免疫球蛋白檢測(cè)

1、第一章第一章 血液標(biāo)本采集與處理血液標(biāo)本采集與處理臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)第十七第十七章章 免疫球蛋白檢測(cè)免疫球蛋白檢測(cè)馮珍如目 錄第一節(jié) 免疫球蛋白的生物學(xué)功能第二節(jié) IgG、IgM、IgA測(cè)定方法及臨床意義第三節(jié) 血液IgE和IgD測(cè)定方法及臨床意義第四節(jié) 冷球蛋白測(cè)定方法及臨床意義第第一一節(jié)節(jié) 免疫球蛋白生物學(xué)功能免疫球蛋白生物學(xué)功能重點(diǎn)提示免疫球蛋白異質(zhì)性的表現(xiàn)類(lèi)型免疫球蛋白V區(qū)和C區(qū)功能特點(diǎn)五類(lèi)免疫球蛋白的不同功能特點(diǎn)一一、免疫球蛋白的異質(zhì)性、免疫球蛋白的異質(zhì)性免疫球蛋白的類(lèi)型免疫球蛋白的多樣性免疫球蛋白的血清型二、免疫球蛋白的二、免疫球蛋白的功能功能免疫球蛋白的V區(qū)作用免疫球蛋白的C區(qū)作

2、用五類(lèi)免疫球蛋白不同的生物學(xué)功能第二節(jié)第二節(jié) IgGIgG、IgMIgM、IgAIgA測(cè)定方法及臨床意義測(cè)定方法及臨床意義重點(diǎn)提示不同標(biāo)本類(lèi)型的IgG、IgM、IgA檢測(cè)方法血液IgG、IgM、IgA檢測(cè)方法的比較不同標(biāo)本類(lèi)型的IgG、IgM、IgA檢測(cè)意義IgG亞型檢測(cè)的臨床意義選擇性蛋白尿指數(shù)白蛋白商值IgG生成指數(shù)一、血液一、血液IgG、IgM、IgA測(cè)定方法及臨床意義測(cè)定方法及臨床意義測(cè)定方法單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）放射免疫試驗(yàn)（RIA）免疫固定電泳免疫比濁法：免疫透射比濁法、免疫散射比濁法測(cè)定方法 血液IgG、IgM、IgA檢測(cè)方法的比較優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)缺陷缺陷單向免疫

3、擴(kuò)散試驗(yàn)單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)操作簡(jiǎn)便，不需特殊設(shè)備耗時(shí)長(zhǎng)，靈敏度較低，免疫球蛋白在固相中的沉淀環(huán)不明，導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）靈敏度高，特異性好檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，批量檢測(cè)。放射免疫試驗(yàn)（放射免疫試驗(yàn)（RIA）靈敏度高，特異性好放射性核素污染，試劑有效期短。免疫固定電泳免疫固定電泳主要用于M蛋白測(cè)定屬定性測(cè)定免疫透射比濁法免疫透射比濁法靈敏度比單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)高510倍，結(jié)果準(zhǔn)確，操作簡(jiǎn)單，可使用全自動(dòng)或簡(jiǎn)單比色計(jì)比濁進(jìn)行檢測(cè)，特別適合臨床基層單位應(yīng)用。耗時(shí)長(zhǎng)，靈敏度較免疫散射比濁法低。免疫散射比濁法免疫散射比濁法線(xiàn)性范圍寬、靈敏度高（最小檢測(cè)量可達(dá)g/L）、準(zhǔn)確度高

4、、精密度高、檢測(cè)時(shí)間短（一般在幾分鐘內(nèi)即可完成測(cè)試）和穩(wěn)定性好。儀器和試劑較免疫透射比濁法貴，對(duì)抗體質(zhì)量要求高。臨床意義年齡的差異：年齡的差異：年齡不同其血液中的免疫球蛋白的含量有一定變化。新生兒可由母體獲得通過(guò)胎盤(pán)轉(zhuǎn)移來(lái)的IgG，故血液中含量較高，接近成人水平。嬰幼兒體液免疫功能尚不成熟，免疫球蛋白含量低于成人。血液免疫球蛋白隨年齡、性別、血型、種族及測(cè)定方法不同而有所差別。臨床意義多克隆高免疫球蛋白血癥多克隆高免疫球蛋白血癥：肝臟疾病如慢性活動(dòng)性肝炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化、隱匿性肝硬化等患者血清中三類(lèi)免疫球蛋白均可升高。慢性細(xì)菌感染如肺結(jié)核、麻風(fēng)、慢性支氣管炎等血中IgG可升高。宮內(nèi)感染時(shí)臍

