血型血清學(xué)若干問題

1、血型血清學(xué)若干問題南方醫(yī)科大學(xué).南方醫(yī)院蘭炯采一、l1、標(biāo)本采集l(1)采錯(cuò)被檢者（換床、同名檢測(cè)未錯(cuò),輸血錯(cuò))l(2)護(hù)士送檢途中“掉包”l(3)大量輸液處采樣l(4)抗凝管未混勻,只采干管凝塊血紅細(xì)胞有凝集l2、被檢者特殊情況l(1)新生兒(Ag不成熟,ABO抗體來自母親/IgG);老年(Ag）；輸異型血/成份血/血漿置換；l疾病：白血病，淋巴?。篈g感染多/全凝集；類B真紅，多發(fā)性骨髓瘤：串錢狀A(yù)IHA（自身免疫性溶血性貧血）干擾正/反定型l冷凝集 血漿蛋白紊亂,低丙球血癥；l造血干細(xì)胞移植后l罕見先天性無ABO抗體lABO亞型lABO外抗體二、二、定定l失效;l使用不當(dāng)（AHG最適稀釋

2、度）;l效價(jià)（抗A128，抗B64），親合力（3min1mm2），特異性（A2B不漏檢，抗體篩選，冷凝集素）;l染色（抗A，B紅，抗-A蘭，抗-B藍(lán)），未染色者標(biāo)簽脫落；l試劑紅細(xì)胞3-5%；溶血洗 3-5個(gè)混合；l陰/陽對(duì)照（酶，聚凝胺）。三、三、l1、血清1-2滴（50-100u），滴管450傾斜；l2、先加血清，后加細(xì)胞！l3、室溫/血清（血漿）l4、離心條件/玻片清潔l抗-A（256）0.01ml+NS0.49ml取0.1mll+(3-5%)RBC0.1ml1000rpml秒 10 15 20 30l 1+ 1+ 2+ 2+l取離心時(shí)間為15秒l5、結(jié)果觀察（凝塊大小，游離細(xì)胞mf，真

3、、假凝集，鏡下膜完整）l 正定 反定 吸收 分l 抗A 抗A1 抗B 抗AB 抗H A1 A2 B O 放散 泌A1 + + - + - - - + - A A,HAint + W+ - + W+ - - + - A A,HA2 + - - + + -/+1% - + - A A,HA3 Mf - - Mf + -/+20% - + - A A,H Abountu Mf - - Mf + + - + - A H Abend -/+ - - W+ + - - + - A H Ael - - - - + - - + - A HAx -/w+ - - + + + -/+ + - A A,HAm -/

4、w+ - - -/W+ + - - + - A A,H B - - + + - + + - - B B,HB5 - - MF Mf + + + - - B B,HBx - - VW+ W+ + + + - - B HBm - - - VW+ + + + - - B B,HO - - - - + + + + - H HOh - - - - - + + + + ? -A AB BO O定定型型l1、正反定型不以誰為準(zhǔn)？-找出原因l標(biāo)本錯(cuò)誤（細(xì)胞/血清不一個(gè)人）l輸液處采樣l輸異型血l新生兒/老年l疾病l移植lABO外抗體l亞型（A2產(chǎn)生抗-A1）l試劑l2、抗-AB（W+而抗-A，亞型？）l3、m

5、f：亞型？輸異型血？l4、OC（+）： 買？ABO外抗體l5、抗-A/抗-B：W+吸收放散證實(shí)l6、唾液/分泌型l唾液隔水煮沸15離心上清（倍比稀釋）加量抗血清修正液（1：8？）室溫靜置1hr加對(duì)應(yīng)紅細(xì)胞離心結(jié)果（后留稀釋管陽性）l修正液：倍比稀釋，4+最后一管稀釋度l7、抗-H參考價(jià)值l必須同時(shí)作AB，A，B，O對(duì)照比較l8、B2？l中國(guó)報(bào)道B2，對(duì)應(yīng)A2，產(chǎn)生抗-B1，抗BW+，H弱于O強(qiáng)于B，l1961，Jacobowic：一個(gè)家系母及2 均B，但B抗原弱，類似A1與A2，稱BKl1976，Bryant:提出B2 ，未被公認(rèn)：Mollison(Blood +ransfusion in c

