血竭凝血和抗血小板聚集論文

1、血竭凝血和抗血小板聚集論文【摘要】目的考察不同產(chǎn)地血竭在凝血和抗血小板聚集方面的作用。方法采用毛細(xì)血管法測(cè)定凝血時(shí)間,體內(nèi)血小板致聚劑膠原和腎上腺素誘導(dǎo)小鼠血瘀模型。結(jié)果不同產(chǎn)地血竭對(duì)正常小鼠的凝血功能均有一定的抑制作用,可較明顯抑制小鼠對(duì)血小板致聚劑誘發(fā)的血小板聚集作用。結(jié)論國(guó)產(chǎn)血竭和進(jìn)口血竭均有一定的活血化瘀和抗血栓形成的作用。 【關(guān)鍵詞】血竭;凝血時(shí)間;血小板致聚劑 Abstract:ObjectiveToassesstheactivityinbloodclottingandantiplateletaggregationofdragonbloodfromdifferenthabitats

2、.MethodsCapillarymethodwasusedtogetclottingtimeandcongestivemicemodelinducedwithcollagenproteinandepinephrinehydrochloridewasused.ResultsDragonbloodfromdifferenthabitatshavesomeinhibitoryactionsonbloodclottingofhealthyKunmingmice,plateletaggregationinducedbyplateletactivationwasalsoinhibitedobviousl

3、y.ConclusionDragonbloodsfromChinaandabroadhavesomeeffectsonpromotingbloodcirculation,removingbloodstasisandanti-thrombosis. Keywords:Dragonblood;clottingtime(CT);plateletaggregation 血竭(dragonblood)是珍貴的中藥傳統(tǒng)品種之一,主要來(lái)源于棕櫚科麒麟竭及百合龍血樹(shù)屬龍血竭,進(jìn)口的血竭主要為棕櫚科麒麟血竭。國(guó)產(chǎn)龍血竭與進(jìn)口棕櫚科的血竭相比,在化學(xué)成分上有較大差異,國(guó)產(chǎn)血竭對(duì)血液系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)有較強(qiáng)的藥理作用

4、1-3。本研究的目的是以凝血時(shí)間和抗血小板聚集反應(yīng)為指標(biāo),比較不同產(chǎn)地血竭凝血和抗血小板聚集作用,為進(jìn)一步研究國(guó)產(chǎn)血竭替代進(jìn)口血竭在血液方面的作用機(jī)制提供理論依據(jù)。 1實(shí)驗(yàn)材料 1.1藥品與試劑廣西、云南、印尼、龍王、柬龍5種產(chǎn)地血竭原料,購(gòu)于市場(chǎng),由廣東藥學(xué)院藥科學(xué)院天然藥物化學(xué)教研室呂華沖副教授鑒定,自處理:用95%乙醇索式提取,所得醇溶物干燥,按血竭醇溶物泊洛沙姆聚乙二醇4000(質(zhì)量比為121),乙醇溶劑熔融法制備成固體分散體;地奧心血康,成都地奧制藥集團(tuán)有限公司,批號(hào)060611;復(fù)方丹參片,廣州白云山和記黃埔中藥有限公司(原廣州白云山中藥廠(chǎng)),批號(hào)20051025;鹽酸腎上腺素注射

5、液,北京市永康藥業(yè)有限公司1mL1mg,批號(hào)05100241;I型膠原蛋白,NorthingtonBiochemicalCorporation公司,1g分裝,批號(hào)35E8048。 1.2動(dòng)物昆明小鼠,SPF級(jí),雄性,體質(zhì)量1822g,購(gòu)于廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,合格證號(hào)2006A017。 1.3儀器上皿電子天平FA2104(上海精密科學(xué)儀器有限公司);鉆石牌機(jī)械秒表(上海星鉆秒表有限公司);電動(dòng)玻璃勻漿機(jī)DY89-1型(寧波新之生物科技股份有限公司)。 1.4藥品、試劑的前處理與配制血竭溶液:分別稱(chēng)取廣西、云南、印尼、龍王、柬龍血竭固體分散體各10g,再分別稱(chēng)取廣西、印尼血竭固體分散體各5g和2.

