中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問(wèn)題的探討

1、 中藥藥效毒理研究 技術(shù)規(guī)范若干問(wèn)題的探討北京中醫(yī)藥大學(xué) 中藥學(xué)院 中藥藥理系 孫建寧 教授 o 中藥藥效評(píng)價(jià)的現(xiàn)狀與探索 中藥新藥的基本要求是安全、有效、可控安全、有效、可控和穩(wěn)定。穩(wěn)定。 侯選樣品侯選樣品 - 藥效學(xué)藥效學(xué) -侯選藥物侯選藥物 毒性研究毒性研究藥效學(xué)研究的基本目的藥效學(xué)研究的基本目的（一）通過(guò)藥效學(xué)研究確定（一）通過(guò)藥效學(xué)研究確定有效性有效性 是否有效、作用的強(qiáng)弱、優(yōu)缺點(diǎn)和特色，確定有無(wú)開發(fā)前景。 重視前期藥效的篩選，力求得到較準(zhǔn)確的藥效評(píng)價(jià)。設(shè)法找出主要藥效學(xué)的特點(diǎn)、有效作用劑量范圍（量效關(guān)系）、有效作用時(shí)間長(zhǎng)短（時(shí)效關(guān)系）。（二）提高臨床療效二）提高臨床療效 應(yīng)充分運(yùn)用

2、現(xiàn)代科學(xué)特別是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的理論、方法和手段，制定科學(xué)、嚴(yán)密、具有中醫(yī)藥特點(diǎn)的試驗(yàn)計(jì)劃 ，建立與臨床相符的 “病” “癥”或“證”相似的動(dòng)物模型與指標(biāo)，對(duì)新藥的有效性作出科學(xué)的評(píng)價(jià)。 o 藥效研究參考資料:o1、中藥新藥研究指南（藥學(xué)藥理學(xué) 毒理學(xué)）中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥政管理局，1994：66-67o2、中藥新藥研制開發(fā)技術(shù)與方法 王北嬰、李儀奎主編 上海科學(xué)技術(shù)出版社2001.12o3、中藥復(fù)方研究思路與方法 （2004年出版）o4、中藥藥理研究方法學(xué) 陳奇主編 人民衛(wèi)生出版社（1993年版、新版待出）o5、中藥藥理方法學(xué)李儀奎主編 上?？茖W(xué)技術(shù)出版社 1991o6、國(guó)內(nèi)外研究論文 二二.藥效

3、學(xué)研究的基本要求藥效學(xué)研究的基本要求 o 試驗(yàn)負(fù)責(zé)人試驗(yàn)負(fù)責(zé)人 o 受試藥物受試藥物 o 研究單位研究單位 o 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 o 試驗(yàn)記錄試驗(yàn)記錄 o 統(tǒng)計(jì)處理統(tǒng)計(jì)處理 三、藥效學(xué)研究的方法及注意事項(xiàng)三、藥效學(xué)研究的方法及注意事項(xiàng) o 1、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 符合中藥特點(diǎn)；符合國(guó)家新藥研究申報(bào)的有關(guān)規(guī)定；隨機(jī)、對(duì)照、重復(fù) 重視中藥復(fù)方配伍規(guī)律性的研究:o (1)單味研究法o (2)藥對(duì)研究法o (3)藥物組間關(guān)系法o (4)撤藥分析法 (5)聚類分析法 (6)正交設(shè)計(jì)法 (7)正交t值法 (8)均勻設(shè)計(jì)法 (9)量效關(guān)系法o 撤藥分析法: 從復(fù)方中撤出一味或一組藥進(jìn)行實(shí)驗(yàn) 黃芩湯:黃芩、芍

