總論第四章藥物的鑒別試驗

1、第四章 藥物的鑒別試驗藥物分析學藥物分析學 總論總論本章要求v 掌握鑒別試驗的目的和常用的鑒別方法掌握鑒別試驗的目的和常用的鑒別方法v 熟悉鑒別試驗的項目和分析方法學驗證熟悉鑒別試驗的項目和分析方法學驗證v 了解一般鑒別試驗的方法了解一般鑒別試驗的方法什么是藥物的鑒別試驗？v根據(jù)藥物的分子結構、理化性質，采用化學、物理根據(jù)藥物的分子結構、理化性質，采用化學、物理化學或生物學方法來檢驗藥物，了解所要檢驗的藥化學或生物學方法來檢驗藥物，了解所要檢驗的藥物是物是哪一類、哪一種藥物哪一類、哪一種藥物評價藥品質量的三種分析手段：評價藥品質量的三種分析手段：鑒別鑒別（identificationident

2、ification）檢查（檢查（test for puritytest for purity）含量測定（含量測定（assayassay）首項任務首項任務藥物的真?zhèn)嗡幬锏恼鎮(zhèn)蝪鑒別真?zhèn)舞b別真?zhèn)巫C實證實貯藏在貯藏在有標簽容器中的藥物有標簽容器中的藥物是否是否為其所標示的藥物為其所標示的藥物 判斷已知藥物的真?zhèn)闻袛嘁阎幬锏恼鎮(zhèn)蝪注意區(qū)分：注意區(qū)分： 藥物的鑒別試驗藥物的鑒別試驗判斷已知藥物的真?zhèn)闻袛嘁阎幬锏恼鎮(zhèn)?化學中的定性分析化學中的定性分析鑒別未知物、全分析鑒別未知物、全分析 不足以確證其結構去粗取精、去偽存真 確認結構是否正確物理常數(shù)測定法物理常數(shù)測定法化學鑒別法化學鑒別法光譜鑒別法光譜鑒

3、別法色譜鑒別法色譜鑒別法顯微鑒別法顯微鑒別法生物學法生物學法常見的鑒別方法鑒別鑒別項目項目性狀性狀(description)(description) 鑒別鑒別(identification)(identification) 一般鑒別試驗一般鑒別試驗 專屬鑒別試驗專屬鑒別試驗 外觀、溶解度、物理常數(shù)外觀、溶解度、物理常數(shù)包括：包括： 相對密度、餾程、熔點、凝點、比旋度、相對密度、餾程、熔點、凝點、比旋度、 折光率、折光率、黏度、酸值、皂化值、羥值、碘值、吸收系數(shù)黏度、酸值、皂化值、羥值、碘值、吸收系數(shù)即判斷真?zhèn)渭磁袛嗾鎮(zhèn)斡址从臣兌扔址从臣兌鹊谝还?jié)第一節(jié) 物理常數(shù)測定法物理常數(shù)測定法 性狀性狀-

4、反映了藥物特有的物理性質，包括反映了藥物特有的物理性質，包括: :（外觀、溶解度、（外觀、溶解度、物理常數(shù)物理常數(shù)）初熔初熔全熔全熔 初熔初熔 樣品開始局部液化、出現(xiàn)明顯液滴樣品開始局部液化、出現(xiàn)明顯液滴 全熔全熔 樣品全部液化樣品全部液化1 熔點熔點固體熔化成液體的溫度固體熔化成液體的溫度熔融同時分解的溫度熔融同時分解的溫度自初熔至全熔的一段溫度自初熔至全熔的一段溫度 中國藥典收載有三種測定方法中國藥典收載有三種測定方法第一法：測定易粉碎的固體藥品第一法：測定易粉碎的固體藥品第二法：測定不易粉碎的固體藥品第二法：測定不易粉碎的固體藥品第三法：測定凡士林或其他類似物質第三法：測定凡士林或其他類

5、似物質要求報告要求報告初熔初熔和和全熔全熔 雌二醇雌二醇熔點：本品的熔點為熔點：本品的熔點為175175180180；維生素維生素C C熔點測定：本品的熔點為熔點測定：本品的熔點為190190192192， 熔融同時分解。熔融同時分解。例子 t tDD = = 100 / C100 / CL L2 比旋度比旋度 在一定波長與溫度下，偏振光透過長在一定波長與溫度下，偏振光透過長1dm且每且每1mL中含有旋光性物質中含有旋光性物質1g1g的溶液時測得的旋光度。的溶液時測得的旋光度。 作用：反映手性藥物特性及其純度的主要指標，用作用：反映手性藥物特性及其純度的主要指標，用以區(qū)別藥品、檢查純度或測定制

