醫(yī)學(xué)微生物學(xué)：實驗7

1、實實 驗驗 七七 n病例二3總結(jié) n糞標本病原菌鑒定：玻片凝集試驗(操作，每組1份) n厭氧培養(yǎng)法，產(chǎn)氣莢膜梭菌雙層溶血環(huán)，“洶涌發(fā) 酵”（示教） n厭氧菌鏡下形態(tài)：（示教鏡） n鏡下觀察鉤端螺旋體、梅毒螺旋體; 暗視野觀察鉤 端螺旋體形態(tài)； nRPR試驗（操作，每組2份） n病例四1討論、病例五1討論 病例二3討論 n經(jīng)檢驗，該患者食用生牛肉刺身的餐館中牛肉 食材某致病菌數(shù)量超標。院方的微生物學(xué)檢查 結(jié)果發(fā)現(xiàn)該患者所感染的致病菌為革蘭陰性菌 ，有鞭毛，乳糖發(fā)酵實驗陽性，H2S實驗陽性 。請繼續(xù)完成既定實驗，并回答以下問題： q根據(jù)現(xiàn)有實驗結(jié)果，哪種病原體感染的可能性較大 ？ q從鑒別培養(yǎng)基的

2、培養(yǎng)結(jié)果來看，病原體是否具有上 述生物學(xué)特性，請說明？ q根據(jù)各項微生物學(xué)檢查實驗結(jié)果，做出診斷結(jié)論， 提出治療方案。 癥狀、體征、實驗室檢查癥狀、體征、實驗室檢查 急性胃腸炎？急性胃腸炎？ 微生物學(xué)檢查：微生物學(xué)檢查： 初診：初診： 取糞便取糞便 分離細菌分離細菌 確定病原菌確定病原菌 純培養(yǎng)、初步鑒定純培養(yǎng)、初步鑒定 血清學(xué)鑒定血清學(xué)鑒定 病 例 二 總 結(jié) SSSS平板平板 雙糖鐵、半固體雙糖鐵、半固體 玻片凝集試驗玻片凝集試驗 腸道致病菌的檢查及鑒別程序腸道致病菌的檢查及鑒別程序 血液、骨髓穿刺液血液、骨髓穿刺液膽汁肉湯培養(yǎng)基（增菌培養(yǎng)）膽汁肉湯培養(yǎng)基（增菌培養(yǎng)） 糞便、肛拭、嘔吐物糞

3、便、肛拭、嘔吐物伊紅美藍瓊脂平板伊紅美藍瓊脂平板 SSSS瓊脂平板瓊脂平板 （分離培養(yǎng)）（分離培養(yǎng)） 挑取可疑菌落挑取可疑菌落 雙糖鐵培養(yǎng)基雙糖鐵培養(yǎng)基 （純分離及初步鑒定）（純分離及初步鑒定） 系列生化反應(yīng)系列生化反應(yīng) 血清學(xué)鑒定血清學(xué)鑒定 確定病原確定病原 糞標本鑒定（玻片凝集試驗）糞標本鑒定（玻片凝集試驗） 原理：原理： 菌體血清中抗體菌體血清中抗體 凝集凝集 方法：方法： 菌體血清菌體血清 結(jié)果判讀：凝集為陽性結(jié)果判讀：凝集為陽性 注意事項：注意事項： 取菌量不易過多，使懸液呈輕度乳濁即可。取菌量不易過多，使懸液呈輕度乳濁即可。 玻片凝集試驗玻片凝集試驗 1、玻片上滴加沙門菌多價血清、

4、痢疾血清各一、玻片上滴加沙門菌多價血清、痢疾血清各一 滴、滴、NS一滴作對照一滴作對照 2、挑取細菌混勻、挑取細菌混勻 3、出現(xiàn)白色小凝集塊為陽性、出現(xiàn)白色小凝集塊為陽性 沙門菌多價血清沙門菌多價血清 志賀菌血清志賀菌血清 NS 厭氧培養(yǎng)法厭氧培養(yǎng)法 皰肉（肉渣）培養(yǎng)法皰肉（肉渣）培養(yǎng)法: 厭氧環(huán)境的形成：厭氧環(huán)境的形成： 谷胱甘肽谷胱甘肽(含含-SH基基)，可發(fā)生氧化還原反應(yīng)，可發(fā)生氧化還原反應(yīng)， 降低環(huán)境中的氧化勢能；降低環(huán)境中的氧化勢能； 不飽和脂肪酸，能吸收環(huán)境中的氧不飽和脂肪酸，能吸收環(huán)境中的氧 不飽和脂肪酸不飽和脂肪酸+O2氫過氧化物氫過氧化物 37。 。C 48-72h 結(jié)果觀察

