紫格醇脂質(zhì)體細菌內(nèi)毒素的檢測

1、紫格醇脂質(zhì)體細菌內(nèi)毒素的檢測中國醫(yī)藥工業(yè)雜志chinesejour幾alofpharmaceutlcal2001.32(6文章編r-:1001-8885(2001)06086603紫杉醇脂質(zhì)體細菌內(nèi)毒素的檢測張震宇,章小萍,馬玉萍,唐黎明(海市藥品檢驗所.上海008230)摘要:對注射用紫杉醇脂質(zhì)體中的細苗內(nèi)毒素檢查方法進行了研究=以60乙醇溶液作為溶劑破壞脂質(zhì)體后進行試驗.結(jié)果表明,6o的乙醇溶液列細菌內(nèi)毒索的話性無明顯影響4的乙醇溶液和0.17rag/m的供試品藩液對鱟試劑和細菌內(nèi)毒素的凝集反應無明顯干擾.美建詞:紫杉醇;注射用脂質(zhì)體;細菌內(nèi)毒素檢查中圈分類號tq46o.72文獻標識碼:a

2、目前抗癌藥物常采用脂質(zhì)體為載體,提高其療效和耐受性,降低毒副作用”.紫杉醇(1)是一種由紫杉類植物的樹干,樹皮或針葉中提取或半合成的二萜類化臺物,主要用于卵巢癌和乳腺癌,對肺癌,大腸癌等也有一定的治療作用0.23.l脂質(zhì)體能均勻地分散于氯化鈉注射液或5葡萄糖注射液中而不析出結(jié)晶,提高了療效.為了保證臨床使用的安全,中國藥典2000年版規(guī)定必須對靜脈注射藥物進行熱原檢查,但在熱原試驗時,抗癌藥物本身的毒性常會引起家兔體溫的異常變化,影響實驗結(jié)果的準確性.因此目前多采用細菌內(nèi)毒素檢查法.本文對注射用1脂質(zhì)體細菌內(nèi)毒素檢查的方法進行研究.1儀器和試藥細菌內(nèi)毒素工作標準品(批號:80007,lo0eu

3、,ml中國藥品生物制品檢定所)1鱟試劑(批號:9807i5,0.5eu/ml;批號:090410a-=003eu/ml,湛扛安度斯生物有限刮1細菌內(nèi)毒紊楗查用水(批號:080811.湛江安度斯生物有限公司);l對照品(批號;108182r古量97.9.bristolmyerssquibb公司)i炔諾酮(批號920301,卜海第十二制藥廠)il脂質(zhì)體樣品(規(guī)格:15rag瓶上海醫(yī)藥工業(yè)研究院);甲酵,乙酵均為光譜純agilent111()型高教踱相色譜儀(美國agilenttechnologies公司)1xw一80a型旋渦混合器(上海醫(yī)科大學儀器廠)l8o1型臺式離心機(上海手術(shù)器槭廠j;nik

4、on顯微鏡(日豐nikoa公司】2方法和結(jié)果2一樣品處理供試品溶液的配制:取樣品l瓶,加6o乙醇6ml,混旋5min,離0(3000r/rain)15min,取上清液作為供試品溶液.取供試品溶液于顯微鏡(1540)下觀察,并與用注射用水代替60乙醇配得的溶液比較,結(jié)果見圖1-_1原料1樣品以注射用承配制1樣品以60乙醇溶液配制圄l樣品藩j喪顯被鏡觀察結(jié)果取供試品溶液,參照文獻【進行含量測定,結(jié)果表1含量測定結(jié)果見表1.收稿日期:20010219作者筒卉:張震宇(1g68),男,主管藥師從事藥品橙駐,藥物丹析丑質(zhì)量標準研究t.02164703139*3email:shypiysc中國醫(yī)藥工業(yè)雜志

5、chlnese由圖1,表1可知,60乙醇溶液已基本破壞了1脂質(zhì)體的卵磷脂層.2.2內(nèi)毒素檢查方法確證試驗2.2.1乙醇對細菌內(nèi)毒素與鱟試劑凝集反應的干擾試驗預試驗:取細菌內(nèi)毒素工作標準品1支,以6o的乙醇溶液溶解后,分別用檢查用水及相應濃度的乙醇溶液稀釋成行檢查.結(jié)果顯示6批供試品細菌內(nèi)毒素含量均小于0.18eu/mg.3討論3.1細菌內(nèi)毒素檢查系利用鱟試劑與細菌內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應的機理,以判斷供試品中細菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法(中國藥典2000年版,附錄86;美國藥典24版,1829)通常須將供試品溶于細菌內(nèi)毒素檢查用水后進行測定.由于脂質(zhì)體系將藥物包裹在卵磷脂內(nèi).要測定藥物所含