4、藥、甘草、大棗 結(jié)果：減黃芩顯著影響藥效，分別減芍藥、甘草、大棗變化不大。說(shuō)明君藥在全方中起主導(dǎo)地位。均勻設(shè)計(jì)法： 按均勻設(shè)計(jì)表安排，實(shí)驗(yàn)次數(shù)與各因素所取水平數(shù)相等。 如治療感染復(fù)方（五種中藥x1、x2、x3、x4、x5）。根據(jù)因素與水平，選用u11表設(shè)計(jì)，結(jié)果算得回歸方程，有顯著性意義，從標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)系數(shù)可看出藥物（抗炎）作用大小，進(jìn)行優(yōu)選。o 量效關(guān)系法： 四君子湯：黨參、白術(shù)、茯苓、甘草 1 ： 1 ： 1 ：0.5 巨噬細(xì)胞吞噬功能增強(qiáng)，調(diào)整甘草到1/3，功能減弱。 當(dāng)歸補(bǔ)血湯: 黃芪、當(dāng)歸 5 ： 1 免疫增強(qiáng)作用，調(diào)整黃芪劑量（1/2、2、4倍）均作用不明顯。o 2、動(dòng)物選擇、動(dòng)物選擇

5、 o 種類：實(shí)驗(yàn)常用小鼠和大鼠 、豚鼠 、家兔 、狗o 品系 o 動(dòng)物等級(jí)：二級(jí)動(dòng)物即清潔動(dòng)物（cl）性別：一般試驗(yàn)選用雌雄各半動(dòng)物。 o 數(shù)量：一般小鼠不得少于10只，大鼠為8只，貓、狗為4只以上 3、方法的選擇方法的選擇（一）根據(jù)主治，參考功能，選擇試驗(yàn)方法 針對(duì)性強(qiáng)、重點(diǎn)突出、主次分明。 如缺血性中風(fēng): 1增加缺血區(qū)腦血流量 2神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)治療 o中藥治療缺血性中風(fēng)主要藥效學(xué)研究方案中藥治療缺血性中風(fēng)主要藥效學(xué)研究方案o（一）對(duì)腦缺血試驗(yàn)?zāi)X缺血試驗(yàn) o 選用大鼠大腦中動(dòng)脈血栓模型(middle cerebral artery thrombosis,mcat)和雙側(cè)頸總動(dòng)脈阻斷致不完全性

6、腦缺，觀察連續(xù)給藥2-3天對(duì)局部腦缺血和不完全性全腦缺血性損傷的保護(hù)作用。o (1) 大鼠神經(jīng)癥狀檢測(cè)：根據(jù)改進(jìn)的 bedorson等人的分級(jí)打分法記分。 (2)對(duì) mcat大鼠腦水腫的影響：分別稱量腦缺血側(cè)和非缺血側(cè)腦組織濕重和干重，以腦水含量百分比為指標(biāo)。 (3)藥物對(duì)mcat大鼠腦梗塞范圍的影響：采用ttc染色法，以梗塞組織重量占總腦重量的百分比為指標(biāo)。 o (4)生化指標(biāo):包括能量代謝和毒性產(chǎn)物，如三磷酸腺苷（atpase）、磷酸肌酸（per）、乳酸（la）、乳酸脫氫酶（ldh）、自由脂肪酸（ffa）、脂質(zhì)過(guò)氧化物（lpo）、興奮性氨基酸（eaa）及基因表達(dá)等。o (5) 藥物對(duì)模型大

7、鼠腦組織病理改變的影響：采用he染色和尼氏體染色法，以病理切片尼氏體數(shù)量和神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)為指標(biāo)。o（二）血流動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)（二）血流動(dòng)力學(xué)試驗(yàn) 采用麻醉犬進(jìn)行試驗(yàn)，用電磁流量計(jì)測(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈血流量，腦血管阻力、血壓、心電圖和心率，觀察受試藥物對(duì)腦血管及腦血流量的影響。o(三三)毛細(xì)血管通透性試驗(yàn)：毛細(xì)血管通透性試驗(yàn)：試驗(yàn)用大鼠，采用比色法觀察藥物對(duì)伊文思藍(lán)等染料通透性的影響。o（四）（四）抗血栓形成試驗(yàn)和溶栓試驗(yàn)血栓形成試驗(yàn)和溶栓試驗(yàn)o（1）大鼠動(dòng)-靜脈旁路血栓形成試驗(yàn)：以血栓濕重和干重為指標(biāo)。o（2）溶栓試驗(yàn)：o體外試驗(yàn)（血清藥理） 新鮮血塊溶解試驗(yàn)：指標(biāo)為給藥前、后血塊重量并計(jì)算血塊溶解百分率。o（