6、linical medicine),Mohn(Human blood groups),Zmijawsk;C Blood banking sciences),Lawrence Cclinical practices of transfusion medicine),肖星甫（輸血技術(shù)手冊(cè)），李昌林（免疫血液學(xué)）均未承認(rèn)有B2。l9、A2抗A1嚴(yán)重溶血性輸血反應(yīng)l10、亞型與輸血l理論：29個(gè)血型系統(tǒng)，400多種血型抗原；l（一個(gè)人）有什么Ag，不產(chǎn)生什么Ab，缺什么Ag，（接受該Ag）可能產(chǎn)生什么Ab。l原則：供者Ag只能比受者少，不能比受者多。l亞型病人：接受O型血l亞型獻(xiàn)血員：當(dāng)A/B型血用l

7、l1、白血病血型變異l血型終生不變；基因未變，抗原減弱；“階段性”，可恢復(fù)；只變“少”，不變“多”（A/BO，ABA/B；不會(huì)反過來?。﹍2、血漿蛋白紊亂 凝集l肝臟病，傳染?。═B，黑熱?。?，多發(fā)性骨髓病球蛋白l心肌梗塞，感染，外傷，腫瘤纖維蛋白l辦法：加鹽水散開 洗滌紅細(xì)胞至散開定型l例：顧，正定型時(shí)而B，時(shí)而AB，反定型抗-Al分析：正定型抗-AB，抗-A，抗-B均小凝塊，加鹽水減弱，鏡下串錢狀，紅細(xì)胞洗滌后正定型為B，血球蛋白紊亂引起B(yǎng)型。l例：薛，TB，正定似AB，但抗-A50%凝集，鏡下串錢狀，加鹽水串錢狀不完全消失。l分析：洗滌3次紅細(xì)胞抗-A（-），抗-B（+），B型。l3、類

8、Bl G-桿菌感染，A“AB” O“B”l 感染控制，“B”消失l 血清中 抗-Bl 唾液無B物質(zhì)l 可吸收抗-B，吸收后抗-B效價(jià)不降低，放散出抗B（比正常B細(xì)胞）多（類B與抗B結(jié)合疏 ）l 加AB血清不凝集（與全/多凝集正別）l例：韓，52y，膽道手術(shù)，正定型B，但血清合抗-B，與A型血 血主/次側(cè)均凝集，與O配血次側(cè)凝集。l分析：抗-AB（+），抗-B（+， 離細(xì)胞多），抗-A（-）。血清中抗-B效價(jià)8，抗-A效價(jià)512，唾液中 H，紅細(xì)胞上H似O型。，吸收抗-B效價(jià)只降1高度，放散點(diǎn)抗B64。l O型，產(chǎn)生類Bl4、多/全凝集l 細(xì)菌污染RBC T活化，出生6個(gè)月后產(chǎn)生抗-Tl 多凝集

9、：與部份（？/10）AB型血清凝集l 全凝集：與“全部”（10份）AB型血清凝集l 真凝集，洗滌細(xì)胞不能去除l （血清中抗T已被自己RBC吸收）無自身凝集l 感染史/血污染l 控制感染后消失l mfl 凝集4強(qiáng)，37弱l 全/多凝集l 正定型吸收/放散，“全/多凝集RBC”吸收抗-A/抗-BRBC吸/放：ABO抗體+抗-T試劑（ABO RBC CT未溶化）避開抗T干擾，測(cè)定ABO抗體吸收情況判定全/多凝集RBC ABO血型，對(duì)照：反定型，唾液血型物質(zhì)制定ABO血型。l例：蘇，女，8M，肺炎，正定型AB，但配血血清凝集AB紅細(xì)胞。l分析：正定型抗-AB，抗-A，抗-B均凝集，游離C50%；10份

