臨床全自動生化儀課件

1、臨床自動生化分析儀檢驗醫(yī)學(xué)專業(yè)檢驗醫(yī)學(xué)專業(yè) 教學(xué)目標(biāo)和要求教學(xué)目標(biāo)和要求掌握掌握自動生化分析儀的分析方法類型及其自動生化分析儀的分析方法類型及其 特點，連續(xù)監(jiān)測法的理論特點，連續(xù)監(jiān)測法的理論K值，必選的分析參值，必選的分析參數(shù)，雙波長測定的作用，雙試劑的優(yōu)點，分析數(shù)，雙波長測定的作用，雙試劑的優(yōu)點，分析儀與手工法比較的優(yōu)點和缺點。儀與手工法比較的優(yōu)點和缺點。熟悉熟悉分立式自動生化分析儀的基本結(jié)構(gòu)，備分立式自動生化分析儀的基本結(jié)構(gòu)，備選的分析參數(shù)，測定過程的自動監(jiān)測，校準(zhǔn)方選的分析參數(shù)，測定過程的自動監(jiān)測，校準(zhǔn)方式和校準(zhǔn)要求，影響分析儀分析速度的因素和式和校準(zhǔn)要求，影響分析儀分析速度的因素和分析

2、儀性能指標(biāo)。分析儀性能指標(biāo)。了解了解某些分析參數(shù)的特殊意義，分析儀的工某些分析參數(shù)的特殊意義，分析儀的工作過程和操作方法，干片式分析儀的結(jié)構(gòu)和分作過程和操作方法，干片式分析儀的結(jié)構(gòu)和分析原理，常用分析儀的分析性能。析原理，常用分析儀的分析性能。 自動生化分析儀自動生化分析儀由電腦控制，將生化由電腦控制，將生化分析中的取樣分析中的取樣(sampling)(sampling)、加試劑、混勻、加試劑、混勻、保溫反應(yīng)、檢測保溫反應(yīng)、檢測(detect)(detect)、結(jié)果計算、可、結(jié)果計算、可靠性判斷、顯示和打印、以及清洗靠性判斷、顯示和打印、以及清洗(cleaning)(cleaning)等步驟組

3、合在一起自動進行操等步驟組合在一起自動進行操作的分析儀器。作的分析儀器。 自動生化分析技術(shù)的應(yīng)用自動生化分析技術(shù)的應(yīng)用提高了臨床生化檢驗質(zhì)量和速度；提高了臨床生化檢驗質(zhì)量和速度；減輕檢驗人員的勞動強度；減輕檢驗人員的勞動強度；節(jié)約樣品和試劑；節(jié)約樣品和試劑；增加檢驗項目；增加檢驗項目；提高檢測精密度，減少實驗誤差；提高檢測精密度，減少實驗誤差；并且有利于臨床檢驗標(biāo)準(zhǔn)化的實現(xiàn)并且有利于臨床檢驗標(biāo)準(zhǔn)化的實現(xiàn)。不足：溫度、試劑、反應(yīng)時間、加樣不足：溫度、試劑、反應(yīng)時間、加樣 連續(xù)流動式連續(xù)流動式(continuous(continuousstreaming streaming movementmov

4、ementstyle)style)或管道式：已很少用或管道式：已很少用 離心式離心式(centrifugation style) (centrifugation style) ：已很少用：已很少用 分立式分立式(discrete(discretestyle)style)：應(yīng)用最廣泛：應(yīng)用最廣泛 干片技術(shù)干片技術(shù)(drying style) (drying style) ：急診多用：急診多用 完全完全模仿手工操作模仿手工操作方式設(shè)計，各部分結(jié)方式設(shè)計，各部分結(jié)構(gòu)對應(yīng)手工操作的每個步驟包括取樣、加試劑、構(gòu)對應(yīng)手工操作的每個步驟包括取樣、加試劑、混勻、孵育、檢測、結(jié)果計算、器材清洗等混勻、孵育、檢測

5、、結(jié)果計算、器材清洗等 。（一）樣品盤或樣品架（一）樣品盤或樣品架 樣品盤樣品盤（specimen discspecimen disc）：放置待測樣品）：放置待測樣品的轉(zhuǎn)盤，可放置一定數(shù)量的的轉(zhuǎn)盤，可放置一定數(shù)量的樣品杯（樣品杯（specimen cupspecimen cup）或不同規(guī)格的或不同規(guī)格的采血試管采血試管，通過樣品盤的轉(zhuǎn)動來控制通過樣品盤的轉(zhuǎn)動來控制不同樣品的進樣。不同樣品的進樣。 樣品架樣品架（specimen stockspecimen stock）：每個樣品）：每個樣品架可放數(shù)只樣品杯或采血試管（多為架可放數(shù)只樣品杯或采血試管（多為5 5只或只或1010只）。樣品架的移動通

6、過只）。樣品架的移動通過樣品傳送帶樣品傳送帶來進行。來進行。樣品架樣品架 上上 的的 條形碼條形碼（barcodebarcode）或編碼孔）或編碼孔可識別樣品可識別樣品架號架號及樣品及樣品位置號位置號。 隨著樣品架移動及樣品的被檢測，可不隨著樣品架移動及樣品的被檢測，可不斷追加已放置樣品杯或采血試管的樣品斷追加已放置樣品杯或采血試管的樣品架；架；通過樣品架的通過樣品架的移動能將樣品傳移動能將樣品傳送到另一個送到另一個分析分析模塊模塊（analysisanalysisdie-blockdie-block）甚至）甚至另一臺分析儀上另一臺分析儀上再進行分析。再進行分析。 轉(zhuǎn)盤式試劑室轉(zhuǎn)盤式試劑室（r

7、eagent chamberreagent chamber）：內(nèi)）：內(nèi)裝放置試劑瓶的轉(zhuǎn)盤，一般可放置裝放置試劑瓶的轉(zhuǎn)盤，一般可放置2020種以上具種以上具有一定形狀的塑料試劑瓶，大型分析儀可放置有一定形狀的塑料試劑瓶，大型分析儀可放置30304545種試劑瓶。種試劑瓶。 試劑瓶容量試劑瓶容量一般為一般為1010100ml100ml。通過試劑轉(zhuǎn)盤的通過試劑轉(zhuǎn)盤的轉(zhuǎn)動來選用不同轉(zhuǎn)動來選用不同試劑。試劑。 試劑架式試劑室試劑架式試劑室：可放置容量為：可放置容量為250ml250ml500ml500ml的不同形狀的試劑瓶，試劑瓶不能轉(zhuǎn)動，的不同形狀的試劑瓶，試劑瓶不能轉(zhuǎn)動，但每個試劑瓶內(nèi)引出一條但每個

8、試劑瓶內(nèi)引出一條試劑管路試劑管路及其噴嘴，及其噴嘴，即每種試劑均有專用的加試劑裝置，因而不同即每種試劑均有專用的加試劑裝置，因而不同試劑間無試劑間無交叉污染交叉污染。 但試劑管路較長使試劑存在一定的死體積，但試劑管路較長使試劑存在一定的死體積，因而適宜用于使用頻率高、消耗試劑量大的檢因而適宜用于使用頻率高、消耗試劑量大的檢測項目。測項目。 大型分析儀同時備有大型分析儀同時備有第一試劑室第一試劑室和和第二試第二試劑室劑室，即具備對同一檢測項目添加兩次試劑的，即具備對同一檢測項目添加兩次試劑的功能，個別分析儀還具有加入第三試劑的功能。功能，個別分析儀還具有加入第三試劑的功能。 對有條形碼裝置的儀器