5、結(jié)果觀察 焦性沒食子酸法焦性沒食子酸法 原理：原理： 焦性沒食子酸在堿性環(huán)境下吸氧焦性沒食子酸在堿性環(huán)境下吸氧 方法：方法： 1.劃線接種產(chǎn)氣莢膜梭菌菌液于血平板。接種劃線接種產(chǎn)氣莢膜梭菌菌液于血平板。接種2塊血平板塊血平板 2.無菌玻璃板，中央放一小塊紗布，其上再放無菌玻璃板，中央放一小塊紗布，其上再放0.5g焦性焦性 食子酸，加入食子酸，加入10%NaOH 3.立即將接種好的其中立即將接種好的其中1塊平板覆蓋于玻璃板上。并用石塊平板覆蓋于玻璃板上。并用石 蠟封閉。蠟封閉。 4. 2塊血平板孵育塊血平板孵育48h后觀察結(jié)果后觀察結(jié)果 厭氧罐法厭氧罐法 材料：材料：密封罐、產(chǎn)氣袋密封罐、產(chǎn)氣袋

6、(CO2和和H2)、催化劑、催化劑(鈀鈀)、指示劑、指示劑(美白美白) 厭氧環(huán)境形成：厭氧環(huán)境形成： 產(chǎn)氣袋：檸檬酸 NaBH NaHCO3 30min 后 美藍美藍( (藍色藍色) 美白美白( (無色無色) ) CO2H2 厭氧環(huán)境的確定：厭氧環(huán)境的確定： 1.指示劑顏色顯示指示劑顏色顯示 2.罐內(nèi)產(chǎn)生多量小水珠罐內(nèi)產(chǎn)生多量小水珠 造成厭氧環(huán)境的三要素：造成厭氧環(huán)境的三要素： 1.密封嚴密密封嚴密 2.產(chǎn)生足量的產(chǎn)生足量的H2 3.鈀的活性正常鈀的活性正常 產(chǎn)氣莢膜梭菌產(chǎn)氣莢膜梭菌 G+大桿菌，芽胞位于次極端，橢圓形，直徑小于菌體，無鞭大桿菌，芽胞位于次極端，橢圓形，直徑小于菌體，無鞭 毛，

7、有莢膜。毛，有莢膜。厭氧。厭氧。產(chǎn)生產(chǎn)生4種毒素（種毒素（） 1.雙層溶血環(huán)雙層溶血環(huán)：血瓊脂平板：血瓊脂平板 內(nèi)環(huán)：內(nèi)環(huán)：毒素毒素 完全溶血完全溶血 外環(huán)：外環(huán)：毒素毒素 不完全溶血不完全溶血 2.洶涌發(fā)酵洶涌發(fā)酵 牛乳培養(yǎng)基牛乳培養(yǎng)基 分解乳糖分解乳糖 產(chǎn)酸：酪蛋白凝固產(chǎn)酸：酪蛋白凝固 產(chǎn)氣：將凝固酪蛋白沖成蜂窩狀，凡士林往上推產(chǎn)氣：將凝固酪蛋白沖成蜂窩狀，凡士林往上推 產(chǎn) 氣 莢 膜 梭 菌 的 雙 層 溶 血 環(huán) 產(chǎn) 氣 莢 膜 梭 菌 的 洶 涌 發(fā) 酵 現(xiàn) 象 破傷風(fēng)梭菌 肉毒梭菌 脆弱類桿菌 油鏡下鉤端螺旋體油鏡下鉤端螺旋體 鍍銀染色 油鏡下梅毒螺旋體油鏡下梅毒螺旋體 油鏡下回歸