10、AB型血清（+），室溫強(qiáng)，37消失；RBC不吸收抗-A，抗-B；反定型AC（+），BC（+），自身（-）。lO型，全凝集，輸O RBC，或O RBC+代血漿（無抗體）l5、冷凝集素l AIHA，肺炎冷凝集素，甚至30凝集自身/他人RBC。l 遞增溫度（37-45）鹽水洗RBCll例：趙，貧血，正定型“AB”，洗滌RBC后定“O”；與O型配血全側(cè)輕凝集。l分析：37鹽水洗2次，正定型O型；血清中冷凝集壽效價(jià)64，宜37配血，并作自身對(duì)照。l6、AIHA，LElRBC粘自身抗體干擾正定型（蛋白介質(zhì)ABO抗血清中非特異凝集）；血清中自身抗體干擾反定型。l 遞增溫度鹽水（223745），反復(fù)洗滌RBC

11、正定型l 氯喹放散法正定型：（蘭炯采，中華血液學(xué)雜志 1988；9（10）：624：二磷酸氯喹以NS配20%，加20%AB血清，PH6.0；壓積RBC0.2ml+20%氯喹液0.8ml37震蕩5分鐘洗3次定型），自身吸收（氯喹放散）反定型，O.C吸收反定型（同種抗體漏檢？） l例：蘭炯采，中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志1990；13（5）311：6/21AIHA ABO正反定型不合l直抗 間抗 放散前 放散后l 正 反 正 反l+ 4 AB B B Bl+ 4 AB B B Bl+ 16 AB B B Bl+ 4 AB ？ B B l+ 16 AB O O Ol+ - AB O O Ol例：韓，1y，Hb2

12、g%，正定型：RBC鹽水洗滌A；反定型：OC（+），AC（+），BC（+），37(試管)法：OC(-)，AC(-)，BC（+）l朱，34y，LE,正定型：A，反定型：6，20凝集AC，37減弱，37（試管）法：AC（-）l張，伊文氏綜合癥l正定型：抗-A（+），抗-B（+），自身（+），鹽 l水洗滌不消失。l反定型：OC（+），AC（+），BC（+），45鹽水洗3次，定O型；與O型血主側(cè)凝集，選擇凝集不強(qiáng)于自身對(duì)照者輸血，無反應(yīng)。l常規(guī)用抗-AB！l例：張，膽囊炎，初定O，配血次側(cè)（與O型獻(xiàn)血員血清）凝集，主側(cè)（與O型RBC）不凝集。l 復(fù)查：抗-A，B（+），抗-A（-），抗-B（-）（初定

13、血型未用抗-AB而誤定O），RBC吸收放散抗-A，唾液有H，無A物質(zhì)，血清有抗-B，不凝集A2l AXl例：王，抗-A（-），抗-B（-）初定O，作O型獻(xiàn)血，配血凝集。l7份O型人血清+EC，3份15份凝，4份30分凝；王清+AC（+），BC（-）。唾液有H，無A，B物質(zhì)，王C吸收抗-B，排除（血袋）污染。l BX（？）新新生生/ /嬰嬰兒兒l胡利亞、蘭炯采，中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，1992；15（4）：231l27例6月嬰兒：正、反定型不一致22例，低離子法正反定型一致，且輸血無反應(yīng)。l方法：測(cè)定管中加2滴低離子溶液（NaCl75g,甘氨酸18g 加PBS20ml加 H2O至1000ML侗 PH6