9、可將帶條形碼的試對有條形碼裝置的儀器可將帶條形碼的試劑瓶放在試劑室轉(zhuǎn)盤劑瓶放在試劑室轉(zhuǎn)盤上的任意位置，儀上的任意位置，儀器能自動識別試劑器能自動識別試劑的種類、批號和有的種類、批號和有效期。試劑室均具效期。試劑室均具有有冷藏裝置冷藏裝置，可將，可將試劑保存在試劑保存在4 41010。 反應(yīng)杯反應(yīng)杯（reaction reaction cupcup）是樣品與試劑進行化）是樣品與試劑進行化學(xué)反應(yīng)的場所，同時用作學(xué)反應(yīng)的場所，同時用作比色杯。由透光特性好的比色杯。由透光特性好的硬塑料或石英玻璃制成。硬塑料或石英玻璃制成。比色杯光徑不同分析儀有比色杯光徑不同分析儀有0.50.50.70.7厘米不等，大

10、多厘米不等，大多數(shù)分析儀在計算時將其折數(shù)分析儀在計算時將其折算為算為1 1厘米光徑。厘米光徑。 反應(yīng)盤反應(yīng)盤（reaction discreaction disc）：）：100100只只或更多的反應(yīng)杯圍成一圈組成。在測定或更多的反應(yīng)杯圍成一圈組成。在測定過程中反應(yīng)盤作恒速的圓周運動，在靜過程中反應(yīng)盤作恒速的圓周運動，在靜止時向反應(yīng)杯中加入樣品、試劑或進行止時向反應(yīng)杯中加入樣品、試劑或進行攪拌混勻，當(dāng)反應(yīng)盤恒速圓周運動經(jīng)過攪拌混勻，當(dāng)反應(yīng)盤恒速圓周運動經(jīng)過檢測窗口的比色杯可進行吸光度檢測。檢測窗口的比色杯可進行吸光度檢測。1 1取樣裝置取樣裝置（sampling sampling assembl

11、yassembly）：）： 由取樣針、取樣臂、取樣管路、取樣注射由取樣針、取樣臂、取樣管路、取樣注射器和閥門組成，能定量器和閥門組成，能定量吸取樣品并加入到反吸取樣品并加入到反應(yīng)杯。應(yīng)杯。 不同分析儀的取樣不同分析儀的取樣容量有不同的范圍，容量有不同的范圍，一般為一般為2 235l35l，步，步進進0.10.1微升不等。微升不等。 取樣針設(shè)有電子取樣針設(shè)有電子液面感應(yīng)器液面感應(yīng)器，取樣針，取樣針于樣品上方下降，一于樣品上方下降，一旦接觸到樣品液面即旦接觸到樣品液面即停止下降而開始吸樣。停止下降而開始吸樣。適用于不同的采血試適用于不同的采血試管上機測定。管上機測定。 多數(shù)加樣裝置設(shè)有多數(shù)加樣裝置

12、設(shè)有防撞功能防撞功能，遇到，遇到阻礙時取樣針立即停止運動并報警。某些阻礙時取樣針立即停止運動并報警。某些取樣針還設(shè)有取樣針還設(shè)有阻塞報警功能阻塞報警功能，當(dāng)取樣針被，當(dāng)取樣針被樣品中的凝塊、纖維蛋白等物質(zhì)阻塞時，樣品中的凝塊、纖維蛋白等物質(zhì)阻塞時，機器會自動報警、沖洗取樣針，并跳過當(dāng)機器會自動報警、沖洗取樣針，并跳過當(dāng)前樣品，進行下一個樣品的取樣檢測前樣品，進行下一個樣品的取樣檢測。 絕大多數(shù)采用絕大多數(shù)采用水洗方式水洗方式（又有瀑布式和（又有瀑布式和涌泉式之分），在吸取另一個樣品前對接觸涌泉式之分），在吸取另一個樣品前對接觸樣品的樣品針內(nèi)外壁進行沖洗；樣品的樣品針內(nèi)外壁進行沖洗； 也有采用也

13、有采用化學(xué)惰性液化學(xué)惰性液（chemical chemical inertiainertiafluidfluid）膜的方式來隔絕樣品與取）膜的方式來隔絕樣品與取樣針內(nèi)外壁之間的接觸。樣針內(nèi)外壁之間的接觸。 加試劑裝置用于定量吸取試劑加入反應(yīng)杯，加試劑裝置用于定量吸取試劑加入反應(yīng)杯，可加入試劑容量一般為可加入試劑容量一般為2020350l350l。步進。步進1 15 5微升不等，取樣精度在微升不等，取樣精度在1 1微升左右。微升左右。 注射器方式注射器方式：組成部件與取樣裝置類似，：組成部件與取樣裝置類似，其液面感應(yīng)系統(tǒng)能檢測并提示其液面感應(yīng)系統(tǒng)能檢測并提示試劑剩余量試劑剩余量。 灌注式灌注式：

14、具有許多條試劑管路及其噴嘴，：具有許多條試劑管路及其噴嘴，每種試劑單獨使用一條試劑管路和噴嘴，不存每種試劑單獨使用一條試劑管路和噴嘴，不存在各試劑間的交叉污染。在各試劑間的交叉污染。 大型自動生化儀多具有兩組加試劑裝大型自動生化儀多具有兩組加試劑裝置，可分別從兩個試劑室吸取同一個檢測項置，可分別從兩個試劑室吸取同一個檢測項目的目的第一試劑第一試劑和和第二試劑第二試劑，大多數(shù)分析儀所，大多數(shù)分析儀所有檢測項目加入第二試劑的時間點統(tǒng)一固定有檢測項目加入第二試劑的時間點統(tǒng)一固定為為1 1個或個或2 2個點，也有分析儀有個點，也有分析儀有3 3個加入時間個加入時間點可供選擇。點可供選擇。 反應(yīng)杯里的樣

15、品與試劑通過反應(yīng)杯里的樣品與試劑通過攪拌棒攪拌棒攪拌攪拌而充分混勻，攪拌棒的形狀為扁平棒狀或扁而充分混勻，攪拌棒的形狀為扁平棒狀或扁平螺旋狀，表面的疏水材料能防止反應(yīng)液被平螺旋狀，表面的疏水材料能防止反應(yīng)液被攪拌棒所攜帶。其工作方式大多為攪拌棒所攜帶。其工作方式大多為旋轉(zhuǎn)式攪旋轉(zhuǎn)式攪拌拌，也有，也有震動式攪拌震動式攪拌方式。也設(shè)置了防止攪方式。也設(shè)置了防止攪拌棒在不同反應(yīng)液之間攜帶交叉污染的清洗拌棒在不同反應(yīng)液之間攜帶交叉污染的清洗措施。措施。 溫控系統(tǒng)溫控系統(tǒng)使反應(yīng)杯浸浴在恒溫環(huán)境：使反應(yīng)杯浸浴在恒溫環(huán)境： 恒溫恒溫循環(huán)水浴方式循環(huán)水浴方式：溫度傳遞速度快，保：溫度傳遞速度快，保養(yǎng)要求較高。