6、5g,共9份,分別加100mL注射用0.9%NaCl研磨均勻,即得9種不同類(lèi)型和劑量的血竭溶液。 復(fù)方丹參片溶液:復(fù)方丹參片3片加20mL注射用0.9%NaCl研磨均勻,即得15mg/mL丹參混懸液;地奧心血康溶液:地奧心血康膠囊10粒加100mL注射用0.9%NaCl研磨均勻,即得甾體總皂甙10mg/mL地奧混懸液。 血小板聚集誘導(dǎo)劑溶液:精密稱(chēng)取型膠原01mg,加入75mL的生理鹽水,用電動(dòng)勻漿機(jī)冰浴下勻漿4h,再靜置冷藏2d,臨用前1d,加入20mL鹽酸腎上腺素注射液,搖勻,定容到100mL,冰箱4冷藏,避光保存?zhèn)溆谩?2方法 2.1毛細(xì)管法測(cè)定血液凝聚時(shí)間(自改良)昆明小鼠192只,按

7、體質(zhì)量分類(lèi)、隨機(jī)分組,每組16只,分為NS組、陽(yáng)性對(duì)照組(復(fù)方丹參片組0.3g/kg、地奧心血康膠囊組0.2g/kg)、不同產(chǎn)地龍血竭固體分散體組(廣西血竭組分為0.5g/kg、10g/kg、2.0g/kg低中高三組,印尼血竭組分為05g/kg、1.0g/kg、2.0g/kg低中高三組,云南組20g/kg,龍王血竭組2.0g/kg,柬龍血竭組2.0g/kg);實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)空白對(duì)照組給予0.9%氯化鈉溶液,每天按體質(zhì)量灌胃給藥1次,連續(xù)給藥7d。 末次給藥1.5h后,在17的空調(diào)房間內(nèi),用毛細(xì)管插入小鼠眼底靜脈叢取血,深約45mm,輕輕轉(zhuǎn)動(dòng),自血液流入管內(nèi)按動(dòng)秒表、開(kāi)始計(jì)時(shí),血液注滿(mǎn)后取出毛細(xì)管平放

8、于水平臺(tái)面,每隔10s向兩側(cè)傾斜一次,觀(guān)察血液流動(dòng)性,記錄出現(xiàn)血液不再流動(dòng)的時(shí)間4。 2.2藥物對(duì)膠原蛋白和腎上腺素誘導(dǎo)血瘀模型小鼠的保護(hù)作用5昆明小鼠240只,按體質(zhì)量分類(lèi),隨機(jī)分組,每組20只,分組同2.1,每天按體質(zhì)量給藥,連續(xù)給藥7d。 末次給藥1.5h后,小鼠尾靜脈注射膠原蛋白和腎上腺素的混合誘導(dǎo)劑,誘發(fā)動(dòng)物血栓性偏癱甚至死亡,記錄注射后10min內(nèi)小鼠死亡數(shù),計(jì)算恢復(fù)率以及存活時(shí)間。小鼠10min內(nèi)存活計(jì)為恢復(fù),恢復(fù)率=每組恢復(fù)動(dòng)物數(shù)/每組動(dòng)物數(shù)100%6,7,存活時(shí)間10min的,統(tǒng)一記錄存活時(shí)間為10min。 2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理凝血時(shí)間數(shù)據(jù)以(s)表示,用單因素方差分析(SAS統(tǒng)

9、計(jì)軟件,version9.0),以P 3結(jié)果 3.1不同產(chǎn)地血竭制劑對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響經(jīng)單因素方差分析,各給藥組與空白組比較差異均有顯著性(P0.05),其余給藥組差異無(wú)顯著性(P0.05)。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,廣西和印尼血竭的延長(zhǎng)凝血時(shí)間作用似有濃度相關(guān)性,印尼1g/kg組為有效濃度。復(fù)方丹參片,作為臨床的常用活血化瘀藥,延長(zhǎng)凝血時(shí)間方面的作用并不很強(qiáng)。地奧心血康可較明顯延長(zhǎng)小鼠凝血時(shí)間,但與印尼組相比差異無(wú)顯著性。見(jiàn)表1。 表1不同產(chǎn)地血竭對(duì)正常昆明小鼠凝血時(shí)間的影響(略) Tab.1EffectofDragonbloodfromdifferenthabitatsontheclottingt

10、imeofKMmicewithcapillarytest 與空白對(duì)照組比較:*P 3.2不同產(chǎn)地血竭對(duì)血栓形成小鼠存活時(shí)間的影響每組恢復(fù)動(dòng)物數(shù)進(jìn)行2檢驗(yàn),2=24.6257,P0.05,提示廣西與印尼血竭的效果似無(wú)濃度相關(guān)性,各濃度組組間差異無(wú)顯著性;廣西和印尼的高劑量組、云南組、龍王組、柬龍組4組組間對(duì)小鼠存活率的改善作用差異無(wú)顯著性,相比較而言,廣西和印尼的低劑量組、云南組同丹參組、地奧組有較好的提高小鼠存活率的作用,龍王和柬龍組對(duì)小鼠存活率的改善作用比丹參組、地奧組差,差異有顯著性。 存活時(shí)間先進(jìn)行F檢驗(yàn),組間方差齊性,給藥組與空白組經(jīng)t檢驗(yàn),給藥組能明顯提高小鼠的存活時(shí)間;給藥各組對(duì)提