8、五）血小板聚集試驗(yàn)：（五）血小板聚集試驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)用大鼠或家兔，觀察受試藥物對(duì)adp、膠原所致血小板聚集的抑制作用。o（六）（六）藥物對(duì)血液凝固性的影響：凝血時(shí)間、凝血酶時(shí)間（tt）、凝血酶原時(shí)間（pt）和部分凝血活酶時(shí)間（aptt）。（二）采用能夠反映中藥特點(diǎn)的試驗(yàn)方法及動(dòng)物模型o 抗病毒感染中藥復(fù)方研究實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)o 急性感染期用藥o 1、對(duì)病原體的抑制作用o 2、對(duì)癥治療 退熱作用 抗?jié)B出抗炎作用 抗肺纖維化作用 抗多臟衰作用（1）感病毒所致小鼠肺炎的保護(hù)作用；選擇流感病毒肺炎模型，以肺指數(shù)、死亡率、血清no含量為觀察指標(biāo)（2）抗高熱作用o *對(duì)毒素所致家兔發(fā)熱模型的退熱作用o *酵母所致大鼠發(fā)

9、熱模型的退熱作用o（3）抗?jié)B出、抗炎：選擇油酸致呼吸窘迫癥模型油觀察所選藥物對(duì)呼吸功能的影響。o（4）對(duì)吸入性肺炎的保護(hù)作用：選擇內(nèi)毒素吸入性肺炎損傷模型以balf中彈性蛋白酶、蛋白含量為觀察指標(biāo)o（5）抗炎作用：（急性炎癥）o對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響（常規(guī)藥理試驗(yàn)）o對(duì)角叉菜膠所致大鼠足腫脹的影響（常規(guī)藥理試驗(yàn)）o（6）對(duì)內(nèi)毒素所致大鼠多臟器衰竭的保護(hù)作用：選擇內(nèi)毒素或角叉菜膠多臟器損傷模型觀察所選藥物對(duì)重要臟器的保護(hù)作用。評(píng)價(jià)指標(biāo)：生化指標(biāo)（alt、ast、grea、bun ），臟器指數(shù)（心、肝、脾、肺、腎），血象測(cè)定（wbc及分類、rbc、plt、凝血時(shí)間）o 恢復(fù)期用藥o 1、對(duì)過(guò)

10、量甲狀腺激素所致陰虛模型的改善作用o 2、對(duì)過(guò)量皮質(zhì)激素所致陰虛模型的改善作用o 3、對(duì)過(guò)量皮質(zhì)激素所致消化道功能障礙的改善作用o 4、強(qiáng)壯作用：以耐缺氧時(shí)間、小鼠游泳時(shí)間為觀察指標(biāo)o 5、對(duì)免疫功能的影響（三）主要藥效為主，配合輔助試驗(yàn) 治療神經(jīng)根型頸椎病治療神經(jīng)根型頸椎病 主要藥效：1、對(duì)神經(jīng)根無(wú)菌性炎癥模型的影響 （1）一般行為學(xué)（步態(tài)、患肢運(yùn)動(dòng)等）、肌張力、感覺(jué)（觸覺(jué)、痛覺(jué)）； （2）神經(jīng)電生理檢測(cè)：測(cè)定神經(jīng)纖維的傳導(dǎo)速度，觀察藥物的改善作用； （3）神經(jīng)纖維軸索計(jì)數(shù)和再生率：觀察藥物對(duì)損傷神經(jīng)的再生作用； （4）對(duì)致炎物重量的影響：觀察藥物對(duì)模型動(dòng)物致炎物重量的抑制作用；（2）對(duì)模型