16、養(yǎng)要求較高。 恒溫恒溫空氣浴方式空氣浴方式：溫度傳遞速度不如恒溫：溫度傳遞速度不如恒溫水浴循環(huán)方式，保養(yǎng)簡單。水浴循環(huán)方式，保養(yǎng)簡單。 溫度控制器能使循環(huán)水或循環(huán)空氣的溫度溫度控制器能使循環(huán)水或循環(huán)空氣的溫度控制在規(guī)定溫度控制在規(guī)定溫度0.10.1。規(guī)定溫度可有。規(guī)定溫度可有3737和和3030兩種選擇，一般固定在兩種選擇，一般固定在3737。 定時系統(tǒng)定時系統(tǒng)： 不同分析儀對檢測吸光度的不同分析儀對檢測吸光度的間隔時間間隔時間有不同的規(guī)定，有不同的規(guī)定，反應(yīng)時間反應(yīng)時間應(yīng)該設(shè)定為此應(yīng)該設(shè)定為此間隔時間的倍數(shù)?？偡磻?yīng)時間一般限制間隔時間的倍數(shù)?？偡磻?yīng)時間一般限制在在8.5-10min8.5-1

17、0min內(nèi)，個別分析儀可以設(shè)定為內(nèi)，個別分析儀可以設(shè)定為1515或或22min22min等。等。 自動生化分析儀以自動生化分析儀以紫外可見分光光紫外可見分光光度法度法為其中心和主要的檢測手段，與一為其中心和主要的檢測手段，與一般分光光度計一樣，其光路和檢測系統(tǒng)般分光光度計一樣，其光路和檢測系統(tǒng)由由光源光源、單色器單色器和和檢測器檢測器組成。組成。 一般為一般為鹵素鎢絲燈鹵素鎢絲燈（halogenhalogentungsten filamenttungsten filamentlamplamp），也有采），也有采用長壽命的用長壽命的氙燈氙燈（xe lampxe lamp），要求在），要求在340

18、340800nm800nm波長范圍內(nèi)能發(fā)射出穩(wěn)定且波長范圍內(nèi)能發(fā)射出穩(wěn)定且較平坦的光能。較平坦的光能。 干涉濾光片干涉濾光片（interference filterinterference filter）分）分光系統(tǒng)：常帶有光系統(tǒng)：常帶有340340、380380、405405、500500、550550、600600、660nm660nm等幾種濾光片，各濾光片固定在等幾種濾光片，各濾光片固定在轉(zhuǎn)盤上，以轉(zhuǎn)盤上，以轉(zhuǎn)盤旋轉(zhuǎn)的方式來選擇波長轉(zhuǎn)盤旋轉(zhuǎn)的方式來選擇波長。這。這種分光系統(tǒng)在半自動和小型自動分析儀中常種分光系統(tǒng)在半自動和小型自動分析儀中常用，且不能同一時刻進行多波長檢測。用，且不能同一時

19、刻進行多波長檢測。 光柵光柵（rasterraster）分光系統(tǒng)：常在）分光系統(tǒng)：常在340340（或（或293293）800nm800nm范圍內(nèi)選擇范圍內(nèi)選擇10101313種固定的單種固定的單色光。色光。 光柵分光有前分光和后分光兩種方式，光柵分光有前分光和后分光兩種方式，光源首先經(jīng)過單色器分光，然后透射到比光源首先經(jīng)過單色器分光，然后透射到比色溶液的方式為色溶液的方式為前分光前分光。目前以后分光方。目前以后分光方式為多見，其優(yōu)點是單色器中沒有轉(zhuǎn)動部式為多見，其優(yōu)點是單色器中沒有轉(zhuǎn)動部分，雙波長在同一時刻檢測，因而提高了分，雙波長在同一時刻檢測，因而提高了檢測的精度和速度。檢測的精度和速度

20、。 光源先透過比色杯中的反應(yīng)液再照射光源先透過比色杯中的反應(yīng)液再照射到光柵上，經(jīng)色散后所有固定單色光同時通到光柵上，經(jīng)色散后所有固定單色光同時通過各自的光纖傳輸?shù)綄?yīng)的檢測器，微處理過各自的光纖傳輸?shù)綄?yīng)的檢測器，微處理器按該分析項目的分析參數(shù)，器按該分析項目的分析參數(shù)， 選擇其中選擇其中一個或兩個波一個或兩個波長（雙波長方長（雙波長方式）的吸光度式）的吸光度值，用于分析值，用于分析結(jié)果的計算。結(jié)果的計算。 由光敏二極管及放大電路組成，可按設(shè)由光敏二極管及放大電路組成，可按設(shè)定的間隔時間連續(xù)測定各反應(yīng)杯的吸光度定的間隔時間連續(xù)測定各反應(yīng)杯的吸光度值。值。 具有多種數(shù)據(jù)處理功能。具有多種數(shù)據(jù)處理

21、功能。 計算測定結(jié)果計算測定結(jié)果 判斷結(jié)果準(zhǔn)確性判斷結(jié)果準(zhǔn)確性 保存各種數(shù)據(jù)保存各種數(shù)據(jù) 自我診斷功能自我診斷功能 反應(yīng)杯反應(yīng)杯清洗裝置清洗裝置：一個反應(yīng)杯內(nèi)的反應(yīng)和檢：一個反應(yīng)杯內(nèi)的反應(yīng)和檢測結(jié)束后，該反應(yīng)杯就被沖洗系統(tǒng)及時沖洗。測結(jié)束后，該反應(yīng)杯就被沖洗系統(tǒng)及時沖洗。 清洗過程：由廢液針吸取反應(yīng)杯內(nèi)廢液，加清洗過程：由廢液針吸取反應(yīng)杯內(nèi)廢液，加入入清洗劑清洗劑（detergentdetergent）沖洗并抽干后，再經(jīng)數(shù)）沖洗并抽干后，再經(jīng)數(shù)次去離子水沖洗及抽干，然后做次去離子水沖洗及抽干，然后做杯空白杯空白的吸光度的吸光度檢查，若通過檢查則此反應(yīng)杯可繼續(xù)循環(huán)使用；檢查，若通過檢查則此反應(yīng)杯

22、可繼續(xù)循環(huán)使用；更高級的儀器帶有風(fēng)干技術(shù)。如果不能通過，分更高級的儀器帶有風(fēng)干技術(shù)。如果不能通過，分析儀將提示該反應(yīng)杯異常，并跳過此反應(yīng)杯使用析儀將提示該反應(yīng)杯異常，并跳過此反應(yīng)杯使用下一個反應(yīng)杯，或提示更換反應(yīng)杯。下一個反應(yīng)杯，或提示更換反應(yīng)杯。 一般在用于下一個樣品、試劑或反應(yīng)杯一般在用于下一個樣品、試劑或反應(yīng)杯前即清洗一次，此時多數(shù)為去離子水沖洗，前即清洗一次，此時多數(shù)為去離子水沖洗，在一批檢測完成后，則自動進行清洗劑清洗。在一批檢測完成后，則自動進行清洗劑清洗。 清洗劑可配有清洗劑可配有1 1至至3 3種可供選擇，除一種種可供選擇，除一種常規(guī)清洗劑外，其它常規(guī)清洗劑外，其它1 1至至2

