Nexgen Four(N 4)全自動(dòng)酶免分析儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、全自動(dòng)酶免分析儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程目錄一nexgen four(n 4)全自動(dòng)酶免分析31.1目的31.2范圍：酶標(biāo)板技術(shù)體外診斷31.3 原理31.4操作程序41.5維護(hù)與校準(zhǔn)71.6新試驗(yàn)的程序設(shè)定9二項(xiàng)目sop102.1 丙型肝炎病毒抗體102.2 梅毒螺旋體抗體12一nexgen four(n 4)全自動(dòng)酶免分析1.1目的實(shí)現(xiàn)酶標(biāo)板實(shí)驗(yàn)的全自動(dòng)化操作。包括以下基本操作步驟：血清樣本和質(zhì)控品的稀釋、試劑分配、溫控孵育、清洗酶標(biāo)板、讀數(shù)、數(shù)據(jù)結(jié)果分析、分析結(jié)果打印。1.2范圍：酶標(biāo)板技術(shù)體外診斷1.3 原理其基本操作步驟均通過軟件控制由儀器自動(dòng)完成。每個(gè)任務(wù)都要同時(shí)使用電動(dòng)機(jī)械裝置（如：機(jī)械加樣

2、臂、泵、電子管等）和電子部分（如：微控制和微處理器等），包括軟件管理。nexgen fourtm 工作原理的基礎(chǔ)是3種不同級別的可編輯的工作任務(wù)如下：protocol 就是直接提供給儀器某一個(gè)elisa試劑盒的整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程； protocol 提供給儀器所有物理參數(shù)（如：試劑數(shù)量、孵育時(shí)間、孵育溫度等），可以使儀器正確的完成某一個(gè)elisa試劑盒的實(shí)驗(yàn)過程。panel 就是提供給儀器一些不同分析項(xiàng)目的protocol組合，從而可以在一次運(yùn)行中完成這些分析項(xiàng)目。panel 定義了與儀器相關(guān)的所有物理參數(shù)（如：試劑位置、酶標(biāo)板位置、樣本位置等），使同時(shí)運(yùn)行的這些不同分析項(xiàng)目的程序預(yù)先組合在一個(gè)文件

3、內(nèi)。session 提供儀器正確運(yùn)行的所有說明（如：病人姓名、在工作區(qū)的位置、報(bào)告形式等） 及每個(gè)標(biāo)本所需做的測試項(xiàng)目。在輸入session 的過程中，用戶可以根據(jù)軟件提示一步一步操作并確認(rèn)項(xiàng)目。1.4操作程序1.4.1開機(jī)自檢1.4.1.1 打開nexgen 4儀器的電源開關(guān)。（內(nèi)部電腦的window2000系統(tǒng)會(huì)啟動(dòng)，約需5min）。1.4.1.2 準(zhǔn)備標(biāo)本，試劑，陰陽性對照，質(zhì)控品，加樣頭，洗液，蒸餾水等。1.4.1.3 開啟電腦，點(diǎn)擊support圖標(biāo)，windows xp 自動(dòng)啟動(dòng)。1.4.1.4 儀器操作軟件自動(dòng)加載（easy user interface），單擊“簡易用戶界面”軟

4、件左側(cè)的“監(jiān)控”，儀器會(huì)自動(dòng)初始化并進(jìn)入“nexgen維護(hù)工具”界面的“啟動(dòng) / 結(jié)束工作”程序。每天第一次開機(jī)時(shí)，儀器自動(dòng)啟動(dòng)自檢程序，自檢完成后，若液路填充欄后的為選定，則儀器會(huì)自動(dòng)進(jìn)行左右兩側(cè)的液路填充。1.4.1.5儀器初始化及自檢完成后，單擊“啟動(dòng)”欄最下方的“洗板器灌注”，選擇本次實(shí)驗(yàn)需用的洗液瓶進(jìn)行灌注?！跋窗迤鞴嘧ⅰ币x擇兩側(cè)，至少灌注三次并保證洗液能充分沖灌到洗板器。完成“洗板器灌注”后，單擊上面菜單的“手工操控”欄，在這里可以分別單獨(dú)執(zhí)行微孔板架移動(dòng)、樣本盤轉(zhuǎn)動(dòng)、洗液灌注、加樣頭歸零、液路填充等操作。1.4.1.6自檢及其準(zhǔn)備工作完成以后，單擊屏幕右下側(cè)的“關(guān)閉”，退出監(jiān)控