6、劑的含量。以區(qū)別藥品、檢查純度或測定制劑的含量。例子ChP 0 .535 .5220DOCH2OHOHOHOHHOH2O葡萄糖葡萄糖2021-10-3111加酸、弱堿或加熱可加速加酸、弱堿或加熱可加速 、 兩種異構體達到兩種異構體達到旋光平衡旋光平衡ChP采用加氨試液加速平衡的到達采用加氨試液加速平衡的到達 EclA 摩爾吸收系數(shù)摩爾吸收系數(shù) C= 1mol/Ll= 1cm百分吸收系數(shù)百分吸收系數(shù)%1cm1EC=1%(g/100ml)l= 1cm 在給定波長、溶劑和溫度等條件下，吸光物質在在給定波長、溶劑和溫度等條件下，吸光物質在單位濃度、單位液層厚度時的吸收度單位濃度、單位液層厚度時的吸收度

7、不僅可以用來考察原不僅可以用來考察原料藥的質量，還是料藥的質量，還是UV測定含量的依據(jù)測定含量的依據(jù)3 3 吸收系數(shù)吸收系數(shù) 維生素維生素B1B1的吸收系數(shù)測定的吸收系數(shù)測定：246nm246nm波長處測定波長處測定吸光度，吸收系數(shù)應為吸光度，吸收系數(shù)應為406436。（調整濃度使供試液的吸光度在（調整濃度使供試液的吸光度在0.30.7之間）之間）例子第二節(jié)第二節(jié) 化學鑒別法化學鑒別法顏色變化顏色變化沉淀生成沉淀生成氣體生成氣體生成熒光反應熒光反應測定生成物熔點測定生成物熔點v特點：特點：操作簡便、快速、現(xiàn)象明顯，實驗成本低，操作簡便、快速、現(xiàn)象明顯，實驗成本低，應用廣，應用廣， 但專屬性比儀

8、器分析法差但專屬性比儀器分析法差三氯化鐵三氯化鐵呈色反應呈色反應-含有含有酚羥基酚羥基或能產生酚羥基；或能產生酚羥基；重氮化重氮化- -偶合偶合顯色反應顯色反應-具有或水解后有具有或水解后有芳伯氨基芳伯氨基；黃體酮黃體酮的專屬反應的專屬反應-甲酮基甲酮基顯藍紫色特征；顯藍紫色特征；維生素維生素C C的的2 2，6-6-二氯靛酚反應二氯靛酚反應-烯二醇烯二醇具有還原性，具有還原性，氧化劑鹽酸褪去氧化劑鹽酸褪去顏色變化顏色變化-指供試品溶液中加入適當?shù)脑噭┤苤腹┰嚻啡芤褐屑尤脒m當?shù)脑噭┤芤?，在一定條件下進行反應，生成易于觀測的液，在一定條件下進行反應，生成易于觀測的 有色產物或顏色褪去有色產物或顏

9、色褪去與重金屬離子的沉淀與重金屬離子的沉淀反應反應-在一定條件下，藥物在一定條件下，藥物( (酰胺、含酰胺、含N N雜環(huán)、生物堿、巴比妥雜環(huán)、生物堿、巴比妥) )和重金屬離子反應，和重金屬離子反應，生成不同形式的沉淀；生成不同形式的沉淀；與氨制硝酸銀的與氨制硝酸銀的沉淀反應沉淀反應-還原性藥物如具有還原性藥物如具有C C1717-醇酮基的腎上腺皮質激素，反應生成醇酮基的腎上腺皮質激素，反應生成黑色銀沉淀黑色銀沉淀沉淀生成沉淀生成-指供試品溶液中加入適當?shù)脑噭┤苤腹┰嚻啡芤褐屑尤脒m當?shù)脑噭┤芤?，在一定條件下進行反應，生成易于觀測的液，在一定條件下進行反應，生成易于觀測的 不同顏色的沉淀不同顏色的

10、沉淀v一般鑒別試驗一般鑒別試驗 依據(jù)依據(jù)某一類某一類 藥物的化學結構或理化性質的特征，通藥物的化學結構或理化性質的特征，通過過化學反應化學反應來鑒別藥物的真?zhèn)蝸龛b別藥物的真?zhèn)巫⒁鈪^(qū)分注意區(qū)分專屬鑒別試驗專屬鑒別試驗根據(jù)根據(jù)每一種每一種藥物化學結構的特點藥物化學結構的特點和性質，選用某些和性質，選用某些特有的特有的靈敏的靈敏的定性反應，來鑒別藥物的真?zhèn)味ㄐ苑磻瑏龛b別藥物的真?zhèn)我话汨b別試驗一般鑒別試驗專屬鑒別試驗專屬鑒別試驗注意：某一項鑒別試驗只能表示藥物的注意：某一項鑒別試驗只能表示藥物的某一特征，某一特征，絕不能將其作為判斷的唯一依據(jù)絕不能將其作為判斷的唯一依據(jù)強調強調區(qū)別不同類別的藥物區(qū)別