5、血或出生后的新生兒血清中IgM含量可增高。自身免疫病時(shí)免疫球蛋白均可升高，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者以IgG、IgA升高較多見(jiàn)，類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者以IgM升高為主。臨床意義單克隆免疫球蛋白升高單克隆免疫球蛋白升高：主要是指患者血清中某一類(lèi)免疫球蛋白含量顯著增多，大多在30g/L以上。這種異常增多的免疫球蛋白理化性質(zhì)十分一致，稱(chēng)為單克隆蛋白（monoclonal protein，MP）即M蛋白。此類(lèi)異常增多的免疫球蛋白多無(wú)免疫活性，故又稱(chēng)副蛋白（paraprotein）。由M蛋白所致的疾病稱(chēng)為免疫增殖性疾病，如：多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、惡性淋巴瘤、重鏈病、輕鏈病等。臨床意義低免疫球蛋白血癥低免疫球蛋

6、白血癥：先天性先天性低免疫球蛋白血癥：體液免疫缺陷病聯(lián)合免疫缺陷病獲得性獲得性低免疫球蛋白血癥：患者血清中IgG常小于5g/L，引起的原因較多。大量蛋白丟失：如燒傷、剝脫性皮炎、腎病綜合征等淋巴系統(tǒng)腫瘤：如白血病、霍奇金淋巴瘤等感染性疾?。喝绨滩￠L(zhǎng)期使用免疫抑制劑二、血液二、血液IgG亞類(lèi)測(cè)定方法及臨床意義亞類(lèi)測(cè)定方法及臨床意義測(cè)定方法單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)：最早用于IgG亞類(lèi)測(cè)定，但靈敏度低，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)等缺陷，臨床已不用。ELISA：因抗原特異性較差，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，臨床應(yīng)用較少。免疫散射比濁法：以檢測(cè)速度快，靈敏度高，準(zhǔn)確性好，自動(dòng)化程度高等為優(yōu)點(diǎn)，在臨床廣泛應(yīng)用。臨床意義年齡年齡：IgG亞類(lèi)在不

7、同年齡、種族以及不同測(cè)定方法的情況下，檢測(cè)結(jié)果都存在差異。IgG亞類(lèi)的含量隨年齡的不同而變化。在兒童時(shí)期，男性IgG亞類(lèi)缺陷比女性常見(jiàn)，其比例為3:1；成年男女的比例為4:2。兒童中IgG2缺陷最常見(jiàn)，成年人IgG1和IgG3缺陷最常見(jiàn)。臨床意義IgGIgG亞類(lèi)缺陷亞類(lèi)缺陷： 臨床上可表現(xiàn)為反復(fù)呼吸道感染、腹瀉、中耳炎、鼻竇炎、支氣管擴(kuò)張以及哮喘等。有些患者IgG亞類(lèi)異常，但總IgG正常甚至還偏高，因此認(rèn)為IgG亞類(lèi)測(cè)定比總IgG測(cè)定更有價(jià)值。IgA缺乏癥常伴有IgG2缺陷某些病毒感染時(shí)IgG1 、IgG2 、IgG3顯著下降腎病綜合征出現(xiàn)低IgG血癥時(shí)，IgG亞類(lèi)并非呈比例降低，以IgG1下

8、降為主，而IgG3代償性增高。糖尿病患者以IgG1下降為主IgG亞類(lèi)異常增高可見(jiàn)于型超敏反應(yīng)，如變應(yīng)原可刺激機(jī)體使IgG4含量增加。臨床意義IgGIgG4 4相關(guān)性相關(guān)性疾病疾病：是一組以血清IgG4水平升高、受累組織IgG4陽(yáng)性漿細(xì)胞浸潤(rùn)及纖維化為特征的疾病。該病可累及全身多個(gè)組織器官，受累器官因纖維化、慢性炎癥等出現(xiàn)增生腫大，從而導(dǎo)致相應(yīng)壓迫阻塞癥狀或功能障礙，其中胰腺、淚腺和涎腺的受累最為常見(jiàn)。三、尿液免疫球蛋白測(cè)定方法及臨床意義三、尿液免疫球蛋白測(cè)定方法及臨床意義測(cè)定方法單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)：臨床已基本不用。ELISA：臨床應(yīng)用較少。免疫散射比濁法：臨床廣泛應(yīng)用。測(cè)定方法選擇性蛋白尿指數(shù)（