5、程序。1.4.2運(yùn)行實(shí)驗(yàn)單擊“elisa工作表編輯”，從“選取模板或工作表”菜單的“模板”下點(diǎn)擊所要運(yùn)行的模板名稱，例如hbv4，點(diǎn)擊“下一步”到“信息”“下一步”到“添加樣本”，根據(jù)要測試的樣本數(shù)進(jìn)行添加，輸入樣本數(shù)的范圍，點(diǎn)擊“加入樣本”，這時(shí)樣本添加完成，只要在“工作列表”中點(diǎn)擊“測試”，待測樣本會(huì)變成紅色，就表示已經(jīng)選中所有添加的樣本“下一步”到“加至樣本架”欄，點(diǎn)擊全部加入“下一步”到“工作表報(bào)告”“下一步”到“完成”，選中“我想保存已編輯的工作表及立即執(zhí)行之”點(diǎn)擊“完成”。此時(shí)儀器會(huì)進(jìn)行初始化并進(jìn)入運(yùn)行工作表的“設(shè)定工作表”菜單，單擊圖示的相應(yīng)位置，分別擺放微孔板條、樣本、試劑架和

6、洗液瓶。（可在此界面轉(zhuǎn)動(dòng)樣本盤并放入樣本架，樣本艙門打開后，儀器會(huì)報(bào)警，須關(guān)閉艙門并點(diǎn)ok。）（若不能看到樣本盤界面，可以選擇到“選取工作表”并點(diǎn)擊“自定義瀏覽”然后在點(diǎn)擊到“設(shè)定工作表”欄即可）“下一步”到“設(shè)定輸入”“下一步”到“運(yùn)行工作表”，（此時(shí)可對步驟表中的步驟進(jìn)行選擇，代表要做的步驟，代表不做的步驟）選擇好步驟后，點(diǎn)擊“運(yùn)行”，儀器開始執(zhí)行操作步驟。（可以通過點(diǎn)擊“暫?！焙汀盎謴?fù)”按鈕讓儀器暫停工作和恢復(fù)工作。 實(shí)驗(yàn)完成以后，點(diǎn)擊“下一步”直到“完成”，退出操作界面。 注意：1.儀器在加樣本的過程中不可轉(zhuǎn)動(dòng)樣本盤。若一側(cè)報(bào)警需要處理時(shí)，要等到兩側(cè)樣本均加完才能進(jìn)行操作。2.若在試驗(yàn)

7、過程中需將病人標(biāo)本取出（加樣完畢），可在當(dāng)前頁面選擇“設(shè)定工作表”，點(diǎn)擊轉(zhuǎn)盤上放置樣本的相應(yīng)樣本架序號，轉(zhuǎn)盤會(huì)轉(zhuǎn)到相應(yīng)位置，即可取出，關(guān)閉艙門并點(diǎn)擊ok。點(diǎn)擊“運(yùn)行工作表”可回到實(shí)驗(yàn)界面。1.4.3 關(guān)機(jī)程序?qū)嶒?yàn)結(jié)束后，點(diǎn)擊“監(jiān)控”，進(jìn)入“啟動(dòng)/結(jié)束工作”界面，點(diǎn)擊屏幕右側(cè)的“關(guān)閉”菜單下的“下一步”，分別執(zhí)行“清空廢棄加樣頭頭”、“清空內(nèi)置廢液箱”、“用蒸餾水替換洗液”、“移走樣本盤”、“移走試劑盤”、“移走微孔板”，當(dāng)此按鈕變?yōu)橥Ｖ刮恢脮r(shí)，點(diǎn)擊之并讓左右兩側(cè)機(jī)械壁回到安全的關(guān)機(jī)位置。點(diǎn)擊“蒸餾水清洗洗板器”按鈕，此時(shí)用蒸餾水進(jìn)行洗板器的沖洗，需執(zhí)行三次以上，洗板器完全清洗完成后，點(diǎn)擊“關(guān)閉