23、 2種可按設(shè)定對試劑種可按設(shè)定對試劑針、樣品針或反應(yīng)杯進行補充清洗。針、樣品針或反應(yīng)杯進行補充清洗。 （一）（一）組合式自動生化分析儀組合式自動生化分析儀 將相同或不同的兩臺或兩臺以上的分析部分，將相同或不同的兩臺或兩臺以上的分析部分，即即分析模塊分析模塊進行組合連接，采用樣品架方式使樣品進行組合連接，采用樣品架方式使樣品通過傳輸線在不同分析模塊間進行傳遞并檢測。各通過傳輸線在不同分析模塊間進行傳遞并檢測。各分析模塊所分析項目的組合提高了分析效率，這些分析模塊所分析項目的組合提高了分析效率，這些分析模塊除了基于紫外分析模塊除了基于紫外- -可見光譜分析原理的分析可見光譜分析原理的分析模塊外，還

24、有基于模塊外，還有基于離子選擇電極離子選擇電極的電解質(zhì)分析模塊，的電解質(zhì)分析模塊，甚至還可組合建立在甚至還可組合建立在免疫發(fā)光免疫發(fā)光分析原理的免疫分析分析原理的免疫分析模塊。模塊。 組合式分析儀組合式分析儀i2000SRImmunoassay Modulec8000Clinical Chemistry Moduleci8200ImmunoChemistry Integration 包括包括樣品前處理系統(tǒng)樣品前處理系統(tǒng)、樣品輸送系統(tǒng)樣品輸送系統(tǒng)和和各樣品各樣品分析系統(tǒng)分析系統(tǒng)。不同功能的各模塊以同一標(biāo)準(zhǔn)來連接，。不同功能的各模塊以同一標(biāo)準(zhǔn)來連接，通過計算機控制運行。隨著檢測樣品量的增加，只通過

25、計算機控制運行。隨著檢測樣品量的增加，只需添加需要的新模塊，將其安裝連接，即可擴大處需添加需要的新模塊，將其安裝連接，即可擴大處理能力。這樣可避免同類硬件和功能的重復(fù)投資，理能力。這樣可避免同類硬件和功能的重復(fù)投資，節(jié)省占地面積所需的基礎(chǔ)投入。當(dāng)一模塊發(fā)生故障節(jié)省占地面積所需的基礎(chǔ)投入。當(dāng)一模塊發(fā)生故障時，其余模塊仍在運行，在時，其余模塊仍在運行，在2424小時內(nèi)任意時間對模小時內(nèi)任意時間對模塊進行交替保養(yǎng)維護，不影響日常工作。塊進行交替保養(yǎng)維護，不影響日常工作。 能獨立工作，由樣品投入部、離心分離部、能獨立工作，由樣品投入部、離心分離部、開栓部、在線分注部、非在線分注部、貼條碼部、開栓部、在

26、線分注部、非在線分注部、貼條碼部、蓋栓部、樣品分注收存部、樣品接收部等模塊構(gòu)蓋栓部、樣品分注收存部、樣品接收部等模塊構(gòu)成前處理系統(tǒng)，每一模塊既是系統(tǒng)的部分，又是成前處理系統(tǒng)，每一模塊既是系統(tǒng)的部分，又是獨立的單元，可根據(jù)不同需要選擇使用，具有靈獨立的單元，可根據(jù)不同需要選擇使用，具有靈活性和擴展性?；钚院蛿U展性。 也可通過樣品輸送部分與樣品分析系統(tǒng)連接，也可通過樣品輸送部分與樣品分析系統(tǒng)連接，組成類似工業(yè)領(lǐng)域的生產(chǎn)流水線，從而實現(xiàn)了從組成類似工業(yè)領(lǐng)域的生產(chǎn)流水線，從而實現(xiàn)了從采血到報告的實驗室的全自動化。采血到報告的實驗室的全自動化。 一、分析方法分類一、分析方法分類（一）（一）終點法終點法（

27、end assay） 被測物質(zhì)在反應(yīng)過程中完全被轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)被測物質(zhì)在反應(yīng)過程中完全被轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物，到達反應(yīng)終點，根據(jù)終點吸光度的大小物，到達反應(yīng)終點，根據(jù)終點吸光度的大小求出被測物濃度，稱為終點法。該法稱為平求出被測物濃度，稱為終點法。該法稱為平衡法更為恰當(dāng)。從衡法更為恰當(dāng)。從時間時間- -吸光度曲線吸光度曲線來看，到來看，到達反應(yīng)終點或平衡點時，吸光度將不再變化。達反應(yīng)終點或平衡點時，吸光度將不再變化。終點法參數(shù)設(shè)置簡單，反應(yīng)時間一般較長，終點法參數(shù)設(shè)置簡單，反應(yīng)時間一般較長，精密度較好。精密度較好。 根據(jù)時間根據(jù)時間- -吸光度曲線來確定，吸光度曲線來確定，根據(jù)被測物反應(yīng)終點，結(jié)合干擾物的根據(jù)

28、被測物反應(yīng)終點，結(jié)合干擾物的反應(yīng)情況來確定。反應(yīng)情況來確定。 在反應(yīng)到達終點，即在時間在反應(yīng)到達終點，即在時間- -吸光度曲線吸光度曲線上吸光度不再改變時選擇一個終點吸光度上吸光度不再改變時選擇一個終點吸光度值，用于計算結(jié)果。值，用于計算結(jié)果。結(jié)果計算公式：待測物濃度結(jié)果計算公式：待測物濃度C CU U= =（待測吸光度（待測吸光度A AU U試劑空白吸光度試劑空白吸光度A AB B）K KK K為校準(zhǔn)系數(shù)為校準(zhǔn)系數(shù) A單試劑一點終點法 B雙試劑一點終點法 在被測物反應(yīng)或指示反應(yīng)尚未開始時，選在被測物反應(yīng)或指示反應(yīng)尚未開始時，選擇第一個吸光度，在反應(yīng)到達終點或平衡時擇第一個吸光度，在反應(yīng)到達終

29、點或平衡時選擇第二個吸光度，此兩點吸光度之差用于選擇第二個吸光度，此兩點吸光度之差用于計算結(jié)果。計算結(jié)果。 計算公式為：計算公式為： C CU U= =（待測吸光度（待測吸光度A A2 2待測吸光度待測吸光度A A1 1）K K。 A單試劑兩點終點法 B雙試劑兩點終點法 該法能有效地消該法能有效地消除溶血除溶血(hemolysis)(hemolysis)、黃疸（黃疸（icterusicterus）和）和脂濁（脂濁（lipo-turbidlipo-turbid）等樣品本身光吸收等樣品本身光吸收造成的干擾。造成的干擾。 指在時間指在時間- -吸光度曲線上選擇兩個測光吸光度曲線上選擇兩個測光點，此兩