9、selective proteinuria index，SPI）：同時(shí)測(cè)定尿液和血液中的轉(zhuǎn)鐵蛋白（transferrin，TF）及IgG的含量，以此來(lái)判斷尿液Ig測(cè)定的臨床意義。SPI計(jì)算公式：SPI=(尿IgG/血清IgG)/（尿TF/血清TF）。臨床意義當(dāng)SPI0.1時(shí)，表明腎臟高選擇性排泌分子量較小的蛋白質(zhì)：微小病變型腎病。當(dāng)SPI0.2時(shí)，表明腎臟是非選擇性排泌分子量較大的蛋白質(zhì)：膜性腎病、膜增殖性腎炎、腎病綜合征。臨床意義尿中IgG升高：原發(fā)性腎小球腎炎、慢性腎炎尿內(nèi)IgA： 原發(fā)性腎小球腎病和慢性腎炎腎?。汉孔罡?慢性腎炎高血壓型及普通型：輕度增高 隱匿性腎炎及急性腎炎：含量很少

10、尿內(nèi)IgM：慢性腎炎尿游離輕鏈：輕鏈病、多發(fā)性骨髓瘤等四、腦脊液免疫球蛋白測(cè)定方法及臨床意義四、腦脊液免疫球蛋白測(cè)定方法及臨床意義測(cè)定方法免疫散射比濁法：正常人腦脊液（CSF）免疫球蛋白含量低，故臨床應(yīng)用靈敏度高的免疫散射比濁法來(lái)測(cè)定CSF中免疫球蛋白。白蛋白商值：同時(shí)測(cè)定CSF和血液中的白蛋白（Alb）, 計(jì)算白蛋白商值（Alb quotient，QAlb）的大小來(lái)反映血腦屏障受損程度。 QAlb 計(jì)算公式： QAlb=(AlbCSF/ AlbS) 1000測(cè)定方法IgG生成指數(shù)（IgG index）：通過(guò)計(jì)算IgG生成指數(shù)來(lái)反應(yīng)CSF鞘內(nèi)免疫球蛋白合成。其計(jì)算公式為：IgG生成指數(shù)= (I

11、gGCSF/ AlbS)/(IgGS/ AlbCSF)臨床意義血液中免疫球蛋白通過(guò)血腦屏障的難易程度與免疫球蛋白分子量大小直接相關(guān)。IgG較易通過(guò)血腦屏障，而IgA略難，IgM更難。所以IgG、IgA、IgM在CSF中的含量依次遞減。當(dāng)腦組織或腦膜出現(xiàn)病變時(shí)，導(dǎo)致血腦屏障發(fā)生破壞，通透性增加，或自身病變組織產(chǎn)生的病理性產(chǎn)物進(jìn)入CSF，使CSF成分發(fā)生改變。臨床意義QAlb不僅可以檢測(cè)血腦屏障損傷的程度，還可以提示神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)生疾病的類(lèi)型。QAlb9：提示血腦屏障無(wú)明顯受損。QAlb 915：急慢性病毒感染、多發(fā)性硬化、神經(jīng)梅毒、帶狀皰疹性神經(jīng)節(jié)炎、腦萎縮等神經(jīng)系統(tǒng)疾病。QAlb 1533：急性神

12、經(jīng)疏螺旋體病、條件致病性腦膜炎、吉蘭-巴雷綜合征等。QAlb 33100：化膿性腦膜炎、單純皰疹性腦炎、結(jié)核性腦膜炎等嚴(yán)重細(xì)菌感染性疾病。QAlb 100為完全破裂。臨床意義當(dāng)IgG生成指數(shù)升高時(shí)，表明CSF中的IgG主要由中樞神經(jīng)系統(tǒng)鞘內(nèi)合成。IgG生成指數(shù)升高多見(jiàn)于多發(fā)性硬化癥。CSF中IgG增高：腦血栓、蛛網(wǎng)膜下腔出血、系統(tǒng)性紅斑狼瘡腦病、神經(jīng)梅毒、重癥肌無(wú)力等。CSF中IgG、IgA均增高：化膿性腦膜炎及結(jié)核性腦膜炎。CSF中IgA和IgM升高：神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤。CSF中IgG和IgM明顯升高：精神分裂癥。第三節(jié)第三節(jié) 血液血液IgEIgE和和IgDIgD測(cè)定方法及臨床意義測(cè)定方法及臨床意