11、不同類別的藥物區(qū)別各個藥物單體區(qū)別各個藥物單體 有機藥物有機藥物-采用典型的采用典型的官能團官能團反應反應 無機藥物無機藥物-根據(jù)其組成的根據(jù)其組成的陰離子和陽離子陰離子和陽離子 的特殊反應的特殊反應v一般鑒別試驗一般鑒別試驗有機氟化物類有機氟化物類丙二酰脲類丙二酰脲類芳香第一胺類芳香第一胺類有機酸鹽有機酸鹽托烷生物堿類托烷生物堿類有機氟化物的鑒別n有機破壞：有機破壞：樣品經氧瓶燃燒法破壞，被堿性溶液吸收成樣品經氧瓶燃燒法破壞，被堿性溶液吸收成為無機氟化物為無機氟化物n鑒別反應：鑒別反應：與與茜素氟藍、硝酸亞鈰茜素氟藍、硝酸亞鈰在在pH4.3pH4.3溶液中形成溶液中形成藍紫色絡合物藍紫色絡合

12、物反應原理：OOO HO HFC H NC H C H C O O HC O O HC e3+pH 4.3OOO HOC H NC H C H C O OC O OC eFO H（ 藍 紫 色 ）（ 茜 素 氟 藍 ）水楊酸鹽三氯化鐵反應三氯化鐵反應n在在中性或弱酸性中性或弱酸性條件下，水楊酸和試液生成配條件下，水楊酸和試液生成配位化合物，在中性時呈位化合物，在中性時呈紅色紅色，弱酸性時呈，弱酸性時呈紫色紫色。n加稀加稀HClHCl，即析出，即析出白色沉淀白色沉淀；分離，沉淀溶于醋；分離，沉淀溶于醋酸銨溶液酸銨溶液。反應原理：COOHOH64FeCl3+COO-O-2Fe3Fe12HCl202

13、1-10-3121酒石酸鹽酒石酸鹽 銀鏡反應銀鏡反應 取供試品的中性溶液，置潔凈的試管中，加氨制取供試品的中性溶液，置潔凈的試管中，加氨制硝酸銀試液數(shù)滴，置水浴中加熱，硝酸銀試液數(shù)滴，置水浴中加熱，銀銀即游離并附即游離并附在在試管內壁成銀鏡試管內壁成銀鏡。 反應原理：反應原理：CHCHCOOHCOOHHOHO2 Ag(NH3)2OH2Ag + CCCOONH4COONH4HOHONH32H2O2 無機藥物無機藥物-陰、陽離子的特殊反應陰、陽離子的特殊反應 包括：鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鋇鹽、銨鹽、硫酸鹽、硝酸包括：鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鋇鹽、銨鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、氯化物等離子的鑒別鹽、磷酸鹽、氯

14、化物等離子的鑒別 鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽的焰色反應的焰色反應 取鉑絲，用鹽酸濕潤后，蘸取供試品，在無色取鉑絲，用鹽酸濕潤后，蘸取供試品，在無色火焰中燃燒，火焰即顯各離子的特征顏色火焰中燃燒，火焰即顯各離子的特征顏色 測定原理測定原理 鈉火焰光譜：鈉火焰光譜：589.0nm589.0nm、589.6nm589.6nm鮮黃色鮮黃色 鉀火焰光譜：鉀火焰光譜：766.49nm766.49nm、769.90nm769.90nm 紫色紫色 鈣火焰光譜：鈣火焰光譜：622nm622nm、554nm554nm、442.67nm442.67nm與與602 nm602 nm顯磚紅色顯磚紅色銨鹽銨鹽鑒別方