8、儀器電腦”，此時(shí)內(nèi)部電腦win2000系統(tǒng)會(huì)關(guān)閉。等到屏幕提示“現(xiàn)在可以安全關(guān)閉儀器”，這時(shí)可以點(diǎn)擊右下角的關(guān)閉按鈕，再點(diǎn)擊左下角的退出按鈕。然后點(diǎn)擊startturnoffcomputerturnoff關(guān)閉外部電腦。然后關(guān)閉儀器電源開關(guān)及其電腦和顯示器的開關(guān)即可。1.5 維護(hù)與校準(zhǔn)1.5.1每日保養(yǎng)1.5.1.1每天開機(jī)時(shí)進(jìn)行儀器的自檢和兩側(cè)的液路填充，并查看自檢報(bào)告，是否所有項(xiàng)目均通過。1.5.1.2從冰箱中取出試劑架后需用干抹布擦干試劑架上的水氣，然后才能放在儀器上，避免水氣氧化儀器的金屬涂層。1.5.1.3關(guān)機(jī)前需要嚴(yán)格執(zhí)行關(guān)機(jī)程序，對液路系統(tǒng)進(jìn)行徹底沖洗（防止鹽類結(jié)晶堵塞管路、金屬針

9、和洗板器）。并點(diǎn)擊停止位置按鈕，讓兩側(cè)的機(jī)械臂回到安全的關(guān)機(jī)位置，只有機(jī)械臂在停止位置的情況下才能關(guān)閉儀器電源，否則易造成金屬針的損壞。1.5.1.4每天實(shí)驗(yàn)完成后需徹底排空廢液箱中的廢液，如無法排出則需要借助洗耳球等工具將廢液引流排出。1.5.2每周保養(yǎng)1.5.2.1對左右兩側(cè)的加樣針沖洗站進(jìn)行清潔。使用酒精棉簽清潔沖洗站，重點(diǎn)是右側(cè)的小洞，然后用棉簽蘸水擦拭。保養(yǎng)中注意不要將棉絮和殘?jiān)粼跊_洗站中，如有殘?jiān)欢ㄒ鍧嵏蓛?，否則會(huì)堵塞廢液閥。1.5.2.2用蒸餾水替換所有洗液瓶，選擇洗板器灌注程序進(jìn)行6遍以上沖灌。左右各執(zhí)行3遍以上液路填充程序。1.5.2.3用酒精棉簽清潔左右兩側(cè)金屬針外表

10、面，然后用蒸餾水清潔并擦干。給金屬針的外壁均勻涂上一層凡士林，然后用軟布涂布均勻。1.5.3每兩周保養(yǎng) 1.5.3.1用消毒液對廢吸頭盒進(jìn)行消毒，然后用蒸餾水沖洗，再用軟布擦干。1.5.3.2用消毒液對工作區(qū)進(jìn)行消毒，讓后用軟布擦干。1.5.3.3定期將my documentopenlabexecuted sessions文件夾和archived sessions文件夾備份到d:backup文件夾中，并以當(dāng)前日期命名子文件夾的名稱。1.5.4每月保養(yǎng)1.5.4.1用10%的naclo溶液替換所有洗液瓶，選擇洗板器灌注程序進(jìn)行6遍以上沖灌。等待510分鐘，用蒸餾水替換所有洗液瓶，選擇洗板器灌注程