11、鼠腦組織內(nèi)camp與cgmp的影響；（3）病理組織學(xué)檢查：異物巨細(xì)胞反應(yīng)、肉芽組織、炎性細(xì)胞等。 2、抗炎作用 3、鎮(zhèn)痛作用o對(duì)血液流變學(xué)的影響o 采用血瘀大鼠模型，測(cè)定全血粘度、血漿粘度、紅細(xì)胞壓積、紅細(xì)胞聚集性、紅細(xì)胞變形性，觀察藥物對(duì)血液流變學(xué)的作用，初步分析該方治療神經(jīng)根性頸椎病的作用環(huán)節(jié)。（四）整體和離體方法選擇 中藥由于成分復(fù)雜，特別是復(fù)方粗制劑，為多種化學(xué)成分(或有效部位)的混合體，除有效成分外，尚有一些無(wú)關(guān)成分及干擾成分。因此，藥效學(xué)試驗(yàn)應(yīng)以體內(nèi)試驗(yàn)為主，體外試驗(yàn)為輔；以消化道給藥為主，其他給藥途徑為輔。 若為中藥有效成分(或部位)制劑較純者，或臨床為注射給藥者，可用體外試驗(yàn)或

12、注射給藥進(jìn)行主要藥效學(xué)試驗(yàn)。 o 4 4、指標(biāo)的選擇、指標(biāo)的選擇o （一）特異性強(qiáng) o （二）敏感性高 o （三）重現(xiàn)性好 o （四）客觀性 o （五）定量指標(biāo) o （六）多指標(biāo)綜合運(yùn)用 ：生理、生化、形態(tài)等各類指標(biāo)合理搭配，綜合運(yùn)用 5、試驗(yàn)組給藥劑量試驗(yàn)組給藥劑量（一）根據(jù)半數(shù)致死量（一）根據(jù)半數(shù)致死量(ld(ld5050) )計(jì)算計(jì)算 凡是能夠測(cè)出ld50者，可用其1/10、1/20、1/30、1/40等相近劑量，作為藥效學(xué)試驗(yàn)的高中低劑量組。（二）根據(jù)臨床用量計(jì)算（二）根據(jù)臨床用量計(jì)算 其粗略的等效倍數(shù)為1（人）、3（狗、猴）、5（貓、兔）、7（大鼠、豚鼠）、1011（小鼠）（三）根據(jù)

13、文獻(xiàn)估計(jì)劑量（三）根據(jù)文獻(xiàn)估計(jì)劑量 （四）根據(jù)體表面積估計(jì)劑量（四）根據(jù)體表面積估計(jì)劑量 根據(jù)體表面積折算法換算的同等體表面積（m2、cm2）單位時(shí)的劑量 6、給藥方式給藥方式7、對(duì)照藥的選擇對(duì)照藥的選擇（一）陽(yáng)性對(duì)照藥（一）陽(yáng)性對(duì)照藥 1.可比性：其功用、主治、劑型、給藥途徑應(yīng)與新藥相似 2.合法性：陽(yáng)性藥應(yīng)是國(guó)家中國(guó)藥典或部頒標(biāo)準(zhǔn)，或新批準(zhǔn)生產(chǎn)的合法藥物 3.擇優(yōu)選用：學(xué)術(shù)界或社會(huì)公認(rèn)有效的、有代表性的“好”藥 （二）原劑型對(duì)照（二）原劑型對(duì)照 改劑型新藥的陽(yáng)性對(duì)照藥 （三）空白對(duì)照品（三）空白對(duì)照品 四、隨著科學(xué)技術(shù)發(fā)展涌現(xiàn)出中藥復(fù)方藥效研究的創(chuàng)新思路和方法 ：o（一）（一）建立中醫(yī)藥信

14、息系統(tǒng)，將大大建立中醫(yī)藥信息系統(tǒng)，將大大提高中藥復(fù)方藥效的研究效率提高中藥復(fù)方藥效的研究效率 中醫(yī)藥信息系統(tǒng)：方劑庫(kù)、藥用植物庫(kù)、中藥有效成分三維結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫(kù)及靶酶結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫(kù) 。 o （二）引入基因組學(xué)與蛋白質(zhì)組學(xué)及基因芯片（二）引入基因組學(xué)與蛋白質(zhì)組學(xué)及基因芯片技術(shù)技術(shù) q 中藥復(fù)方突出的特點(diǎn)是活性多組分、作用多靶點(diǎn)、多途徑；突出多層次、多臟器、多水平調(diào)理過(guò)程。（復(fù)制證的動(dòng)物模型）q 基因芯片對(duì)中藥復(fù)方研究和中藥藥物篩選,指通過(guò)用藥前后表達(dá)譜的變化,找出靶基因及受靶基因調(diào)控的基因 。q 培養(yǎng)的人細(xì)胞(細(xì)胞水平)和動(dòng)物模型(整體水平)兩種方法 相互參照和比較。 中藥的毒性及安全性研究o 一、藥物