14、.7A AB BO O外外抗抗體體影影l(fā)IgM抗體常見于：ABO，P，NM，Lewisl例：張，女，宮外孕，初定AB型，與AB型血配血，主側(cè)凝集。l分析：正定型抗-AB（+），抗-A（+），抗-B（+），抗-A1（-）A2Bl反定型：OC（-），AIC（），A2C（-），BC（-）合抗- A1l A2B，合抗- A1，輸B或O RBC+AB血漿l例：楊，B型，楊血清凝集2/4例BC，混合OC（+/-？）l分析：楊N，P2型，血清介（IgM）抗P，凡P（+）BC、P（+）OC均凝集。l注意：混合OC作抗體篩選細(xì)胞缺陷，如3個(gè)OC均P2型，便漏檢。l操操作作技技術(shù)術(shù)影影響響l1、責(zé)任心：標(biāo)本弄錯(cuò)；

15、試劑弄錯(cuò)/過期/污染；采血不規(guī)范；操作未正規(guī)培訓(xùn)（先加血清后加細(xì)胞）。l2、RBC懸液過濃/過稀。l3、反應(yīng)溫度過低/過高。l4、離心條件l強(qiáng)調(diào)：責(zé)任心；正定型：抗-AB；反定型：OC；正、反定型2人分開做；正、反定型不合找原因。R RH H l1、國(guó)產(chǎn)試劑無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)；l2、常規(guī)RHD定型的爭(zhēng)論；l3、初篩RHD（-）l復(fù)檢：l弱D：AHG法；l部分D：McAb/不同批號(hào)（真/假？）抗-D；l報(bào)弱D：氯仿/三氯乙烯吸收放散，RBC+抗-D3730分洗+等體積鹽水+等體積氯仿/三氯乙烯混合物搖 1 0 秒 測(cè) 量 1 分 敞 口 3 7 水 浴 5 分 ， 混 勻1000rpm5分取上層液+O.

16、D（+）RBCAHGl凡直抗（+）RBC，作Rh（聚凝胺，酶，AHG）均產(chǎn)生假陽性。l解釋：RhD（-）RBCI gG（自身抗體）不凝集+抗-D（并未粘上RBC）“搭橋”劑凝集（搭的“自身抗體橋”）誤制Rh血型！l原則： 血型有29個(gè)血型系統(tǒng)，400多種Ag，一個(gè)人有全部血型系統(tǒng)，但無全部血型Ag； 有什么Ag，不會(huì)產(chǎn)生什么Ab，缺什么Ag，可能產(chǎn)生什么Ab受者Ag只能比供者少！l弱D，部分D，報(bào)弱D：l供者作Rh（+）血用 受者當(dāng)作Rh（-）受血自自身身抗抗體體血血l胡利亞、蘭炯采，河南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)1990；25（2）209l7例AIHA，RBC乙醚放散：l放散液l1:2 1:4 1:8 1

17、:16 1:32 1:64 1:28 分析lCCDee 1+ - - - - - 抗lccDEE 3+ 3+ 3+ 2+ 2+ 1+ - -Elccdee 1+ - - - - -lCCDee 3+ 2+ 1+ 1+ - - - 抗lccDEE 3+ 1+ - - - - - -Clccdee 1+ - - - - -自自身身抗抗體體掩掩蓋蓋同同h hl自身抗體凝集它人OC干擾抗體篩選同種抗體（常為Rh）漏檢，隨機(jī)OC（如D+）吸收自身抗體（+抗-D），同種抗體（抗-D）可能也被吸收而漏檢。l自身RBC放散（自身Ab）吸收（血清中自身Ab）放散吸收至吸完自身Ab（直抗-），抗體篩選/鑒定自身R