11、序進(jìn)行10遍以上沖灌。1.5.4.2用10%的naclo溶液替換系統(tǒng)沖洗液瓶，左右兩側(cè)各執(zhí)行3遍以上液路填充程序。用蒸餾水替換所有洗液瓶，左右兩側(cè)各執(zhí)行6遍以上液路填充程序。1.5.4.3在關(guān)機(jī)的情況下，將左右兩側(cè)的機(jī)械臂移到安全的位置（移動(dòng)前需要將兩機(jī)械手抬到最上面。）去除洗板頭上的十字固定螺絲，將洗板頭往上平穩(wěn)移除，使用通針將16根針一一導(dǎo)通。清潔完洗板頭后，將洗板頭沿卡槽平穩(wěn)放入。再執(zhí)行洗板器灌注程序，沖灌洗板器即可。1.5.5不定期保養(yǎng)1.5.5.1不定期檢查真空泵的冷凝瓶中液體的，一般3個(gè)月左右，此瓶中會(huì)出現(xiàn)一些冷凝水。可將瓶底側(cè)的旋鈕調(diào)節(jié)到與桌面垂直，將水放出。（水面是無法全部排出

12、的，排到?jīng)]有水滴出為止。）排完水后將旋鈕調(diào)節(jié)到與桌面平行即可。另外需保證冷凝瓶不漏氣，可通過洗板時(shí)冷凝瓶處是否有異常氣流聲音來判斷。1.5.5.2在更換系統(tǒng)蒸餾水和洗液時(shí)需觀察過濾器的狀態(tài)，看是否有變色。儀器進(jìn)行液路填充時(shí)可以觀察注射器中是否氣泡產(chǎn)生。如有問題則需要保養(yǎng)過濾器（用10%naclo浸泡，然后再用蒸餾水浸泡），安裝過濾器時(shí)需注意過濾器的方向。（過濾器訂貨號：nxg6621 filter art）。1.5.5.3不定期的清潔儀器外觀和工作區(qū)域消毒。1.6新試驗(yàn)的程序設(shè)定1.6.1 打開nexgen startup程序，點(diǎn)擊【protocol and panels】，打開【新建】選擇

13、【elisa protocol】然后根據(jù)提示將操作說明輸入。1.6.2 打開nexgen startup程序，點(diǎn)擊【protocol and panels】，打開【新建】選擇 【elisa panel】選擇放入酶標(biāo)板、各試劑以及洗液的位置。1.6.3 打開康金系統(tǒng)，增加項(xiàng)目。二項(xiàng)目sop2.1 丙型肝炎病毒抗體2.1.1 測定原理所用包被抗原為合成多肽抗原和基因工程抗原（包括hcv病毒結(jié)構(gòu)區(qū)核心抗原和非結(jié)構(gòu)區(qū)抗原）。待測樣本加入已包被抗原的反應(yīng)孔內(nèi)孵育，若標(biāo)本中含有抗-hcv抗體，則該抗體與微孔內(nèi)抗原形成抗原抗體復(fù)合物，加入酶結(jié)合物，經(jīng)孵育后，酶結(jié)合物連接至抗原抗體復(fù)合物上，在tmb底物參與反

14、應(yīng)的情況下，產(chǎn)生顯色反應(yīng)。2.1.2 試劑購自上海科華生物工程股份有限公司（批準(zhǔn)文號:國藥準(zhǔn)字s10950047），試劑盒28避光保存，自檢定合格之日起有效期6 個(gè)月。組成：微孔反應(yīng)板（8孔12）、樣品稀釋液（20ml1瓶）、封板（5片）、陰性對照（1.0ml1瓶）、陽性對照（1.0ml1瓶）、酶結(jié)合物（7.5ml2瓶）、洗滌液（80ml1瓶）、顯色劑a（8.0 ml1瓶）顯色劑b（8.0 ml1瓶）、終止液 （7.0 ml1瓶）。2.1.3 儀器 亞特斯 nexgen four2.1.4 標(biāo)本要求；2.1.4.1 血清或血漿。2.1.4.2 在采集血液后的2 小時(shí)內(nèi)分離血清。并置于具塞試管中