15、毒理學(xué)的研究目的一、藥物毒理學(xué)的研究目的 o 1、量化人體安全用藥的劑量和時(shí)程：包括中毒劑量及其與有效劑量的比值、安全劑量范圍、服藥周期 o 2、毒性反應(yīng)的表現(xiàn)和特點(diǎn)（急性毒性反應(yīng)、慢性毒性反應(yīng)、或蓄積性，毒性反應(yīng)可逆與否等）、毒性的靶器官及作用機(jī)理 o 3、毒性成分的體內(nèi)過(guò)程或毒代動(dòng)力學(xué)研究 o 4、毒理學(xué)方法學(xué)的研究 o 5、毒性反應(yīng)的預(yù)防、治療 o 6、如何將動(dòng)物毒理學(xué)數(shù)據(jù)外延或推論到人體： 嚙齒和非嚙齒兩種動(dòng)物進(jìn)行毒理學(xué)試驗(yàn)，它們所表現(xiàn)出來(lái)的毒性反應(yīng)和人體的毒性反應(yīng)之間的一致性有約70%的概率；而單用嚙齒動(dòng)物所作的毒性試，其和人的一致性概率僅為43%；單用非嚙齒動(dòng)物的一致性概率為63%

16、 。 （1）一致性：94%的人體毒性反應(yīng)可在給藥和觀察周期為一個(gè)月的動(dòng)物試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)。多數(shù)人體毒性反應(yīng)可在單次給藥的毒性試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)。25%的人體毒性反應(yīng)可在安全性藥理學(xué)（一般藥理學(xué)）實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)。 （2）不一致性：貫葉連翹對(duì)不同動(dòng)物生殖系統(tǒng)的影響不一致。 二、中藥毒理學(xué)研究?jī)?nèi)容 o 1、急性（單次給藥）毒性試驗(yàn)o 2、長(zhǎng)期（慢性或重復(fù)給藥）毒性試驗(yàn)o 3、一般藥理學(xué)（安全性藥理學(xué)）試驗(yàn)o 4、“三致”試驗(yàn)（遺傳毒性、生殖毒性、致癌性）o 5、免疫學(xué)毒性試驗(yàn)o 6、藥物依賴性試驗(yàn)o 7、局部（皮膚/黏膜）給藥的毒性試驗(yàn)o 8、注射劑的制劑安全性試驗(yàn)（局部刺激、過(guò)敏試驗(yàn)、溶血試驗(yàn)）o 9、毒代動(dòng)力學(xué)研

17、究o 10、其它（光敏試驗(yàn)等） 三、毒性安全性評(píng)價(jià)中的注意事項(xiàng) 一般藥理學(xué)試驗(yàn)研究 （安全性藥理） （safety pharmacology）研究目的o 通過(guò)一般藥理學(xué)研究，可以確定受試物非期望出現(xiàn)藥物效應(yīng)的情況，它可能關(guān)系到人的安全性；評(píng)價(jià)受試物在毒理學(xué)和/或臨床研究中觀察到的藥物不良反應(yīng)和/或病理生理作用；研究所觀察到的和/或推測(cè)的藥物不良反應(yīng)機(jī)制。o 通過(guò)一般藥理學(xué)研究，它可為長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)提供參考，為臨床研究和安全用藥提供信息，為開發(fā)新的適應(yīng)癥提供信息。o 一、受試物：o 建議受試物采用制備工藝穩(wěn)定、符合臨床試用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的中試樣品，并注明受試物的名稱、來(lái)源、批號(hào)、含量（或規(guī)格）、