11、高小鼠存活時(shí)間的作用差異無(wú)顯著性(P0.05)。結(jié)果見(jiàn)表2。 表2不同產(chǎn)地血竭對(duì)血栓形成昆明小鼠存活時(shí)間的影響(略) Tab.2EffectsofDragonbloodfromdifferenthabitatsonthelivingtimeofcongestivemiceinducedwithcollagenproteinandepinephrinehydrochloride 與空白對(duì)照組比較:*P 4討論 毛細(xì)管測(cè)定凝血時(shí)間法是一種經(jīng)典的血液、心血管作用藥物有效性的初篩方法,具有操作簡(jiǎn)單、無(wú)設(shè)備性要求的優(yōu)點(diǎn)4。本研究在此經(jīng)典方法上稍作改進(jìn),以觀(guān)察毛細(xì)管中血液流動(dòng)性為凝血的觀(guān)測(cè)指標(biāo),當(dāng)發(fā)生流動(dòng)

12、性減慢時(shí),毛細(xì)管中的某一區(qū)段可能先有凝血小栓形成,采用此法比原先的經(jīng)典觀(guān)察法折斷毛細(xì)血管觀(guān)察血凝絲,可更有效地減少實(shí)驗(yàn)中的人為操作誤差和環(huán)境誤差,避免毛細(xì)管中某一小段區(qū)域先發(fā)生了凝血而在折斷毛細(xì)管的過(guò)程中未觀(guān)察到,提高了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性和均一性。 膠原和腎上腺素致血瘀模型是中醫(yī)學(xué)上常用的致血小板聚集血栓栓塞模型,膠原可以激活血小板膜上磷脂酶A2,加速磷脂水解釋放花生四烯酸,花生四烯酸在環(huán)氧酶以及進(jìn)一步血栓烷A2合成酶的作用下轉(zhuǎn)化為血栓素A2(TXA2),促進(jìn)血小板聚集,腎上腺素兼有受體和受體的激動(dòng)作用,其激動(dòng)受體可引起皮膚、黏膜、內(nèi)臟血管收縮,其激動(dòng)受體可引起骨骼肌和心肌興奮、心率加快等作用,

13、故膠原和腎上腺素合用具有增強(qiáng)致血小板聚集的協(xié)同作用。 我國(guó)的血竭長(zhǎng)期以來(lái)主要靠進(jìn)口,國(guó)產(chǎn)血竭為血竭資源的開(kāi)發(fā)利用開(kāi)辟了前景。本實(shí)驗(yàn)研究表明:不同產(chǎn)地血竭可明顯延長(zhǎng)正常小鼠凝血時(shí)間,血液狀態(tài)明顯比正常組顏色更鮮紅。國(guó)產(chǎn)血竭有與進(jìn)口血竭近似的活血作用。對(duì)正常小鼠凝血時(shí)間的改變作用,不同產(chǎn)地血竭有差異,廣西血竭與印尼血竭延長(zhǎng)凝血時(shí)間(CT)的作用相對(duì)最強(qiáng),這與胡海燕等人的報(bào)道不同8。對(duì)膠原與腎上腺素合用致血栓栓塞小鼠的保護(hù)作用,不同產(chǎn)地血竭沒(méi)有差異,廣西和云南血竭在保護(hù)血小板致聚劑誘導(dǎo)血栓形成小鼠的方面的作用相對(duì)比較強(qiáng)。且廣西和印尼血竭作用效果似沒(méi)有濃度相關(guān)性。廣西和云南血竭作為國(guó)內(nèi)主要的血竭資源,是否可以完全代替印尼血竭以及深入探討血竭的活血作用機(jī)制,還需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。 【參考文獻(xiàn)】 1蘇健,王寶琴,韓敏彩,等.進(jìn)口與國(guó)產(chǎn)血竭含量測(cè)定方法研究進(jìn)展J.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2005,12(1):49. 2朱華,黃海濱,田輝國(guó).產(chǎn)血竭的化學(xué)成分研究概況J.廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2002,5(4):90. 3向金蓮,程睿,張路晗.血竭的活血和止血作用研究J.華西藥學(xué)雜志,2000,15(6):433. 4徐叔云.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)M.北京:人民衛(wèi)生出版社19