15、。2.1.4.3 8h 內(nèi)不及時(shí)測定的樣品可存放于28冰箱保存。3 天后測定的樣品置-15-20冰凍保存，待復(fù)融后測量。但不易反復(fù)凍融。2.1.4.4 樣品視為傳染品，注意安全操作。2.1.5操作步驟2.1.5.1打開電腦自動(dòng)開啟“nexgen startup”程序。2.1.5.2打開n4儀器電源，點(diǎn)擊【監(jiān)控】進(jìn)入自檢程序。2.1.5.3自檢結(jié)束后點(diǎn)擊“液壓填充”，在“液壓填充”欄中根據(jù)需要選擇左面，右面或者兩邊，分別對管路，金屬針進(jìn)行灌注。2 1.5.4后點(diǎn)擊“關(guān)閉”，開機(jī)自檢完成，退出自檢菜單。2.1.5.5單擊“elisa工作表編輯”，進(jìn)入聯(lián)機(jī)測試程序：選取已經(jīng)建立的模板名稱，點(diǎn)擊“下一

16、步”，進(jìn)入“信息”界面，點(diǎn)擊“下一步”，進(jìn)入“添加樣本”（1到n），點(diǎn)擊“加入樣本”，顯示樣本放置位置，進(jìn)入“工作表報(bào)告”界面，點(diǎn)擊“下一步”，接著點(diǎn)擊“完成”，2.1.5.6儀器會(huì)進(jìn)行初始化并進(jìn)入運(yùn)行工作表的“設(shè)定工作表”菜單，單擊圖示的相應(yīng)位置，分別擺放微孔板條、樣本、試劑架和洗液瓶。2.1.5.7接著在“運(yùn)行工作表”界面點(diǎn)擊運(yùn)行，此時(shí)儀器開始運(yùn)行。完成后點(diǎn)擊“完成”，在結(jié)果全部完成后提示“運(yùn)行結(jié)束”，按ok確認(rèn)2.1.5.8進(jìn)入“數(shù)據(jù)結(jié)果”界面，在數(shù)據(jù)結(jié)果中選擇已完成的測試名稱，根據(jù)系統(tǒng)提示點(diǎn)擊“下一步”查看結(jié)果，并可選擇“打印”，最后點(diǎn)擊“關(guān)閉”，退出操作界面，進(jìn)入關(guān)機(jī)程序。2.1.5

17、.9執(zhí)行關(guān)機(jī)程序。2.1.5.10進(jìn)入康金系統(tǒng)處理數(shù)據(jù)，即可得到結(jié)果。2.1.6檢驗(yàn)方法的局限性2.1.6.1此方法僅適用于個(gè)人的血清或血漿樣本檢測，不適用于混合血清或血漿樣本以及其他體液樣本。2.1.6.2 檢測高度溶血的樣本，血液沒有完全凝固的血清樣本、有微生物污染的樣本可能會(huì)有錯(cuò)誤結(jié)果。2.2 梅毒螺旋體抗體2.2.1測定原理用梅毒螺旋體抗原包被反應(yīng)板，用梅毒螺旋體抗原標(biāo)記辣根過氧化物酶，應(yīng)用雙抗原夾心法原理，檢測人血清或血漿樣本中的梅毒螺旋體抗體。2.2.2 試劑購自上?？迫A生物工程股份有限公司（批準(zhǔn)文號:國藥準(zhǔn)字s10950057），試劑盒28避光保存，自檢定合格之日起有效期6 個(gè)月

18、。組成：微孔反應(yīng)板（8孔12）、封板（5片）、陰性對照（1.0ml1瓶）、陽性對照（1.0ml1瓶）、酶結(jié)合物（12ml1瓶）、洗滌液（80ml1瓶）、顯色劑a（8.0 ml1瓶）顯色劑b（8.0 ml1瓶）、終止液 （7.0 ml1瓶）。2.2.3 儀器 亞特斯 nexgen four2.2.4 標(biāo)本要求；2.2.4.1 血清或血漿。2.2.4.2 在采集血液后的2 小時(shí)內(nèi)分離血清。并置于具塞試管中。2.2.4.3 8h 內(nèi)不及時(shí)測定的樣品可存放于28冰箱保存。3 天后測定的樣品置-15-20冰凍保存，待復(fù)融后測量。但不易反復(fù)凍融。2.2.4.4 樣品視為傳染品，注意安全操作。2.2.5 操作步驟2.2.5.1打開電腦自動(dòng)開啟“nexgen startup”程序。2.2.5.2打