30、點既非反應(yīng)初始吸光度亦非終點點，此兩點既非反應(yīng)初始吸光度亦非終點吸光度，這兩點的吸光度差值用于結(jié)果計吸光度，這兩點的吸光度差值用于結(jié)果計算。有時也稱此法為兩點法算。有時也稱此法為兩點法 。 計算公式與兩點終點法相同，計算公式與兩點終點法相同， C CU U=(A=(A2 2-A-A1 1) )K K。 A單試劑固定時間法 B雙試劑固定時間法該分析方法有助于解決某些反應(yīng)的非特異性問題。該分析方法有助于解決某些反應(yīng)的非特異性問題。 又稱又稱速率法速率法（rate assayrate assay），是在測定），是在測定酶活性或用酶法測定代謝產(chǎn)物時，連續(xù)選酶活性或用酶法測定代謝產(chǎn)物時，連續(xù)選取時間取時

31、間- -吸光度曲線中線性期（各兩點間吸光度曲線中線性期（各兩點間吸光度差值相等）的吸光度值，并以此線吸光度差值相等）的吸光度值，并以此線性期的單位吸光度變化值（性期的單位吸光度變化值（A/minA/min）計）計算結(jié)果。算結(jié)果。A單試劑連續(xù)監(jiān)測法 B雙試劑連續(xù)監(jiān)測法 1 1及及5 5值偏小，而值偏小，而2 23 34 4，故，故A A1 1點至點至A A4 4點屬線性點屬線性段段 可以確定線性期并計算可以確定線性期并計算A/minA/min，根據(jù)此值，根據(jù)此值再準(zhǔn)確地計算酶活性，因而使自動生化分析儀再準(zhǔn)確地計算酶活性，因而使自動生化分析儀在酶活性測定方面顯著地優(yōu)于手工法。連續(xù)監(jiān)在酶活性測定方面

32、顯著地優(yōu)于手工法。連續(xù)監(jiān)測法也可用于測定呈線性反應(yīng)的代謝物濃度，測法也可用于測定呈線性反應(yīng)的代謝物濃度，一般是某些基于酶法測定的代謝物。一般是某些基于酶法測定的代謝物。 酶活性（酶活性（U/LU/L） A/minA/min理論（或校準(zhǔn)）理論（或校準(zhǔn)）K K值。值。 代謝物濃度代謝物濃度C CU U=A/min=A/min校準(zhǔn)校準(zhǔn)K K值。值。 多用于酶活性測定中，因酶活性尚無公多用于酶活性測定中，因酶活性尚無公認(rèn)的校準(zhǔn)品可用。根據(jù)酶活性的國際單位定認(rèn)的校準(zhǔn)品可用。根據(jù)酶活性的國際單位定義得出酶活性的計算公式為：義得出酶活性的計算公式為：酶活性酶活性 (U/L)=A/min(U/L)=A/min

33、將此式中將此式中 以以K K來表示，即為：來表示，即為：理論理論K K值值- -可作為分析參數(shù)輸入到分析儀中?？勺鳛榉治鰠?shù)輸入到分析儀中。 dSTTV310dSTTV310 應(yīng)當(dāng)是樣品和試劑的加量準(zhǔn)確、比色應(yīng)當(dāng)是樣品和試劑的加量準(zhǔn)確、比色杯光徑準(zhǔn)確、溫度控制精確以及波長準(zhǔn)確杯光徑準(zhǔn)確、溫度控制精確以及波長準(zhǔn)確等。但事實上由于各型分析儀在注射器容等。但事實上由于各型分析儀在注射器容積步進電機精度、濾光片帶寬等方面的差積步進電機精度、濾光片帶寬等方面的差異，可造成樣品和試劑加量以及吸光度檢異，可造成樣品和試劑加量以及吸光度檢測的偏差，溫度的影響有時也非常大。測的偏差，溫度的影響有時也非常大。 由

34、于由于摩爾吸光系數(shù)摩爾吸光系數(shù)受比色杯光徑、波受比色杯光徑、波長等的影響，書本上或試劑廠家提供的理長等的影響，書本上或試劑廠家提供的理論摩爾吸光系數(shù)可能與實際所用分析儀所論摩爾吸光系數(shù)可能與實際所用分析儀所測的不同，因而有必要獲得實際的摩爾吸測的不同，因而有必要獲得實際的摩爾吸光系數(shù)，然后來計算理論光系數(shù)，然后來計算理論K K值。值。 NADH NADH（NADPHNADPH）沒有標(biāo)準(zhǔn)純制品，）沒有標(biāo)準(zhǔn)純制品，而且配成溶液后穩(wěn)定性又較差，不能直而且配成溶液后穩(wěn)定性又較差，不能直接用接用NADH NADH 或或NADPHNADPH標(biāo)準(zhǔn)液來校正儀器，標(biāo)準(zhǔn)液來校正儀器，須通過有須通過有NADNAD+

35、 +(NADP(NADP+ +) )參與的反應(yīng)途徑。參與的反應(yīng)途徑。 用已糖激酶用已糖激酶 (HK)(HK)或葡萄糖脫氫酶或葡萄糖脫氫酶(GD)(GD)方法方法測定葡萄糖時，葡萄糖的消耗與測定葡萄糖時，葡萄糖的消耗與NADHNADH的生成的生成呈等摩爾關(guān)系。葡萄糖有標(biāo)準(zhǔn)純制品。呈等摩爾關(guān)系。葡萄糖有標(biāo)準(zhǔn)純制品。 根據(jù)公式根據(jù)公式A=bCA=bC，已知比色杯光徑，已知比色杯光徑b b和葡萄和葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液濃度，測得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度糖標(biāo)準(zhǔn)液濃度，測得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度A A后便可計算出后便可計算出NADHNADH（NADPHNADPH）的摩爾吸光系）的摩爾吸光系數(shù)數(shù)為為 A/bCA/bC。 葡

36、萄糖標(biāo)準(zhǔn)液濃度為葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液濃度為1Ommo1/L(0.01mol/L)1Ommo1/L(0.01mol/L)，標(biāo)準(zhǔn)液加入量為標(biāo)準(zhǔn)液加入量為3.5L3.5L，酶試劑加入量為，酶試劑加入量為335L335L，比色杯光徑為比色杯光徑為0.7cm0.7cm，在，在340nm340nm測得吸光度為測得吸光度為0.4650.465，則實測則實測NADHNADH摩爾吸光系數(shù)摩爾吸光系數(shù) 64246424，即在此臺分析儀上，即在此臺分析儀上 340nm340nm波長處測得波長處測得NADHNADH（NADPHNADPH）的摩爾吸光系數(shù)）的摩爾吸光系數(shù)為為64246424，而理論上，而理論上NADHNADH（

37、NADPHNADPH）的）的為為62206220。 5 . 33355 . 301. 07 . 0465. 0 有許多酶底物為人工合成的有許多酶底物為人工合成的“色素原色素原”底物，其本身無色，經(jīng)酶底物，其本身無色，經(jīng)酶作用后釋放出有色的反應(yīng)產(chǎn)物，在作用后釋放出有色的反應(yīng)產(chǎn)物，在405nm405nm波長具有吸收峰。波長具有吸收峰。ALPALP底物底物磷酸對硝基苯酚磷酸對硝基苯酚 (4-Nitrophenyl phosphate(4-Nitrophenyl phosphate，4-NPP) 4-NPP) 經(jīng)酶作用后釋放出黃色的對硝基苯酚經(jīng)酶作用后釋放出黃色的對硝基苯酚(4-Nitrophenol

