大黃解毒瀉熱，多方研究表明他能夠通過多種途徑對纖維化疾病起一 定的防治作用，如保護細胞，減輕組織損傷，抑制ECM產(chǎn)生細胞的增殖，并誘導(dǎo)其凋亡等56 。地龍清熱平喘通絡(luò)，并能“搜剔絡(luò)邪”; 蘆根味甘性寒，涼潤爽口，清熱生津，養(yǎng)陰潤肺。綜觀全方，黃芪以 補氣之虛、紅花以通絡(luò)之瘀、地龍以平肺之喘、大黃以瀉熱之毒、蘆 根以潤肺之陰，補通兼施，補中有瀉，共促肺之陰陽調(diào)和，竅絡(luò)貫通， 其翕辟（呼吸）之力自適均也。在本研究中，我們在肉眼直視下將博來霉素 A5緩慢注入大鼠氣管 內(nèi)制造模型，然后檢測了致纖維化因子TGF- B1的表達變化。大鼠肺 組織經(jīng)博來霉素

15、作用15 d后取材，可見明顯的肺間質(zhì)病變。HE染色 肺組織學(xué)改變顯示肺泡隔明顯增寬，間質(zhì)水腫，炎性細胞浸潤增多， 成纖維細胞和肌成纖維細胞增殖。 模型組肺組織中的TGF- B1表達明 顯增強，此結(jié)果與國內(nèi)外文獻報道一致。而經(jīng)過藥物干預(yù)后的兩治療 組TGF-仇表達均有所下降，與模型組相比有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.01 ）， 且中藥芪紅合劑的作用與潑尼松相比無顯著性差異（P0.05 ）。這一結(jié)果提示中藥芪紅合劑與潑尼松均能夠有效緩解肺纖維化的早期病變 進展，而且可能通過抑制TGF- B1在模型大鼠病變早期肺組織中表達 的上調(diào)來延緩病變的進展。中藥芪紅合劑能夠抑制TGF- B1在博來霉 素誘發(fā)肺間質(zhì)纖維化

16、模型大鼠肺組織中表達的上調(diào)，推測其抑制 TGF- B1表達上調(diào)的作用可能是其抗肺間質(zhì)纖維化的作用機制之一。 我們推測，在肺泡損傷、炎癥及纖維化過程中進行早期合理的干預(yù)可 以延緩肺間質(zhì)纖維化的進展。【參考文獻】:1高春芳，陸倫根.纖維化疾病的基礎(chǔ)和臨床M .上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2004: 439-447.2 Snider G L， Hayes J A， Korthy A L. Chronic interstitialpul mon aryfibrosisproduced in hamsters byen dotracheal bleomycin : pathologyand stereology J . Am Rev Respir Dis , 197