18、BC不會(huì)吸收同種Ab；（有什么Ag，不會(huì)產(chǎn)生什么Ab；無什么Ag，才可能產(chǎn)生什么Ab）。l胡利亞，蘭炯采，河南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)1992；27（2）：178l21例AIHA：自身RBC/氯奎放散法吸收自身Ab抗-E2例，抗-cE1例。l自身抗體直抗（+）干擾：l血型（Rh）；抗篩；交叉合血。l解決方法：l1、熱鹽水反復(fù)洗直抗（-）；l2、放散（氯奎法，45熱鹽水，甘氨酸法）直抗（-）；l3、選擇凝集不強(qiáng)于自身對(duì)照的血液；l4、自身抗體血型特異性選擇合血。影影響響血血型型鑒鑒定定l抗血清：IgM-鹽水法 l IgG-“搭橋”（酶，AHG，聚凝胺，低離子，白蛋白）l“搭橋法”，沒有一種100%可靠。l

19、酶：易出假，+/-，可發(fā)現(xiàn)“酶型Rh抗體”，方便l 聚凝胺：假+/-l AHG：可靠，但操作麻煩，試劑標(biāo)準(zhǔn)化（最近稀釋度/前帶、后節(jié)現(xiàn)象；單價(jià)/多價(jià)？）l 配血卡：（原理為AHG）假+/-l 重重要要技技術(shù)術(shù)l原理：1、Ag-Ab結(jié)合系可逆反應(yīng)（條件？/）l2、弱抗原吸收能力不弱，放散強(qiáng)；l方法：熱放散，氯仿/三氯乙烯，氯喹，乙醚，二甲苯，澤比鹽皂甙，超聲波，酒精l用途：1、證實(shí)弱抗原；l 2、證實(shí)全/多凝集血型；l3、分離抗體；l4、特殊配血（AIHA RBC放散液配血避開自身Ab血型特異性。l注意：選擇最適合的放散方法疑疑難難血血型型鑒鑒定定l1、吸收放散； l2、血型物質(zhì)測(cè)定； l3、家

20、系分析；l4、DNA（參考）l對(duì)照實(shí)驗(yàn)l凡“搭橋法”應(yīng)設(shè)陰/陽/自身對(duì)照?？茖W(xué)設(shè)計(jì)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，逐一檢查反應(yīng)體系中每個(gè)因素?？箍贵w體l1、ABO外抗體多為IgG（“搭橋法”檢測(cè)）；l2、每個(gè)人都有IgM ABO抗體（鹽水凝集）；l3、用抗原A/B RBC）查抗體5%RB懸液（鹽水介質(zhì)）+血清（IgM ABO Ab+IgG ABO以外Ab）IgM ABO Ab凝集RBC 無法（用“搭橋法”）檢測(cè)有無IgG ABO外Ab。l 用OC（IgM ABO Ab不凝集）查ABO外Ab； OC要含有“全部”血型Ag（1個(gè)人不具備全部Ag，用幾個(gè)人混合）。l查出OC各種Ag分布，選擇2-3個(gè)OC，各種血型Ag“互

21、補(bǔ)”，組合具有“全部”Ag。l D C E c e P M N l1 + - + - + + + -l2 - + - + + + - +l組成“篩選細(xì)胞”l購(gòu)買注意：是否含“全部”血型Ag，是否每種Ag均“互補(bǔ)”。l l簡(jiǎn)易方法： 隨機(jī)3-5個(gè)OC混合，“假設(shè)”組合具有“全部”血型Ag。l 太少可能某Ag均陰性； 太多某抗原呈陽性，但被“稀釋”（如：10個(gè)細(xì)胞，9個(gè)Fyb(-),1個(gè)Fyb(+)，抗- Fyb會(huì)漏檢。 3-5個(gè)OC，各洗3次，混合，3-5%被檢血清（抗-A+抗-D）+篩選C（O，D+）（鹽水）不凝集（因無H抗原）聚凝胺/酶/AHG凝集（抗-D凝集D+紅細(xì)胞） 如 果 鹽 水 凝