38、(4-Nitrophenol，4-NP)4-NP)GGTGGT底物底物-L-L-谷氨酰對硝基苯胺谷氨酰對硝基苯胺(-L-Glutamyl-p-nitroanilide)(-L-Glutamyl-p-nitroanilide)或或-L-L-谷氨酰谷氨酰-3-3-羥基羥基- -對硝基苯胺對硝基苯胺(-L-Glutamyl-3-carboxyl-p-nitroan)(-L-Glutamyl-3-carboxyl-p-nitroan)經(jīng)酶作用后釋放出黃色的對硝基苯胺經(jīng)酶作用后釋放出黃色的對硝基苯胺(p-Nitroaniline(p-Nitroaniline，4-NA)4-NA)或?qū)ο趸驅(qū)ο趸?5-5

39、-氨基苯甲酸氨基苯甲酸(2-amino-nitrobenzoicacid(2-amino-nitrobenzoicacid， ANBA)ANBA)。 試劑：試劑： 4-NP 4-NP標(biāo)準(zhǔn)儲存液標(biāo)準(zhǔn)儲存液(1Ommo1/L)(1Ommo1/L) 4-NP 4-NP標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(2.5mmo1/L(2.5mmo1/L，以，以0.84mol/L 0.84mol/L AMPAMP緩沖液稀釋而成緩沖液稀釋而成) ) 底物緩沖液底物緩沖液(l5mmol/L 4-NPP(l5mmol/L 4-NPP配于配于0.84mol/L AMP-HCL0.84mol/L AMP-HCL緩沖液中，緩沖液中，37,

40、pH 37,pH l0.09l0.09土土0.02)0.02)。 4-NP4-NP標(biāo)準(zhǔn)液加入量為標(biāo)準(zhǔn)液加入量為5L5L，底物緩沖液，底物緩沖液加入量為加入量為350L350L，波長，波長405nm405nm，光徑，光徑0.7cm0.7cm，溫度溫度3737，測定得吸光度為，測定得吸光度為A A1 1；另用蒸餾；另用蒸餾水代替水代替4-NP4-NP標(biāo)準(zhǔn)液，按上述方法測定其吸標(biāo)準(zhǔn)液，按上述方法測定其吸光度為光度為A A2 2，4-NP4-NP標(biāo)準(zhǔn)液吸光度標(biāo)準(zhǔn)液吸光度A= AA= A1 1- A- A2 2，若測得若測得AA為為0.4600.460，則實測，則實測4-NP4-NP摩爾吸光摩爾吸光系數(shù)

41、系數(shù)18662 18662 酶活性校準(zhǔn)品經(jīng)校準(zhǔn)操作后由分析儀自動酶活性校準(zhǔn)品經(jīng)校準(zhǔn)操作后由分析儀自動計算得出。在進行酶學(xué)測定時，如果分析條件計算得出。在進行酶學(xué)測定時，如果分析條件的變化如溫度、樣品試劑加量和吸光度檢測偏的變化如溫度、樣品試劑加量和吸光度檢測偏差可同等程度地影響校準(zhǔn)物和待測樣品，則使差可同等程度地影響校準(zhǔn)物和待測樣品，則使用校準(zhǔn)品能進行補償。一般來說以使用用校準(zhǔn)品能進行補償。一般來說以使用校準(zhǔn)校準(zhǔn)K K值值為好，但必須有兩個先決條件：為好，但必須有兩個先決條件：必須使用必須使用配套的試劑；配套的試劑；必須使用配套的高質(zhì)量的校準(zhǔn)必須使用配套的高質(zhì)量的校準(zhǔn)品，該校準(zhǔn)品應(yīng)具有品，該校

42、準(zhǔn)品應(yīng)具有溯源性溯源性。 抗原與相應(yīng)的抗體結(jié)合形成的抗原與相應(yīng)的抗體結(jié)合形成的免疫復(fù)合免疫復(fù)合物物，在反應(yīng)液中具有一定的濁度，可由一般，在反應(yīng)液中具有一定的濁度，可由一般分光光度法進行分光光度法進行透射比濁透射比濁（transmission transmission turbidimetryturbidimetry）測定，可用于某些蛋白質(zhì)和）測定，可用于某些蛋白質(zhì)和藥物濃度等的測定。該法須做藥物濃度等的測定。該法須做多點校準(zhǔn)多點校準(zhǔn)，再，再經(jīng)經(jīng)非線性回歸非線性回歸，求出抗原或抗體的含量。，求出抗原或抗體的含量。 常用的有總膽紅素（氧化法或重氮法）、常用的有總膽紅素（氧化法或重氮法）、結(jié)合膽紅素

43、（氧化法或重氮法）、血清總蛋結(jié)合膽紅素（氧化法或重氮法）、血清總蛋白（雙縮脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯白（雙縮脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、總膽汁酸（酶法）、葡萄糖（葡萄糖法）、總膽汁酸（酶法）、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸（尿酸酶法）、總膽固醇氧化酶法）、尿酸（尿酸酶法）、總膽固醇（膽固醇氧化酶法）、甘油三酯（磷酸甘油（膽固醇氧化酶法）、甘油三酯（磷酸甘油氧化酶酶法）、高密度脂蛋白膽固醇（直接氧化酶酶法）、高密度脂蛋白膽固醇（直接測定法）、鈣（偶氮砷測定法）、鈣（偶氮砷法）、磷（紫外法）、磷（紫外法）、鎂（二甲苯胺藍(lán)法）等。法）、鎂（二甲苯胺藍(lán)法）等。 苦味酸法測苦味酸法測定肌酐采用此

44、定肌酐采用此法法。 對于酶活性測定一般應(yīng)選用連續(xù)監(jiān)測對于酶活性測定一般應(yīng)選用連續(xù)監(jiān)測法，如：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨法，如：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶、基轉(zhuǎn)移酶、乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶、谷氨氨?；D(zhuǎn)移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。谷氨氨?；D(zhuǎn)移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。一些代謝物酶法測定的項目如：脲酶偶聯(lián)一些代謝物酶法測定的項目如：脲酶偶聯(lián)法測定尿素等，也可用連續(xù)監(jiān)測法。法測定尿素等，也可用連續(xù)監(jiān)測法。 透射比濁法透射比濁法可用于測定產(chǎn)生濁度反可用于測定產(chǎn)生濁度反應(yīng)的項目，多數(shù)屬應(yīng)的項目，多數(shù)屬免疫比濁法免疫比濁法，載脂蛋，載脂蛋白、免疫球蛋白、補體、抗白、免疫球

45、蛋白、補體、抗“O”O(jiān)”、類風(fēng)、類風(fēng)濕因子，以及血清中的其他蛋白質(zhì)如前濕因子，以及血清中的其他蛋白質(zhì)如前白蛋白、結(jié)合珠蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白等均可白蛋白、結(jié)合珠蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白等均可用此法。用此法。 各種測定項目的各種測定項目的分析參數(shù)分析參數(shù)（analysisanalysisparameteparamete）大部分也已設(shè)計好，存于磁盤中，）大部分也已設(shè)計好，存于磁盤中，供用戶使用；目前大多數(shù)生化分析儀為開放供用戶使用；目前大多數(shù)生化分析儀為開放式，用戶可以更改這些參數(shù)。生化分析儀一式，用戶可以更改這些參數(shù)。生化分析儀一般另外留一些檢測項目的空白通道，由用戶般另外留一些檢測項目的空白通道，由用戶自己設(shè)定