13、義重點(diǎn)提示血液IgE檢測(cè)方法血液IgE檢測(cè)的臨床意義血液IgE水平的影響因素一、血液一、血液IgE測(cè)定方法及臨床意義測(cè)定方法及臨床意義測(cè)定方法ELISA熒光酶免疫試驗(yàn)（FEIA）化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)（CLIA） 三種方法在臨床均常用。相比ELISA，F(xiàn)EIA 和CLIA因檢測(cè)速度快，自動(dòng)化程度高等優(yōu)點(diǎn)在臨床應(yīng)用更為廣泛。臨床意義型超敏反應(yīng)：血清IgE升高。嬰兒 ：高水平的IgE預(yù)測(cè)未來(lái)有超敏反應(yīng)的可能寄生蟲(chóng)病 ：IgE水平明顯升高。某些非超敏反應(yīng)：IgE水平升高還可見(jiàn)于其它一些非超敏反應(yīng)，如感染性疾病、IgE型骨髓瘤、高IgE綜合征、嗜酸性粒細(xì)胞增多癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等。其它：原發(fā)性

14、無(wú)丙種球蛋白血癥、腫瘤及化療藥物應(yīng)用后IgE可下降。臨床意義影響IgE水平的因素：年齡：新生兒IgE水平非常低，隨著年齡的增長(zhǎng)，IgE的水平隨之增高，學(xué)齡前兒童IgE可接近成人水平，青春期水平最高，30歲后逐漸下降，老年人IgE水平處于較低的水平，這可能與老年人Th細(xì)胞功能低下，Ts細(xì)胞功能相對(duì)較高有關(guān)。性別：男性高于女性，其機(jī)制尚不清楚。種族：混血人種的IgE比白人高34倍，黑人水平更高，黃種人水平也較高。這可能受遺傳的影響。二、血液二、血液IgD測(cè)定方法及臨床應(yīng)用測(cè)定方法及臨床應(yīng)用因IgD生物學(xué)功能尚不清楚，血液IgD定量檢測(cè)臨床基本不做。血液IgD的定性檢測(cè)有免疫固定電泳等，見(jiàn)第二十四章

15、。血液中IgD升高主要見(jiàn)于IgD型骨髓瘤等免疫增值性疾病。第四節(jié)第四節(jié) 冷球蛋白冷球蛋白測(cè)定及臨床意義測(cè)定及臨床意義重點(diǎn)提示冷球蛋白的特點(diǎn)冷球蛋白檢測(cè)流程保溫的重要性冷球蛋白分型的意義測(cè)定方法冷球蛋白的測(cè)定方法有兩種：定性測(cè)定：血細(xì)胞比容管法定量測(cè)定：分光光度法在冷球蛋白的測(cè)定中樣本采集及處理的保溫過(guò)程是保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確的關(guān)鍵。臨床意義冷球蛋白可分為型、型、型，各型具有不同的臨床意義。型：為單克隆冷球蛋白，由IgM、IgG、IgA或本-周蛋白組成，大約25%的冷球蛋白屬于此類(lèi)型。臨床上多見(jiàn)于多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、淋巴瘤、慢性淋巴細(xì)胞白血病等疾病。臨床意義冷球蛋白可分為型、型、型，各型具有

16、不同的臨床意義。型：為單克隆混合冷球蛋白，由單克隆免疫球蛋白和自身IgG組成，分為IgM-IgG、IgG-IgG、IgA-IgG，大約25%的冷球蛋白屬于此類(lèi)型。臨床上見(jiàn)于類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、血管炎、干燥綜合征等疾病。臨床意義冷球蛋白可分為型、型、型，各型具有不同的臨床意義。型：為多克隆混合冷球蛋白，由兩類(lèi)或兩類(lèi)以上的多克隆免疫球蛋白組成，即抗原和抗體都是多克隆的，大約50%的冷球蛋白屬于此類(lèi)型。臨床上見(jiàn)于傳染性單核細(xì)胞增多癥、急性病毒性肝炎、鏈球菌感染后腎小球腎炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化、感染性心內(nèi)膜炎等疾病。本章小結(jié)免疫球蛋白具有明顯的異質(zhì)性，不僅可分為五類(lèi)和兩型，而且包含多種亞類(lèi)；免疫球蛋白血清型有同種型、同種異型和獨(dú)特型；免疫球蛋白功能與其結(jié)構(gòu)密切相關(guān)；五類(lèi)免疫球蛋白具有各自不同的生物學(xué)功能。本章小結(jié)IgG亞類(lèi)測(cè)定對(duì)研究免疫缺陷病、超敏反應(yīng)和IgG4相關(guān)性疾病有重要價(jià)