18、保存條件及配制方法等。如不采用中試樣品，應(yīng)有充分的理由。如果由于給藥容積或給藥方法限制，可采用原料藥（提取物）進(jìn)行試驗(yàn)。 二、劑量設(shè)置二、劑量設(shè)置 中、高劑量應(yīng)高于藥效學(xué)的有效劑量，并與低劑量呈倍數(shù)關(guān)系 ，應(yīng)設(shè)至少4個(gè)劑量組 三、試驗(yàn)指標(biāo)的選擇三、試驗(yàn)指標(biāo)的選擇（一）心血管系統(tǒng)（一）心血管系統(tǒng)測(cè)定并記錄給藥前后血壓（包括測(cè)定并記錄給藥前后血壓（包括收縮壓、舒張壓和平均壓）、心電圖（包括收縮壓、舒張壓和平均壓）、心電圖（包括qt間期、間期、pr間期、間期、qrs波、波、st段和段和qrs波等）和心率等的變化。治療劑量出現(xiàn)明顯波等）和心率等的變化。治療劑量出現(xiàn)明顯血壓或心電圖改變時(shí)，應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)整體

19、或離血壓或心電圖改變時(shí)，應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)整體或離體的進(jìn)一步研究。體的進(jìn)一步研究。 o （二）呼吸系統(tǒng)o 測(cè)定并記錄給藥前后的呼吸頻率、節(jié)律和呼吸深度。治療劑量出現(xiàn)明顯的呼吸興奮或抑制時(shí)，應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)整體或離體進(jìn)一步研究。o （三）精神神經(jīng)系統(tǒng)（三）精神神經(jīng)系統(tǒng) 動(dòng)物自主活動(dòng)、平衡能力、與戊巴比妥鈉的協(xié)同 。o 四、結(jié)果及分析o 應(yīng)根據(jù)詳細(xì)的試驗(yàn)記錄，對(duì)結(jié)果進(jìn)行定量和定性統(tǒng)計(jì)分析，說(shuō)明具體的統(tǒng)計(jì)方法和選擇理由，同時(shí)應(yīng)注意對(duì)個(gè)體試驗(yàn)結(jié)果的評(píng)價(jià)。根據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果，分析受試物的一般藥理作用，結(jié)合非臨床藥效學(xué)、毒理學(xué)及臨床試驗(yàn)結(jié)果，綜合分析這些藥理作用所提示的臨床意義。追加的安全藥理學(xué)研究?jī)?nèi)容o 中樞神經(jīng)系統(tǒng)：觀察

20、藥物對(duì)行為藥理、學(xué)習(xí)記憶、神經(jīng)生化、視覺(jué)、聽覺(jué)和/或電生理等的影響o 心血管系統(tǒng)：觀察藥物對(duì)心輸出量、心肌收縮作用、血管阻力等心血管功能的影響，并探討其作用機(jī)制。o 呼吸系統(tǒng)：觀察藥物對(duì)氣道阻力、肺動(dòng)脈壓力、血?dú)夥治?、血液ph值等的影響。補(bǔ)充的安全藥理學(xué)研究o泌尿系統(tǒng)：泌尿系統(tǒng)：觀察藥物對(duì)腎功能的影響，如對(duì)尿量、比重、滲透壓、ph、電解質(zhì)平衡、蛋白質(zhì)，細(xì)胞和血生化（如尿素氮、肌酐、蛋白質(zhì)）等指標(biāo)的檢測(cè)。o自主神經(jīng)系統(tǒng)自主神經(jīng)系統(tǒng)：觀察藥物對(duì)自主神經(jīng)系統(tǒng)的影響，如與自主神經(jīng)系統(tǒng)有關(guān)受體的結(jié)合，體內(nèi)或體外對(duì)激動(dòng)劑或拮抗劑的功能反應(yīng)，對(duì)自主神經(jīng)的直接刺激作用和對(duì)心血管反應(yīng)、壓力反射和心率的影響。o胃