46、分析參數(shù)。因此必須理解各參數(shù)的自己設(shè)定分析參數(shù)。因此必須理解各參數(shù)的確切意義。確切意義。 1 1試驗名稱試驗名稱（test codetest code）2 2方法類型方法類型（也稱反應(yīng)模式）（也稱反應(yīng)模式）(assay mode)(assay mode)3 3反應(yīng)溫度反應(yīng)溫度4 4主波長主波長（primary wavelengthprimary wavelength） 5 5次波長次波長（secondary wavelengthsecondary wavelength）6. 6. 反應(yīng)方向反應(yīng)方向（response directionresponse direction） 7 7樣品量樣品量（

47、sampling volumsampling volum） 常量、減量和增量。常量、減量和增量。8 8第一試劑量第一試劑量 （first reagent volumfirst reagent volum） 一般一般20-300l20-300l9 9第二試劑量第二試劑量（second reagent volumsecond reagent volum）同上。）同上。1010總反應(yīng)容量總反應(yīng)容量（total reacting volumtotal reacting volum） 一般一般180-350l180-350l，現(xiàn)儀器能減少至，現(xiàn)儀器能減少至120l120l。1111孵育時間孵育時間（in

48、cubate timeincubate time）1212延遲時間延遲時間（delay timedelay time）1313連續(xù)監(jiān)測時間連續(xù)監(jiān)測時間 （continuous monitoring continuous monitoring timetime）一般為）一般為6060120s120s，不少于，不少于4 4個吸光度檢個吸光度檢測點（測點（3 3個吸光度變化值）個吸光度變化值） 1414校準(zhǔn)液校準(zhǔn)液（calibratorcalibrator）個數(shù)及濃度）個數(shù)及濃度 1515校準(zhǔn)校準(zhǔn)K K值值（calibrate coefficientcalibrate coefficient）或理）

49、或理 論論K K值值1616線性范圍線性范圍（linearity rangelinearity range）1717小數(shù)點位數(shù)小數(shù)點位數(shù)（decimal point digitdecimal point digit） 這類分析參數(shù)與檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性有這類分析參數(shù)與檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性有關(guān)，一般來說不設(shè)置這類分析參數(shù)，分析關(guān)，一般來說不設(shè)置這類分析參數(shù)，分析儀也能檢測出結(jié)果，但若樣品中待測物濃儀也能檢測出結(jié)果，但若樣品中待測物濃度太高等，檢測結(jié)果可能不準(zhǔn)確。度太高等，檢測結(jié)果可能不準(zhǔn)確。 1 1樣品預(yù)稀釋樣品預(yù)稀釋 設(shè)置樣品量、稀釋劑量和稀設(shè)置樣品量、稀釋劑量和稀釋后樣品量三個數(shù)值，便可在分析前自動

50、對釋后樣品量三個數(shù)值，便可在分析前自動對樣品進行高倍稀釋。樣品進行高倍稀釋。 2 2底物耗盡值底物耗盡值（substrate exhaust limitsubstrate exhaust limit） 在負(fù)反應(yīng)的酶活性測定中，可設(shè)置此參數(shù)，在負(fù)反應(yīng)的酶活性測定中，可設(shè)置此參數(shù)，以規(guī)定一個吸光度下降限。若低于此限時底以規(guī)定一個吸光度下降限。若低于此限時底物已太少，不足以維持零級反應(yīng)而導(dǎo)致檢測物已太少，不足以維持零級反應(yīng)而導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確結(jié)果不準(zhǔn)確。 3 3前區(qū)檢查前區(qū)檢查免疫比濁法中應(yīng)用，以判斷是免疫比濁法中應(yīng)用，以判斷是否有抗原過剩。將終點法最后兩個吸光度否有抗原過剩。將終點法最后兩個吸光度

51、值的差別（值的差別（AA）設(shè)置一個限值，如果后一）設(shè)置一個限值，如果后一點的吸光度比前一點低，表示已有抗原過點的吸光度比前一點低，表示已有抗原過剩，應(yīng)稀釋樣品后重測。剩，應(yīng)稀釋樣品后重測。4 4試劑空白吸光度范圍試劑空白吸光度范圍超過此設(shè)定范圍表超過此設(shè)定范圍表示試劑已變質(zhì)，應(yīng)更換合格試劑。示試劑已變質(zhì)，應(yīng)更換合格試劑。 5 5試劑空白速率試劑空白速率連續(xù)監(jiān)測法中使用，是連續(xù)監(jiān)測法中使用，是試劑本身在監(jiān)測過程中沒有化學(xué)反應(yīng)時的試劑本身在監(jiān)測過程中沒有化學(xué)反應(yīng)時的變化速率。變化速率。 6 6方法學(xué)補償系數(shù)方法學(xué)補償系數(shù)用于校準(zhǔn)不同分析方用于校準(zhǔn)不同分析方法間測定結(jié)果的一致性，有斜率和截距兩法間測

52、定結(jié)果的一致性，有斜率和截距兩個參數(shù)。個參數(shù)。7 7參考值范圍參考值范圍對超過此范圍的測定結(jié)果，對超過此范圍的測定結(jié)果，儀器會打印出提示儀器會打印出提示。 1 1最小樣品量最小樣品量一般分析儀的最小樣品一般分析儀的最小樣品量是量是2l2l，目前也有小至，目前也有小至1.6l1.6l的。的。2 2最大試劑量最大試劑量 對方法靈敏度很高而線對方法靈敏度很高而線性上限低的檢測項目，很重要。性上限低的檢測項目，很重要。 在酶活性測定中，當(dāng)酶活性太高，在在酶活性測定中，當(dāng)酶活性太高，在連續(xù)監(jiān)測期中已不呈線性反應(yīng)時，有些儀連續(xù)監(jiān)測期中已不呈線性反應(yīng)時，有些儀器具有彈性速率功能，能自動選擇反應(yīng)曲器具有彈性速

53、率功能，能自動選擇反應(yīng)曲線上連續(xù)監(jiān)測期中仍呈線性的吸光度數(shù)據(jù)線上連續(xù)監(jiān)測期中仍呈線性的吸光度數(shù)據(jù)計算結(jié)果，使酶活性測定的線性范圍得以計算結(jié)果，使酶活性測定的線性范圍得以擴大。如擴大。如ASTAST可從可從1000U/L1000U/L擴展至擴展至2000U/L2000U/L，從而減少稀釋及重測次數(shù)、降低成本。從而減少稀釋及重測次數(shù)、降低成本。 以膽紅素干擾堿性苦味酸法測定肌酐以膽紅素干擾堿性苦味酸法測定肌酐為例為例：樣品中存在膽紅素時，膽紅素對堿：樣品中存在膽紅素時，膽紅素對堿性苦味酸速率法或兩點法測定肌酐有負(fù)干性苦味酸速率法或兩點法測定肌酐有負(fù)干擾。因為膽紅素在肌酐檢測的波長擾。因為膽紅素在肌