22、 集 ： 含 I g M A B O 以 外 抗 體（P.MN.Lewis） 如果：被檢血清（抗-A+抗-D）+A，D+RBC凝集：只能認(rèn)定血清合體，不能判定有無抗-D。l抗體篩選陽性抗體鑒定“譜細(xì)胞”選用10份已知各種血型Ag O型RBCl要求：每種Ag有+/-，合理搭配，被檢血清分別與10份細(xì)胞反應(yīng)（10管）l D C E c e JKa JKb 鹽水 AHGl1 + + + + + - - - +l2 - + - + + - + - -l3 + + - - + + + - +l4 + - + + - + + - +l5 - - - + - + + - -l6 - - + + + + +

23、- -l7 - + - + + - - - -l8 + + + + + + - - + l9 + + + - + + + - +l10+ + - - + + + - + l 陰性排陽性！不能陽性排陰性！購(gòu)購(gòu)買買譜譜細(xì)細(xì)l1、是否包含“全部/常見”血型Ag；l2、每種Ag搭配是否合理，+/-比例，3-7/7-3l如某Ag+9，-1;或 +1，-9均屬不合理。l3、無2個(gè)Ag格局一樣l被檢血清反應(yīng) 譜細(xì)胞某Ag 合計(jì)l+ -l+ A B A+Bl- C D C+Dl合計(jì) A+C B+D N=A+B+C+D l (A+B)!(C+D)!(A+C)!(B+D)l P= l A!B!C!D!N!lP95

24、%;P1/20,可靠性1/20,可信度1/2l 顆粒粗，鏡下制定l W+ 2l VW+l - 0 無凝集l mf 少數(shù)大塊，大量游離細(xì)胞lAHGlRBC+IgMAb凝集lRBC+IgGAb不凝集+AHG（搭橋）凝集l多價(jià)與單價(jià)AHG的應(yīng)用l酶lRBC被“消化” IgGAb凝集（破壞M，N，S，F(xiàn)ya,Fyb）l+/-;現(xiàn)用現(xiàn)配/冰凍保存l一期法：RBC+抗血清+酶3715分l二期法：RBC+酶3715分洗滌加抗血清3715分l 聚凝胺l 假凝集+拘椽酸三納散開lRBC+聚凝胺 l 真凝集+拘椽酸三納不散開l 配血卡l 低離子，牛白蛋白lAHGl直抗：RBC“充分”洗滌+AHG 前滯現(xiàn)象l抗查“

25、Ig”（無“特異性”）l抗IgG 抗C3d 交價(jià) lIgG IgM l藥物Ab 藥物Ab l間抗：RBC“充分”洗滌+血清3730-60分“充分”洗滌控干水分+AHGlRBC（體內(nèi)）已粘Ig（無論是否血型Ab）間抗均“+”；被檢RBC定血型，血清定Abl血型物質(zhì)：ABH抗原存在于體液中游離的ABH抗原l意義/用途：分析ABO血型，中和（ABO）天然抗體（混合血漿中）中和ABO抗體。l抗體： 天然 免疫性產(chǎn)生原因 ？ 妊娠，輸血Ig IgM IgG通過胎盤 不能 能血型物質(zhì) 中和 （一定效價(jià)）不中和2-ME 裂解19SIgM為7S 無影響最適反應(yīng)溫度 0-25 37lRBC洗滌2-5%懸液l磁磚法l試管法：矯正離心條件。l抗-A（效價(jià)256）0.1ml+NS0.49ml1000轉(zhuǎn)/分離心l秒 10 15 20 30l凝塊 1+ 1+ 2+ 2+l以15秒（1000轉(zhuǎn)計(jì)時(shí)），轉(zhuǎn)速矯正l效價(jià)-倍比稀釋，相差2個(gè)高度有意義，相差1個(gè)高度不排除操作誤差l（1024 2048）l術(shù)語：A型血清抗B血清，抗-A，抗A血清/抗體lRBC+（抗）血清Ab吸附到RBC上；血清中對(duì)應(yīng)Ab效價(jià)；RBC上Ab采用物理/化學(xué)方法離釋（放散）下來。l用途：l1、用已知Ab RBC檢定放散液（離