15、法鑒別方法 取供試品，取供試品， 加過量加過量氫氧化鈉試液氫氧化鈉試液，加熱，即分解，發(fā)生，加熱，即分解，發(fā)生氨臭氨臭； 遇濕潤的遇濕潤的紅色石蕊試紙紅色石蕊試紙，能使之，能使之變藍變藍，并能使，并能使硝酸亞汞硝酸亞汞試液濕潤的濾紙顯黑色試液濕潤的濾紙顯黑色測定原理：測定原理：NH4+OH-NH3H2ONH34Hg2(NO3)2H2OOHgHgNH2NO32Hg3NH4NO32氯化物氯化物 鑒別鑒別 供試液供試液 硝酸硝酸 硝酸銀硝酸銀 白色白色 白色白色 氨試液氨試液沉淀溶解沉淀溶解 硝酸硝酸 白色白色硫酸鹽硫酸鹽 鑒別鑒別 供試液供試液 氯化鋇氯化鋇 白色白色 白色白色 硝酸（鹽酸）硝酸（

16、鹽酸） 沉淀不溶沉淀不溶注注：一般鑒別試驗只能證實是：一般鑒別試驗只能證實是某一類某一類藥物，藥物， 不能證實是不能證實是某一種某一種藥物。藥物。UV鑒別法鑒別法IR鑒別法鑒別法NIR鑒別法鑒別法AAS鑒別法鑒別法NMR鑒別法鑒別法MS鑒別法鑒別法XRD鑒別法鑒別法紫外紫外近紅外近紅外紅外紅外原子吸收原子吸收核磁共振核磁共振質譜法質譜法X射線衍射射線衍射第三節(jié)第三節(jié) 光譜鑒別法光譜鑒別法紫外光譜鑒別法紫外光譜鑒別法（UV法）法）紫外光譜相同的不一定是同一種物質紫外光譜相同的不一定是同一種物質紫外吸收光譜：分子價電子能級躍遷。紫外吸收光譜：分子價電子能級躍遷。 光譜較光譜較簡單、平坦簡單、平坦，

17、曲線變化不大。，曲線變化不大。波長范圍：波長范圍：100-800 nm. (1) 遠紫外光區(qū)遠紫外光區(qū): : 100-200nm (2) 近紫外光區(qū)近紫外光區(qū): : 200-400nm (3) 可見光區(qū)可見光區(qū): : 400-800nm特點：特點：操作簡便、快速、應用廣，操作簡便、快速、應用廣， 但用作鑒別的但用作鑒別的專屬性專屬性 不如不如 紅外光譜紅外光譜儀器儀器 紫外紫外-可見分光光度計可見分光光度計general processgeneral process光源光源單色器單色器樣品室樣品室檢測器檢測器顯示顯示美法侖 核對吸收光譜的特征參數(shù)核對吸收光譜的特征參數(shù) maxmax，或同時核對

18、，或同時核對minmin 核對核對maxmax及其及其A A 核對核對maxmax、minmin及肩峰及肩峰 規(guī)定規(guī)定 和比較和比較A A1 1/A/A2 2 對照品比較法對照品比較法12常用的測定方法：常用的測定方法：例例 ChPChP（20102010）鹽酸布比卡因鹽酸布比卡因的鑒別：的鑒別： 取本品，精密稱定，按干燥品計算，加取本品，精密稱定，按干燥品計算，加0.01ml/L0.01ml/L鹽酸溶液溶解并定量稀釋成每鹽酸溶液溶解并定量稀釋成每mLmL中中約含約含0.40mg0.40mg的溶液，照紫外的溶液，照紫外- -分光光度法測定分光光度法測定，在，在263263與與271nm271n

19、m的波長處有的波長處有最大吸收最大吸收；其；其吸吸收度收度分別為分別為0.530.530.580.58與與0.430.430.480.48注意溶劑的種類、溶液注意溶劑的種類、溶液pH及濃度等及濃度等注意儀器的校正和檢定注意儀器的校正和檢定例例 ChPChP（20102010）維生素維生素B2B2的鑒別：的鑒別： 取含量測定項下的溶液，照分光光度法測取含量測定項下的溶液，照分光光度法測定，在定，在267267、375375與與444nm444nm的波長處有最大吸的波長處有最大吸收；在收；在375375與與267nm267nm處的處的吸收度比值吸收度比值應為應為0.310.310.330.33；在

20、；在444444與與267nm267nm處的處的吸收度比值吸收度比值應為應為0.360.360.390.39 USP USP 常采用常采用對照品法對照品法，將供試品與將供試品與對照品對照品按同按同法處理，在法處理，在200200400nm400nm波長范圍內掃描兩溶液，波長范圍內掃描兩溶液，要求兩者的要求兩者的吸收光譜一致吸收光譜一致。例例 西米替丁的鑒別：取供試品和對照品，分別加西米替丁的鑒別：取供試品和對照品，分別加0.05ml/L0.05ml/L硫酸溶液制成每硫酸溶液制成每mLmL中約含中約含12.512.5 g g的溶的溶液，照紫外液，照紫外- -分光光度法測定，兩者的分光光度法測定，