21、腸系統(tǒng)胃腸系統(tǒng)：觀察藥物對(duì)胃腸系統(tǒng)的影響，如胃液分泌量和ph、胃腸損傷、膽汁分泌、體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)間、體外回腸收縮的測(cè)定。o其它器官系統(tǒng)：當(dāng)出于對(duì)安全性的關(guān)注時(shí)，在其它有關(guān)研究中尚未研究藥物對(duì)下列器官系統(tǒng)的影響，如潛在的依賴性、骨骼肌、免疫和內(nèi)分泌功能等的影響，則應(yīng)考慮藥物對(duì)這方面的影響。o 三、其它相關(guān)問(wèn)題三、其它相關(guān)問(wèn)題 o （1）給藥途徑原則上應(yīng)與臨床擬用途徑一致 o （2）監(jiān)測(cè)的儀器設(shè)備o （3）麻醉狀態(tài)o （4）監(jiān)測(cè)的時(shí)間o （5）數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)o 急性毒性試驗(yàn) （acute toxicity testing） 是指在一日內(nèi)一次或多次應(yīng)用受試藥物給予動(dòng)物后，短期內(nèi)所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)及死亡情況。 o

22、 一、受試物：o 建議受試物采用制備工藝穩(wěn)定、符合臨床試用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的中試樣品，并注明受試物的名稱、來(lái)源、批號(hào)、含量（或規(guī)格）、保存條件及配制方法等。如不采用中試樣品，應(yīng)有充分的理由。o （一）動(dòng)物 o 一般應(yīng)選擇與受試藥物的藥效學(xué)、藥代動(dòng)力學(xué)、長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)相關(guān)的動(dòng)物；小鼠、大鼠，要求雌雄各半 o （二）給藥途徑、溶媒、體積 o （三）劑量和試驗(yàn)周期 o （四）觀察指標(biāo)及記錄 o （五）試驗(yàn)方法 o 半數(shù)致死量（ld50）o 最大耐受量（maximum tolerated dose，mtd）試驗(yàn) 長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)研究 （chronic toxicity testing) 試驗(yàn)設(shè)計(jì)至關(guān)重要。試驗(yàn)設(shè)

23、計(jì)應(yīng)作到科學(xué)、周到、合理 。o 一、試驗(yàn)動(dòng)物 選用動(dòng)物的生長(zhǎng)敏感期階段進(jìn)行試驗(yàn)。即大鼠5-8周齡、體重80-100g左右，beagle犬4-12月齡 o 二、劑量設(shè)置 高劑量應(yīng)使動(dòng)物出現(xiàn)明顯毒性或嚴(yán)重的毒性反應(yīng)，或個(gè)別動(dòng)物出現(xiàn)死亡；中劑量應(yīng)使動(dòng)物出現(xiàn)輕微的或中等程度的毒性反應(yīng)。o 應(yīng)注意的問(wèn)題：（一）劑量設(shè)置較低，與藥效學(xué)劑量間無(wú)安全范圍（一）劑量設(shè)置較低，與藥效學(xué)劑量間無(wú)安全范圍（二）與藥效學(xué)劑量的表示方法不一致（二）與藥效學(xué)劑量的表示方法不一致 （1）參考急性毒性試驗(yàn)的ld50值：大鼠大、中、小三劑量一般為ld50值的1/10、1/50、1/100 （2）參考最大給藥量 （3）參考擬用臨床

24、劑量 （4）參考藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)結(jié)果 （5）據(jù)等效劑量推算 （6）據(jù)體表面積折算 o （三）樣品提供和給藥途徑 o 一次性提供中試樣品，要求與臨床擬用途徑一致 。o 三、預(yù)試驗(yàn) 易被忽略。實(shí)驗(yàn)全程耗時(shí)耗力，一般重復(fù)不起。用少量動(dòng)物進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)很有必要，其中重點(diǎn)解決最大給藥量的問(wèn)題。四、給藥周期長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)的給藥周期 長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)的給藥周期 臨床療程 長(zhǎng)期毒性給藥周期 嚙齒類動(dòng)物 非嚙齒類動(dòng)物o 1周 2周 2周 2周 1個(gè)月 1個(gè)月 1個(gè)月 3個(gè)月 3個(gè)月 3個(gè)月 6個(gè)月 6個(gè)月 3個(gè)月 6個(gè)月 9個(gè)月o 對(duì)于一些慢性病需長(zhǎng)期反復(fù)應(yīng)用的藥物，長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)則要求根據(jù)臨床實(shí)際用藥的療程，按照最長(zhǎng)試驗(yàn)周期進(jìn)