6、的內(nèi)毒素就必須采用特殊的溶劑先破壞其卵磷脂層.將藥物釋放出來.因此我們參考文獻.選擇了6o乙醇溶液作為溶劑本試驗提取方法提取后的溶液以顯微鏡觀察顯示(圖1)脂質(zhì)體已被破壞,1呈結(jié)晶狀態(tài);含量測定結(jié)果均在規(guī)定的范圍之內(nèi).表明6o乙醇已基本破壞其卵磷脂層.3.2為觀察6o的乙醇溶液是否對細菌內(nèi)毒素的活性及內(nèi)毒素與鱟試劑的凝集反應有影響,本試驗(下轉(zhuǎn)第288頁)中圍藥丁雜志chinese3ourna】ofpharmaceuticals200】.32(6arylpropionicacidshuaix1.ca()shengchun.dongx/anming!一wenlingfet1(llegechemi

7、strynnd(vcemicale!neeng,h0!i,changsha410082yechangeducationcollege,yichang443300)abstract:opticalresolutionof2-arypropionicacidsbyenzymecatalyzedhydrolysisandester1icatjonarereviewed.keywords:2arylpropionicacid;enzymecatalyzedhydrolysis;esterification;resolution,(上接第265頁)采用了將6o的乙醇溶液直接溶解細菌內(nèi)毒素工作標準品,并將

8、乙醇濃度稀釋至5以下的方法結(jié)果表明,60的乙醇溶液對細菌內(nèi)毒素的活性無明顯影響.可作為供試品細菌內(nèi)毒素檢查時破壞其卵磷脂層的溶劑;同時4的乙醇溶液對內(nèi)毒素與鱟試劑的凝集反應也無明顯干擾作用3.3供試品溶液用檢查用水稀釋成0.17mg/ml的稀釋液(其中乙醇濃度約4).以此稀釋液配制的內(nèi)毒素溶液測得的鱟試劑靈敏度與檢查用水配制的內(nèi)毒素溶液測得的結(jié)果一致,表明該濃度下的供試品對內(nèi)毒素與鱟試劑的凝集反應無明顯干擾作用.3.46批供試品的細菌內(nèi)毒素含量均小于0.18eu/mg.根據(jù)文獻i,l臨床劑量為l3j175mg/m,加至500l000ml的氯化鈉注射液或5葡萄糖注射液中,靜脈滴注3h參照文獻將0

9、.4eumg作為供試品內(nèi)毒素的限值,人體表面積按1.5m,體重按60kg計算,并加上大輸液中可能含有的內(nèi)毒素量(按中國藥典2000年版規(guī)定的0.5eum1),則每小時輸入體內(nèi)的內(nèi)毒素最大量約為3.4eu/kg.小于中國藥典2000年版規(guī)定的閾值5eukg?h,因此我們認為該限值可作為供試品內(nèi)毒素的限值,以保證臨床使用的安全.參考文獻:1sharmaa,straubingerr.noveltaxoformulations:preparationandcharacteriaatonoftaxocontainingliposomesl_j.pharmares,1994,11(6):889899.:2

10、陳新謙.金有豫.新編藥物學m.北京:人民1;_生出版社.1997.522523.-3ws405(x350)95,紫杉醇注射液質(zhì)量標準:s.:4u.sfdaguidelineonvalidationofthelalasanendproductendotoxintesforhumanandanimalparenteradrugs,biologicalproductsandmedicaldevicess-.determinationofbacteria1endotoxinsinpaclitaxe1liposomeszhangzhenyu,zhangxiaoping,mayuping,tanglimmg(sangkaiinstitutejotdrugc.nem!.shahhai200233)abstract!abacterialendotoxintestwasdevelopedfordeterminationofpaclitaxe1iposomesforinjection,using60ethanolforpretreatment.theresultsshowedthattheactivityofthebacterialendotoxinwasnotaffectedby60ethano1.an