54、酐檢測的波長505nm505nm有有較高光吸收，而且膽紅素在堿性環(huán)境中可較高光吸收，而且膽紅素在堿性環(huán)境中可被氧化轉(zhuǎn)變，因而在肌酐反應(yīng)過程中膽紅被氧化轉(zhuǎn)變，因而在肌酐反應(yīng)過程中膽紅素的光吸收呈下降趨勢。素的光吸收呈下降趨勢。 若在加入第一試劑后一段時間內(nèi)設(shè)置試若在加入第一試劑后一段時間內(nèi)設(shè)置試劑空白速率，因為此段中苦味酸尚未與肌酐劑空白速率，因為此段中苦味酸尚未與肌酐反應(yīng)，而膽紅素在第一試劑的堿性環(huán)境中已反應(yīng)，而膽紅素在第一試劑的堿性環(huán)境中已同樣被氧化轉(zhuǎn)變，因而以第二試劑加入后的同樣被氧化轉(zhuǎn)變，因而以第二試劑加入后的速率變化，減去試劑空白速率變化，便可消速率變化，減去試劑空白速率變化，便可消除

55、膽紅素的負(fù)干擾，見圖除膽紅素的負(fù)干擾，見圖4-84-8。 圖4-8 采用一個波長檢測物質(zhì)的光吸收強度的方采用一個波長檢測物質(zhì)的光吸收強度的方式稱為式稱為單波長方式單波長方式。當(dāng)反應(yīng)液中含有一種組分，。當(dāng)反應(yīng)液中含有一種組分，或在混合反應(yīng)液中待測組分的吸收峰與其它共或在混合反應(yīng)液中待測組分的吸收峰與其它共存物質(zhì)的吸收波長無重疊時，可以選用。存物質(zhì)的吸收波長無重疊時，可以選用。 使用一個主波長和一個次波長的稱使用一個主波長和一個次波長的稱雙波長雙波長方式方式。當(dāng)反應(yīng)液中存在干擾物的較大吸收、從。當(dāng)反應(yīng)液中存在干擾物的較大吸收、從而影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性時，采用雙波長方式而影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性時，采用

56、雙波長方式更好。更好。 消除噪音干擾消除噪音干擾; ;減少雜散光影響減少雜散光影響; ;減少樣品本身光吸收的干擾：當(dāng)樣品中存在非減少樣品本身光吸收的干擾：當(dāng)樣品中存在非化學(xué)反應(yīng)的干擾物如甘油三酯、血紅蛋白、膽化學(xué)反應(yīng)的干擾物如甘油三酯、血紅蛋白、膽紅素等時，會產(chǎn)生非特異性的光吸收，雙波長紅素等時，會產(chǎn)生非特異性的光吸收，雙波長方式可以部分消除這類光吸收干擾。方式可以部分消除這類光吸收干擾。 當(dāng)被測物的主波長確定之后，根據(jù)干擾物當(dāng)被測物的主波長確定之后，根據(jù)干擾物吸收光譜特征選擇次波長，使干擾物在主、次吸收光譜特征選擇次波長，使干擾物在主、次波長處有盡可能相同的光吸收值，而被測物在波長處有盡可能

57、相同的光吸收值，而被測物在主、次波長處的光吸收值應(yīng)有較大的差異。主、次波長處的光吸收值應(yīng)有較大的差異。 一般來說，次波長應(yīng)大于主波長一般來說，次波長應(yīng)大于主波長100nm100nm。以主波長與次波長吸光度差來計算結(jié)果。以主波長與次波長吸光度差來計算結(jié)果。 反應(yīng)過程中只加一次試劑稱反應(yīng)過程中只加一次試劑稱單試劑方式單試劑方式，加兩次試劑便為加兩次試劑便為雙試劑方式雙試劑方式。 雙試劑方式分析的優(yōu)點是：雙試劑方式分析的優(yōu)點是： 可提高試劑的保存穩(wěn)定性；可提高試劑的保存穩(wěn)定性； 能設(shè)置兩點終點法；能設(shè)置兩點終點法； 在某些項目檢測時能消除非特異性化學(xué)反應(yīng)在某些項目檢測時能消除非特異性化學(xué)反應(yīng) 干擾。

58、干擾。 血清血清ALTALT測定時，血清中原有酮酸也可與測定時，血清中原有酮酸也可與試劑試劑LDHLDH起反應(yīng)，使結(jié)果偏高。若先加入缺乏起反應(yīng)，使結(jié)果偏高。若先加入缺乏-酮戊二酸的第一試劑，使原有酮酸與酮戊二酸的第一試劑，使原有酮酸與LDHLDH反反應(yīng)，之后加入含有應(yīng)，之后加入含有-酮戊二酸的第二試劑，酮戊二酸的第二試劑，啟動啟動ALTALT酶促反應(yīng)生成丙酮酸，這些丙酮酸與酶促反應(yīng)生成丙酮酸，這些丙酮酸與LDHLDH反應(yīng)消耗的反應(yīng)消耗的NADNAD能真正反映能真正反映ALTALT活性，從而活性，從而消除以上副反應(yīng)的影響。消除以上副反應(yīng)的影響。 1 1試劑空白監(jiān)測試劑空白監(jiān)測 ：每瓶試劑在使用前

59、先自動檢測試劑空白吸每瓶試劑在使用前先自動檢測試劑空白吸光度；光度；每個樣品測定前均檢測試劑空白吸光度。每個樣品測定前均檢測試劑空白吸光度。為某些先加試劑后取樣品的分析儀所采用。為某些先加試劑后取樣品的分析儀所采用。 設(shè)置此項監(jiān)測后，分析儀在結(jié)果計算時設(shè)置此項監(jiān)測后，分析儀在結(jié)果計算時會自動減去試劑空白變化速率。會自動減去試劑空白變化速率。在以監(jiān)測在以監(jiān)測NADNAD（P P）H H減少為指示反應(yīng)的酶活性測定中，減少為指示反應(yīng)的酶活性測定中，空白速率速率可監(jiān)測并消除由空白速率速率可監(jiān)測并消除由NADHNADH自身氧化自身氧化所造成的吸光度下降；在色素原為底物的酶所造成的吸光度下降；在色素原為底

60、物的酶活性測定中，空白速率可監(jiān)測并消除底物自活性測定中，空白速率可監(jiān)測并消除底物自身分解造成的吸光度升高。有關(guān)空白速率監(jiān)身分解造成的吸光度升高。有關(guān)空白速率監(jiān)測在膽紅素對堿性苦味酸速率法測定肌酐負(fù)測在膽紅素對堿性苦味酸速率法測定肌酐負(fù)干擾消除中的作用，已如前述。干擾消除中的作用，已如前述。 由于樣品的溶血、脂濁、黃疸會對測定由于樣品的溶血、脂濁、黃疸會對測定結(jié)果產(chǎn)生非化學(xué)反應(yīng)的干擾。根據(jù)溶血、結(jié)果產(chǎn)生非化學(xué)反應(yīng)的干擾。根據(jù)溶血、脂濁、黃疸的光譜吸收特性，用雙波長或脂濁、黃疸的光譜吸收特性，用雙波長或多波長檢測其性質(zhì)和程度，一般是測定樣多波長檢測其性質(zhì)和程度，一般是測定樣品在品在600nm600