25、行試驗(yàn)，即觀察大鼠給藥6個(gè)月、犬給藥9個(gè)月的長(zhǎng)期毒性試驗(yàn) o 五、指標(biāo)選擇 o 一般狀態(tài)、血液學(xué)、血液生化學(xué)、尿常規(guī)、主要臟器的病理組織檢查 o 1、血液學(xué)指標(biāo)、血液學(xué)指標(biāo)o 紅細(xì)胞計(jì)數(shù) 血紅蛋白o(hù) 紅細(xì)胞容積 平均紅細(xì)胞容積o 平均紅細(xì)胞血紅蛋白o(hù) 平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度o 網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)o 白細(xì)胞計(jì)數(shù)及其分類o 血小板計(jì)數(shù)o 凝血時(shí)間o 骨髓涂片o 2、血液生化學(xué)指標(biāo)、血液生化學(xué)指標(biāo) 天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶 丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶 堿性磷酸酶 -谷氨酰轉(zhuǎn)移酶 尿素氮、肌酐、總蛋白、白蛋白、血糖 總膽紅素、總膽固醇、甘油三酯、 （鈉離子濃度、鉀離子濃度、氯離子濃度、肌酐磷酸激酶）3、非嚙齒類動(dòng)物尿液

26、分析指標(biāo)：尿液外觀、比重、ph值、尿糖、尿蛋白、尿膽紅素、尿膽原、酮體、尿液沉渣的顯觀察o 4、長(zhǎng)期毒性研究中需稱重并計(jì)算臟器系數(shù)的器官： 腦、心臟、肝臟、腎臟、腎上腺、胸腺、脾臟、雄性動(dòng)物睪丸、雄性動(dòng)物附睪、雌性動(dòng)物卵巢、雌性動(dòng)物子宮o 5、嚙齒類動(dòng)物需進(jìn)行病理組織學(xué)檢查的組織：腦（大腦、小腦、腦干）、脊髓（頸、胸、腰段）、垂體、胸腺、甲狀腺、甲狀旁腺、食管、唾液腺、胃、小腸和大腸、肝臟、胰腺、腎臟、腎上腺、脾臟、心臟、氣管、肺、主動(dòng)脈、雄性動(dòng)物睪丸、雄性動(dòng)物附睪、雌性動(dòng)物子宮、雌性動(dòng)物卵巢、雌性動(dòng)物乳腺、雄性動(dòng)物前列腺、膀胱、坐骨神經(jīng)、骨髓、給藥局部、淋巴結(jié)（包括給藥局部淋巴結(jié)、腸系膜淋巴

27、結(jié)）o 6、非嚙齒類動(dòng)物需進(jìn)行病理組織學(xué)檢查的組織： 腦（大腦、小腦、腦干）、脊髓（頸、胸、腰段）、垂體、胸腺、甲狀腺、甲狀旁腺、食管、唾液腺、胃、小腸和大腸、肝臟、膽囊、腎臟、腎上腺、脾臟、胰腺、氣管、肺、主動(dòng)脈、心臟、雄性動(dòng)物附睪、雄性動(dòng)物睪丸、雌性動(dòng)物卵巢、雌性動(dòng)物子宮、雄性動(dòng)物前列腺、雌性動(dòng)物乳腺、坐骨神經(jīng)、膀胱、視神經(jīng)、給藥局部、骨髓、淋巴結(jié)（包括給藥局部淋巴結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)）o 六、六、恢復(fù)期恢復(fù)期 o 了解毒性反應(yīng)的可逆程度和可能出現(xiàn)的遲發(fā)性反應(yīng) o 停藥后2-6周。o 某些檢查指標(biāo)出現(xiàn)異常，可將恢復(fù)期相應(yīng)延長(zhǎng)o 七、結(jié)果的判斷七、結(jié)果的判斷o 應(yīng)事實(shí)求是地科學(xué)地分析結(jié)果，報(bào)告毒性反應(yīng)出現(xiàn)和恢復(fù)的時(shí)間，分析有無(wú)蓄積的情況 o 沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，不等于沒(méi)有生理學(xué)意義，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義也不等于有生物學(xué)意義 o 要有本實(shí)驗(yàn)室的背景資料中藥的特殊毒理學(xué)研究 包括致突變性、致癌性、生殖毒性、致敏性、依賴性。 其他毒性研究o 一