21、兩者的紫外吸收光紫外吸收光譜圖一致。譜圖一致。特征區(qū)指紋區(qū)幾乎沒有兩種化合物具有完全相同的光譜幾乎沒有兩種化合物具有完全相同的光譜紅外光譜鑒別法紅外光譜鑒別法 (IR)(IR)紅外光譜：分子振動和轉動能級躍遷。紅外光譜：分子振動和轉動能級躍遷。 每個基團一般都有相應的吸收峰，且特征性強。每個基團一般都有相應的吸收峰，且特征性強。三個區(qū)域：三個區(qū)域： (1) 近紅外光區(qū)近紅外光區(qū) (2) 中紅外光區(qū)中紅外光區(qū) 4000400 cm-1 (3) 遠紅外光區(qū)遠紅外光區(qū)特點：特點：專屬性強、準確度高，應用最廣泛專屬性強、準確度高，應用最廣泛n原料藥：原料藥：幾乎所有的原料藥都采用幾乎所有的原料藥都采用

22、IR鑒別鑒別n制劑：制劑：一般需前處理（溶劑提取法）后再采用一般需前處理（溶劑提取法）后再采用IR鑒別鑒別需考慮輔料干擾、晶型變化等影響需考慮輔料干擾、晶型變化等影響應用：應用：IR適用于組分單一、結構明確的藥物適用于組分單一、結構明確的藥物n 標準圖譜對照法標準圖譜對照法 （ChPChP、BPBP）要求按指定條件繪制供試品的紅外光吸收圖譜，與要求按指定條件繪制供試品的紅外光吸收圖譜，與藥品紅外光譜集藥品紅外光譜集中的相應對照圖譜對比，如果中的相應對照圖譜對比，如果關鍵譜帶的峰位、峰型、相對強度都一致時，即為關鍵譜帶的峰位、峰型、相對強度都一致時，即為同一種藥物同一種藥物n對照品比較法（對照品

23、比較法（USP）分別繪制供試品和對照品的紅外光譜圖，進行比對分別繪制供試品和對照品的紅外光譜圖，進行比對常用的測定方法：常用的測定方法：儀器：儀器：Bruker、Nicolet IR380光譜范圍：近紅外光譜范圍：近紅外/中紅外中紅外/遠紅外遠紅外分辨率：分辨率：0.9cm -1、0.5cm -1 IR200光譜范圍：光譜范圍：7800-375cm-1分辨率：分辨率：1cm -1傅里葉變換紅外光譜儀結構框圖傅里葉變換紅外光譜儀結構框圖干涉儀干涉儀光源光源樣品室樣品室檢測器檢測器顯示器顯示器繪圖儀繪圖儀計算機計算機干涉圖干涉圖光譜圖光譜圖FTS壓片法壓片法用于固體用于固體( (最常用最常用) )

24、糊法糊法用于固體用于固體膜法膜法用于液體用于液體溶液法溶液法用于液體用于液體試樣制備方法試樣制備方法硬度大、光滑硬度大、光滑利用物質各自的利用物質各自的特征色譜行為（特征色譜行為（R Rf f值或保值或保留時間留時間）進行鑒別試驗進行鑒別試驗 方法：供試品與方法：供試品與對照品對照品在相同條件下進行在相同條件下進行色譜分離，根據(jù)兩者色譜分離，根據(jù)兩者保留行為和檢測結果保留行為和檢測結果是否一致來驗證藥品的真?zhèn)问欠褚恢聛眚炞C藥品的真?zhèn)?第四節(jié)第四節(jié) 色譜鑒別法色譜鑒別法色色譜譜鑒鑒別別法法TLC鑒別法鑒別法HPLC鑒別法鑒別法GC鑒別法鑒別法 TLCTLC（Thin-layer chromatographThin-layer chromatograph） 一般采用一般采用對照品（或標準品）比較法對照品（或標準品）比較法，要求供試，要求供試品品斑點顏色、斑點顏色、RfRf值應與對照品斑點一致。值應與對照品斑點一致。 優(yōu)點：優(yōu)點：簡便、實驗成本低，應用最廣泛簡便、實驗成本低，應用最廣泛薄層色譜法薄層色譜法 供試對照Oll0比移值：比移值：0flRl組分遷移距離展開劑遷移距離 最佳范圍最佳范圍 0. 3 0. 5 可用范圍可用范圍 0. 2 0. 8 （High-performance liquid chrom