8、熱螺旋體油鏡下回歸熱螺旋體 暗視野顯微鏡的原理示意圖暗視野顯微鏡的原理示意圖 暗視野下的鉤端螺旋體暗視野下的鉤端螺旋體 梅毒血清學(xué)試驗梅毒血清學(xué)試驗 n特異性梅毒血清學(xué)試驗特異性梅毒血清學(xué)試驗 FTA-ABS TPI n非特異梅毒血清學(xué)試驗非特異梅毒血清學(xué)試驗 VDRL USR RPR TRUST 敏感性高，特異性低敏感性高，特異性低 Ag：螺旋體：螺旋體或或其成分其成分 Ag：牛心肌類脂：牛心肌類脂 RPR（Rapid Plasma Reagin ） 原理原理 牛心肌類脂牛心肌類脂 炭粒炭粒 顆粒性顆粒性Ag Ab 間接炭凝間接炭凝 + 方法方法 n待檢血清加入卡片的圓圈內(nèi)待檢血清加入卡片的

9、圓圈內(nèi) 并作陰性、陽性對照并作陰性、陽性對照 n滴加一滴滴加一滴RPR抗原抗原 n100轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)/min，8min n結(jié)果觀察：結(jié)果觀察： 出現(xiàn)黑色凝集顆粒：陽性出現(xiàn)黑色凝集顆粒：陽性 病例四1討論 n患者，女性，43歲，體重45kg。于2012年11月19日 受涼后出現(xiàn)頭痛，為持續(xù)性頭部脹痛，伴有視力下降 ，視物模糊而入院。 n病史：患者曾自行口服感冒清熱顆粒3d癥狀無好轉(zhuǎn)， 遂就診于某市級醫(yī)院以顱內(nèi)感染進行抗病毒治療，亦 未見好轉(zhuǎn)。 n入院查體：體溫37，脈搏88次/min，呼吸20次/min ，血壓126/90mmHg；神清語利，雙側(cè)瞳孔等大等圓 ，對光反射消失，頸項強直，布氏征（），余內(nèi)科

10、 檢查無特殊發(fā)現(xiàn)。頭顱CT以及腦血管造影無特殊改 變。眼底檢查見視乳頭水腫。 n實驗室檢查：腦脊液（CFS）壓力250mmHg，腦脊 液（CSF）白細胞總數(shù)130106個/。 病例四1討論 n從病歷中找出患者的臨床表現(xiàn)和實驗室檢查結(jié) 果有哪些異常。 n患者最可能的初步臨床診斷是什么？應(yīng)跟哪些 疾病作鑒別診斷？尚需追問哪些病史？ n為快速診斷，首先可進行什么實驗室檢查？ 病例四1分析 n隱球菌性腦膜炎 結(jié)核性腦膜炎；細菌性腦膜炎；病毒性腦膜炎 ；腦腫瘤；腦出血 n腦脊液沉渣標本；墨汁染色、革蘭染色、抗酸 染色 病例五1討論 n女性，30歲，乏力、厭食、惡心，伴尿色深黃5天。 n患者2周前曾出現(xiàn)畏

11、寒、發(fā)熱，體溫37.5，無鼻塞、流涕、咳嗽 、咳痰、皮疹等，無特殊治療而自愈。5天前無明顯誘因出現(xiàn)乏力, 體力明顯下降，胃納差，厭油，偶有惡心嘔吐，進食后明顯，伴尿 色逐漸加深至深黃。無尿路刺激征，無反酸、噯氣、腹痛、腹脹、 發(fā)熱、畏寒等，無腹瀉 粘液血便 關(guān)節(jié)腫痛等。今日就診發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)氨 酶異常，以肝功異常原因待查收入院。患者既往體健，無肝炎和 結(jié)核病史，疫苗接種史不詳，三個月前因外傷手術(shù)曾接受過輸血， 否認藥物過敏史，在她認識的人中沒有類似癥狀者。 nT37，BPl3080mmHg，P80次分，R12次分；神志清，皮 膚無黃疸、瘀斑或蜘蛛痣，鞏膜輕度黃染；肺肝濁音界位于右鎖骨 中線第五肋間，肋下2cm處可觸及肝臟邊緣，質(zhì)軟，有壓痛及叩擊 痛，腹平軟，無腹水征，腸鳴音正常；頸無抵抗，心肺無陽性體征 病例五1討論 n該患者的臨床體征和實驗室檢查結(jié)果有哪些異 常？ n引起肝功能異常的